Summary
We beschrijven een werkwijze voor het induceren neutrofiele longontsteking door uitdaging om vernevelde lipopolysacharide door verneveling, te modelleren acute longbeschadiging. Daarnaast worden fundamentele chirurgische technieken long isolatie, tracheale intubatie en bronchoalveolaire lavage beschreven.
Abstract
Acute lung injury (ALI) is een ernstige ziekte die wordt gekenmerkt door alveolaire neutrofilie, met beperkte behandelingsmogelijkheden en een hoge mortaliteit. Experimentele modellen van ALI zijn sleutel in het verbeteren van ons begrip van de pathogenese van de ziekte. Lipopolysaccharide (LPS) afkomstig van grampositieve bacteriën induceert neutrofiele ontsteking in de luchtwegen en longen parenchym muizen. Efficiënte pulmonaire afgifte van verbindingen zoals LPS is echter moeilijk te realiseren. In de hier beschreven aanpak wordt pulmonaire toediening bij muizen bereikt door uitdaging om vernevelde Pseudomonas aeruginosa LPS. Opgelost LPS werd verstoven door een vernevelaar aangesloten op perslucht. Muizen werden blootgesteld aan een continue stroom van LPS aerosol in een plexiglas doos gedurende 10 minuten, gevolgd door 2 minuten conditioneren nadat de aerosol werd beëindigd. Tracheale intubatie en daaropvolgende bronchoalveolaire lavage, gevolgd door formaline perfusie werd vervolgens uitgevoerd, die het mogelijk maakt karakterisering van de steriele pulmonary ontsteking. Aerosolized LPS genereert een longontsteking gekenmerkt door alveolaire neutrofilie, gedetecteerd in bronchoalveolaire lavage en door histologische evaluatie. Deze techniek kan worden ingesteld tegen een kleine prijs met weinig apparatuur, en vereist een minimale training en expertise. Het belichtingssysteem kan dus routinematig worden uitgevoerd bij elk laboratorium, met het potentieel om ons begrip van longpathologie verbeteren.
Introduction
Lipopolysaccharide (LPS) is een celwand component van Gram-negatieve bacteriën 1. Uitdaging aan LPS is een goed gedocumenteerde model van acute longbeschadiging, een syndroom gekenmerkt door acute neutrofiele ontsteking en oedeem 2. Bovendien, pulmonaire neutrofiel is een kenmerk van chronische obstructieve longziekte (COPD) 3 en LPS uitdaging bij mensen werd gebruikt om het model COPD exacerbaties 4. Zo, experimentele modellen van LPS blootstelling zijn klinisch relevante en waardevolle instrumenten voor de menselijke pathologie te begrijpen.
Doel van de pulmonaire toediening van aërosol LPS hier beschreven om een neutrofiele ontstekingsreactie in de geleidende en luchtwegen, zonder systemische betrokkenheid genereren. Verscheidene technieken van LPS uitdaging zijn eerder beschreven. Intra-veneuze injectie van LPS is de meest gebruikte toedieningsweg. Hoewel deze techniek is gemakkelijk te bereiken, tHij primaire schade aan het endotheel, met secundaire vernietiging van de longepitheel volgende neutrofiel migratie naar de longen. Intra-veneuze toediening induceert ook systemische inflammatie 2, waarbij het ziektebeeld bemoeilijken in diermodellen. Systemische ontsteking in tegenstelling niet waargenomen met intratracheale toediening. Deze techniek is echter arbeidsintensief en vereist anesthetica en aanzienlijke training 5, 6. Bovendien pulmonaire depositie door deze wijze van toediening is afhankelijk van de ademhaling 7. Aldus wordt pulmonaire depositie beïnvloed door de diepte van anesthesie nodig voor de intra- tracheale toediening en differentiële depositie in de luchtwegen kan worden waargenomen. Daarentegen pulmonaire toediening met aërosol LPS vereist minimale training, en kan gemakkelijk worden bereikt op een groot aantal dieren met weinig of geen variatie tussen individuen 5, 8.Een recente studie bevestigt dat aerosolafgifte superieur is aan de intratracheaal inzake depositie die relevanter doses LPS induceren neutrofiele ontsteking met dit model 8.
Eerdere studies hebben aangetoond dat uitdaging aërosol Pseudomonas aeruginosa LPS genereert een sterke ontstekingsreactie in de luchtwegen lumen longparenchym, waaronder de alveolaire ruimten 9, 10. De ontsteking wordt gekenmerkt door een overwegend neutrofielen en aanwezigheid van longoedeem, en kan dus worden gebruikt om pathogenese van acute longbeschadiging te pakken en krijgen verdere kennis van de mechanismen die bijdragen aan ziekte pathologie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Het dier studies werden goedgekeurd door de Noordelijke Stockholm dierenwelzijn ethische commissie. De experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Zweedse wetgeving.
1. Het genereren van een LPS Aerosol
- Los 0,5 g gezuiverd P. aeruginosa LPS in 50 ml steriele zoutoplossing onder zacht schudden en controleer of ontbinding. Verdun 1 ml LPS opgelost in 9 ml steriele zoutoplossing tot een eindconcentratie van 1 mg / ml. Beschermen tegen licht met aluminiumfolie en bewaar bij -20 ° C.
- Ontdooi oplosbaar LPS in het donker bij kamertemperatuur en direct goed mengen voor gebruik.
- In een geventileerde niveau II biohazard kap, plaatst u een rode inlaat in een vernevelaar, en sluit de vernevelaar aan onder druk staande lucht in de ruimte via de slang van de fabrikant (beoordeling regeling presentatie van de experimentele apparaten in figuur 1).
LET OP: geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen, waaronder een half gezicht stuk herbruikbare respiratof met roetfilters, bril, handschoenen en beschermende kleding moet worden gebruikt in de loop van de blootstelling.
Figuur 1:. Schematische weergave van de experimentele toestellen voor het opwekken van een aërosol De inlaat van de vernevelaar aangesloten op een luchttoevoer. De uitlaat van de vernevelaar wordt eerst verbonden met een stromingsmeter via een 15,9 mm buis en een luchtfilter en luchttoevoer wordt op 5,0 l / m bij 2 kbar druk. De uitlaat is verbonden naast een plexiglas doos voorzien van dekseltjes en 5 mm gaten om drukopbouw te voorkomen.
- Verbind de uitlaat van de vernevelaar met een massa debietmeter via een luchtfilter. Sluit de massa flowmeter op een elektrische voeding.
- Stel de luchttoevoer naar 5 l / min, met de druk nog op een 1,0-2,0 bar.
- Verwijder de massa flowmeter enKoppel de luchttoevoer.
- Verbind de uitlaat van de vernevelaar een 15.9 mm buis, die vertakt en verbindt twee plexiglas dozen met de afmetingen: 150 x 163 x 205 mm, voorzien van afneembare deksels. Elke doos zou een 5 mm gat in de zijde tegenover de inlaat, om drukopbouw te voorkomen.
- Plaats maximaal 5 muizen in elke plexiglas doos en sluit de deksels.
- Open de vernevelaar en vul de insert met minstens 4 ml LPS opgelost in steriele zoutoplossing of voertuig alleen (steriele zoutoplossing; het volume mag niet groter zijn dan 8 ml). Opnieuw Sluit de inlaat van de luchttoevoer.
- Laat de aerosol te stromen in de gesloten plexiglas dozen voor 10 min. Permanent toezicht op de dieren. Zorg ervoor dat de luchttoevoer blijft stevig op de inlaat van de vernevelaar.
- Koppel de luchttoevoer. Bij gesloten deksel, laat de dieren in de plexiglas dozen gedurende 2 min.
- Open de deksels en zorgen voor de aerosol te verspreiden, en de terugkeer van de dieren naar thij kooien. Als de dieren lijken nat, leg de kooien op een verwarming pad ingesteld op laag vuur, om onderkoeling te voorkomen.
- Toezicht houden op de dieren onafgebroken gedurende de eerste 30 minuten, en daarna om de 2 uur voor de eerste 6 uur. De dieren moeten normale ademhalingspatroon en activiteit vertonen tijdens en na de verneveling procedure.
2. Bronchoalveolaire lavage (BAL)
- Aan de experimentele eindpunt, diep verdoven van de dieren met isofluraan van kracht, zoals aanbevolen door het veterinaire personeel van uw instelling. Knijp de achterpoot te controleren op een terugtrekking reflex om voldoende diepte van de anesthesie te garanderen aan een grote operatie uit te voeren. Spray beneden de vacht van de dieren met 70% ethanol.
- Open de buik met een schaar en verbreken de aorta aan het dier exsanguinate. Leg een stukje weefsel over de buik om te genieten van het bloed.
- Follwing euthanasie, gebruik dan een enkele anterior-posterior snit van de schaar omde thorax bloot. Til de ribbenkast van de voorste punt van het borstbeen en het gebruik van de schaar om het membraan op de meest ventrale punt doorboren, zonder te snijden in een long kwab. Open de ribbenkast door het maken van twee sneden in de anterior-posterior richting (vergadering onder de kaak).
- Trek voorzichtig uit elkaar de ribbenkast behulp van een tang, en snijd de luchtpijp onder het strottenhoofd.
- Til de luchtpijp met de tang en verwijder de longen door het snijden van de ligamenten aansluiten van de lobben van de borstholte, en zachtjes te trekken door de vet- en hartweefsel.
- Plaats een polyethyleen buis (inwendige diameter: 0,58 mm; buitendiameter: 0,965 mm) in de luchtpijp en zet de buis met een koord van zijden draad.
- Bind de multilobe (de vier lobben van de rechter long) met zijden draad.
- Plaats een 23 gauge naald in de polyethyleen buis en injecteer langzaam 250 ul van ijskoude steriele PBS in de enkele kwab met een spuit van 1 ml.
- Tikt u voorzichtig de longen30 keer en het verzamelen van de vloeistof door de spuit. Herhaal de procedure met 200 ul PBS (ongeveer 300 ul PBS zal worden verhaald op de enkele kwab van de totale geïnjecteerde volume van 450 pi).
- Houd de bronchoalveolaire lavage vloeistof (BALF) op ijs, of sommen de BAL cellen onmiddellijk. Tel de cellen met een heamocytometer, met Turk oplossing om de cellen 11 te kleuren. Bereken het totale aantal cellen door het aantal cellen te vermenigvuldigen met de verdunningsfactor van de kleuroplossing en het volume binnen de getelde gebied van de heamocytometer.
- Bereid differentiële cel tellingen van cytocentrifuged cellen zoals elders 11 beschreven.
3. formalinefixatie van longweefsel voor histologische Assessment
- Verwijder de multilobe en snap-vries op droog ijs. Bewaren bij -80 ° C.
- Monteer een 60 ml spuit met de zuiger verwijderd op een metalen statief. Vul de spuit met 10% formaline voorde hoogte van 20 cm boven het laboratorium bankje, wat neerkomt op 20 cm van de constante druk.
- Sluit de 23 gauge naald bevestigd aan de luchtpijp naar de injectiespuit 60 ml via een kunststof buis met een klep om de stroom van formaline regelen.
- Insufflate de long kwab met formaline gedurende 5 min. Koppel de naald en verwijder deze samen met de polyethyleen buis van de luchtpijp, terwijl trekken aan de zijden draad aan de luchtpijp te sluiten en te behouden de druk in de longen.
- Dompel de long kwab in formaline en vast te stellen voor 24 uur bij 4 ° C.
- Was de vaste weefsel driemaal gedurende tenminste 20 minuten met 70% ethanol en drogen xyleen door de volgende behandeling (1 uur elk):
- 3x 70% ethanol
- 3x 95% ethanol
- 3x 100% ethanol
- 3x xyleen
- 1x (vloeibare) paraffine
- Insluiten uitgedroogd weefsel in paraffine, snijd in 4-5 micrometer secties, en vlek met hematoxyline en eosine om voor histologische evaluatie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uitdaging om vernevelde P. aeruginosa LPS levert meestal een duidelijke ontstekingsreactie lumen van de luchtwegen en alveolaire ruimte, gekenmerkt door een overwegend neutrofielen zowel vroege als late tijdstippen.
Aerosolized LPS induceert pulmonale neutrofilie
C57BL / 6BY en BALB / c-muizen werden blootgesteld aan vernevelde P. aeruginosa LPS of voertuig alleen en neutrofielen werden in BALF opgesomd. Het totale celaantal in BALF van C57BL / 6BY muizen blootgesteld aan een aerosol gemaakt met vehikel alleen meestal rond of onder 200.000 cellen en de cellen bestaan uit 95-100% mononucleaire cellen, met slechts weinig lymfocyten (0.5-5%), en geen neutrofielen in de BALF (Figuur 2A-C). Muizen geprikkeld met LPS aërosol vertonen een verhoogde totale celaantal in BALF, meestal> 500.000 cellen na 6 uur. De celinfiltraten hoog blijft na 24 uur. De cellulaire profiel BALF wordt verschoven naar apredominance van neutrofielen (80-95%) na blootstelling aan LPS (Figuur 2B en C).
Figuur 2:. Pulmonale neutrofilie in C57BL / 6BY muizen geprikkeld met 1 mg / ml vernevelde LPS C57BL / 6BY muizen werden blootgesteld aan 1 mg / ml verstoven P. aeruginosa LPS of voertuig (zout, witte balk) alleen al voor 10 min. Bronchoalveolaire lavage (BAL) werd uitgevoerd na 6 uur en 24 uur en de leukocyten werden in BAL vloeistof (BALF) genoemd. (A) Totaal aantal cellen (TCN), (B) neutrofielen en (C) mononucleaire cellen (MNC) in BALF. Significante verschillen werden geanalyseerd middels niet-gepaarde t-testen. n = 3-4, * geeft p <0,05, ** geeft p <0,01.
Een vergelijkbare toename van ontstekingscellen in BALF waargenomen in LPS-uitdaging BALB / c-muizen (Figuur 3A (Figuur 3B en C).
Figuur 3:. Pulmonale neutrofilie in BALB / c muizen geprikkeld met 1 mg / ml vernevelde LPS BALB / c muizen werden blootgesteld aan 1 mg / ml verstoven P. aeruginosa LPS of voertuig (zout, witte balk) alleen al voor 10 min. Bronchoalveolaire lavage (BAL) werd uitgevoerd na 6 uur en 24 uur en de leukocyten werden in BAL vloeistof (BALF) genoemd. (A) Totaal aantal cellen (TCN), (B) neutrofielen en (C) mononucleaire cellen (MNC) in BALF. Significante verschillen werden geanalyseerd middels niet-gepaarde t-testen. n = 3, ** geeft p <0,01, *** geeft p <0,001.
Vergelijkbare inflammatoire cel profiel een d pulmonale neutrofiel waargenomen met verneveling van 5 mg / ml LPS (Figuur 4A-C) en intranasale afgifte van LPS, zoals eerder gemeld 12,13.
Figuur 4:. Pulmonale neutrofilie in BALB / c muizen geprikkeld met 5 mg / ml vernevelde LPS BALB / c muizen werden blootgesteld aan 5 mg / ml verstoven P. aeruginosa LPS of voertuig (zout, witte balk) alleen al voor 10 min. Bronchoalveolaire lavage (BAL) werd uitgevoerd na 24 uur en de leukocyten werden in BAL vloeistof (BALF) genoemd. (A) Totaal aantal cellen (TCN), (B) neutrofielen en (C) mononucleaire cellen (MNC) in BALF. Significante verschillen werden geanalyseerd middels niet-gepaarde t-testen. n = 3, *** geeft p <0,001.
Pulmonale lokalisatie van neutrofielen in LPS-uitgedaagd
NHOUD "> neutrofielen waargenomen in de epitheliale submucosa, evenals ruimtes de geleidende luchtwegen en bloedvaten van LPS-uitgedaagd muizen (Figuur 5) omgeving. Verspreide neutrofielen ook gedetecteerd in het parenchym en alveolaire gebied.
Figuur 5:. Pulmonale lokalisatie van neutrofielen in LPS-muizen uitgedaagd hematoxyline en eosine kleuring van met formaline gefixeerde longweefsel van (A) C57BL / 6BY muizen blootgesteld aan alleen vehiculum of (B) 1 mg / ml vernevelde LPS gedood na 6 uur of (C) 24 uur. Pijl geeft een neutrofielen. Balk geeft 200 pm. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.
Krachtvatie van neutrofielen chemoattractants in BALF
De totale eiwitgehalte in de BALF van LPS-uitgedaagd muizen verhoogd vergeleken met muizen blootgesteld aan zoutoplossing (figuur 6). Ook de expressie van neutrofielen chemoattractanten chemokine (CXC motief) liganden (CXCL) 1 en CXCL2 verhoogd in LPS-uitgedaagd muizen 10 (figuur 7A en B).
Figuur 6:. Verhoogde totale eiwitconcentratie in bronchoalveolaire lavage vloeistof (BALF) van LPS-uitgedaagd C57BL / 6BY muizen totaal eiwitgehalte in BALF muizen uitgedaagd tot 1 mg / ml vernevelde LPS of blootstelling voertuig (zout, witte balk) alleen was gemeten door spectrofotometrische analyse. Significante verschillen werden geanalyseerd middels niet-gepaarde t-testen. n = 3-4, ** geeft p <0,01.
Figuur 7: I opgedreven expressie van CXCL1 en CXCL2 in bronchoalveolaire lavage vloeistof (BALF) van LPS-uitgedaagd muizen expressie van (A) CXCL1 en (B) CXCL2 in BALF muizen uitgedaagd tot 1 mg / ml vernevelde LPS of blootstelling aan het voertuig. (zout, witte balk) alleen gekwantificeerd met behulp van ELISA. Significante verschillen werden geanalyseerd middels niet-gepaarde t-testen. n = 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Aerosolized LPS genereert een ontstekingsreactie in de luchtwegen, gekenmerkt door neutrofielen in epitheel submucosa, ruimten rond de geleidende luchtwegen, alsmede de alveolaire ruimten. Dit, samen met de verhoogde totale eiwitgehalte in BALF, indicatief plasmalekkage, vertegenwoordiger van de pathologie van acute longbeschadiging. Als LPS induceert een steriele ontsteking, de reactie is onafhankelijk van de adaptieve immuunrespons, en er zijn beperkingen voor de relevantie voor bacteriële infecties. De techniek kan echter worden gebruikt om inflammatoire mechanismen ontleden door uitsluiting adaptieve immuunreacties.
Hoewel de werkwijze is eenvoudig en gemakkelijk worden aangepast aan verschillende wetenschappelijke vragen, de keuze van de vernevelaar en leidingen kritisch. De afzetting van LPS en de daaruit voortvloeiende neutrofilie moet worden gevalideerd met inhammen, verstuivers en leidingen anders dan wat hier wordt beschreven. Bovendien, zoals minder vaak muis stregens kunnen verschillende reacties op LPS weer te geven, moet de optimale dosis van LPS worden bepaald voor elke stam. Bovendien, de neutrofiele ontsteking gemaakt met aërosol LPS is vergelijkbaar met de ontsteking geïnduceerd door intranasale afgifte van LPS, zoals waargenomen door anderen 12, 13. Hoewel intranasale toediening gemakkelijk wordt uitgevoerd, de methodologie vereist anesthetica en kan mogelijk de microbiële flora van de neusholte introduceren in de longen, zoals de neusholte is niet steriel en de techniek vereist een groot volume medium.
Naast de relevantie voor acute longbeschadiging kan de techniek verder worden ontwikkeld om meerdere uitdagingen aerosolized LPS omvatten. De werkwijze kan dus worden gebruikt om pathogene mechanismen te bestuderen in de chronische ontsteking van COPD, die wordt geassocieerd met persisterende neutrofilie 14, samen met terugkerende bacteriële infecties of permanent microbiële kolonisatie
Uitdaging met vernevelde LPS kan worden ingesteld tegen een kleine prijs met weinig apparatuur en vereist een minimale training. Bovendien kan de techniek dus routinematig uitgevoerd op grote schaal elk laboratorium, met weinig of geen variatie tussen individuen en derhalve superieur aan andere routes van pulmonaire toediening.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Abraham Roos heeft een docent vergoeding van Boehringer Ingelheim, reisbeurzen van AstraZeneca R & D en een onderzoeksbeurs van AstraZeneca R & D ontvangen. Magnus Nord is een full-time medewerker van AstraZeneca R & D en heeft onderzoekssubsidies ontvangen van AstraZeneca R & D. Johan Grunewald en Tove Berg zijn co-onderzoekers op een niet-verwante onderzoeksproject gefinancierd door AstraZeneca R & D.
Acknowledgments
We willen graag Kerstin Thim (AstraZeneca, Lund, Zweden), Benita Dahlberg en Dr. Anders Eklund (Karolinska Institutet, Stockholm, Zweden), evenals Dr. Martin Stampfli (McMaster University, Hamilton, ON, Canada) bedanken voor bekwame hulp en deskundig advies.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Purified Pseudomonas aeruginosa LPS | Sigma-Aldrich | Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used. | |
| Pari LC sprint star nebulizer | PARI Respiratory Equipment Inc. | 023G1250 | |
| TSI mass flowmeter 4040 | TSI | 4040 | Alternative product from supplier may be used. |
| Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube | Sigma-Aldrich | Z685704 | Recomended brand. |
| Plexiglas boxes with removable lids | Custom built | N/A | 150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side). |
| 3M Half Facepiece Reusable Respirator | 3M | 7503 | Recomended brand. |
| 3M Advanced Particulate Filters (P100) | 3M | 2291 | Recomended brand. |
| Scissors | VWR | 233-1104 | Preferred scissors may be used. |
| Forceps | VWR | 232-1313 | Preferred forceps may be used. |
| Intramedic PE50 polyethylene tube | BD | 427411 | Recomended brand. |
| Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread | VWR | 95056-992 | Recomended brand. |
| 26 ½ gage needle | Alternative suppliers exist. | ||
| 1 ml BD slip-tip syringe, non-sterile |  BD |
301205 | Alternative suppliers exist. |
| 60 ml BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene | BD | 301035 | Alternative suppliers exist. |
| Fluka Hematoxylin-Eosin | Sigma-Aldrich | 3972 | Alternative suppliers exist. |
| Türk's solution | Merck Millipore | 109277 | |
| Table top centrifuge | Alternative manufacturers exist. | ||
| Cytospin 4 cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | Alternative centrifuge can be used. |
| HEMA-3 stat pack | Fisher Scientific | 23-123-869 | Alternative staining kits exists. |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | Alternative suppliers exist. |
References
- King, J. D., Kocincova, D., Westman, E. L., Lam, J. S. Review: Lipopolysaccharide biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa. Innate Immun. 15, 261-312 (2009).
- Grommes, J., Soehnlein, O. Contribution of neutrophils to acute lung injury. Mol Med. 17, 293-307 (2011).
- Pesci, A., et al. Inflammatory cells and mediators in bronchial lavage of patients with chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 12, 380-386 (1998).
- Hoogerwerf, J. J., et al. Lung Inflammation Induced by Lipoteichoic Acid or Lipopolysaccharide in Humans. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178, 34-41 (2008).
- Scheuchenzuber, W. J., Eskew, M. L., Zarkower, A. Comparative humoral responses to Escherichia coli and sheep red blood cell antigens introduced via the respiratory tract. Exp Lung Res. 13, 97-112 (1987).
- Asti, C., et al. Lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. I. Concomitant evaluation of inflammatory cells and haemorrhagic lung damage. Pulm Pharmacol Ther. 13, 61-69 (2000).
- Brand, P., et al. Total deposition of therapeutic particles during spontaneous and controlled inhalations. Journal of pharmaceutical sciences. 89, 724-731 (2000).
- Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trubel, H., Wang, C. Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation. Toxicology. 304, 158-166 (2013).
- Skerrett, S. J., et al. Role of the type 1 TNF receptor in lung inflammation after inhalation of endotoxin or Pseudomonas aeruginosa. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 276, L715-L727 (1999).
- Roos, A. B., et al. Lung epithelial-C/EBPbeta contributes to LPS-induced inflammation and its suppression by formoterol. Biochem Biophys Res Commun. 423, 134-139 (2012).
- Didon, L., et al. Lung epithelial CCAAT/enhancer-binding protein-beta is necessary for the integrity of inflammatory responses to cigarette smoke. Am J Respir Crit Care Med. 184, 233-242 (2011).
- Silverpil, E., et al. Negative feedback on IL-23 exerted by IL-17A during pulmonary inflammation. Innate Immunity. 19, 479-492 (2013).
- Mercer, P. F., et al. Proteinase-Activated Receptor-1, CCL2 and CCL7 Regulate Acute Neutrophilic Lung Inflammation. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. , (2013).
- Korkmaz, B., Horwitz, M. S., Jenne, D. E., Gauthier, F. Neutrophil Elastase, Proteinase 3, and Cathepsin G as Therapeutic Targets in Human Diseases. Pharmacological Reviews. 62, 726-759 (2010).
- Bafadhel, M., et al. Acute Exacerbations of COPD: Identification of Biological Clusters and Their Biomarkers. Am. J. Respir. Crit. Care Med. , 201104-200597 (2011).
- Hurst, J. R., Perera, W. R., Wilkinson, T. M. A., Donaldson, G. C., Donaldson, G. C., Wedzicha, G. C. Systemic and Upper and Lower Airway Inflammation at Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 173, 71-78 (2006).
- Rabe, K. F., et al. Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease: GOLD Executive Summary. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).
