Summary
Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.
Abstract
Akut akciğer hasarı (ALI) tedavi seçenekleri kısıtlı ve yüksek mortalite ile alveol nötrofilisi ile karakterize ciddi bir hastalıktır. ALI Deneysel modeller hastalığın patogenezinde anlayışımızı arttırmak anahtardır. Gram pozitif bakterilere türetilen Lipopolisakarid (LPS) nötrofilik hava yollarında inflamasyon ve farelerin akciğer parankimi neden olur. LPS gibi bileşiklerin etkin pulmoner şevki, Bununla birlikte, elde etmek zordur. Burada tarif edilen bir yaklaşımda, fareler pulmoner uygulama, aerosol, Pseudomonas aeruginosa, LPS meydan okumasının elde edilir. Çözünmüş LPS basınçlı hava bağlı bir püskürtücü ile aerosol edildi. Fareler, aerosol kesildikten sonra 2 dakika havalandırma ve ardından, 10 dakika boyunca bir pleksiglas kutuya LPS aerosol sürekli bir akışına maruz bırakılmıştır. Formalin perfüzyon ardından entübasyon ve sonraki bronkoalveoler lavaj, sonraki steril p karakterizasyonu için olanak sağlayan, yapıldıulmonary inflamasyon. Aerosolize LPS bronkoal- lavaj ve histolojik değerlendirilmesi ile tespit alveol nötrofilisi ile karakterize bir akciğer iltihabı, üretir. Bu teknik birkaç aletleri ile küçük bir maliyetle kurmak ve minimal eğitim ve uzmanlık gerektirir. pozlama sistemi böylece rutin akciğer patolojisi anlayışımızı geliştirmek için potansiyele sahip, herhangi bir laboratuvarda yapılabilir.
Introduction
Lipopolisakarid (LPS), gram negatif bakterilerin 1 'in bir hücre duvarı bileşeni. LPS meydan akut akciğer hasarı, akut nötrofilik inflamasyon ve ödem 2 ile karakterize bir sendrom iyi belgelenmiş bir modeldir. Buna ek olarak, pulmoner nötrofilinin da KOAH alevlenme 4 modellemek için kullanılır olmuştur kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) 3, ve insanlarda LPS bir özelliğidir. Böylece, LPS maruz deneysel modeller klinik insan patoloji anlamak için ilgili ve değerli araçlardır.
Burada tarif edilen aerosol haline LPS'nin pulmoner yoldan amacı, sistemik katılımı olmadan iletken ve solunum yollarının bir nötrofilik inflamatuar yanıtı elde etmektir. LPS meydan okumasının çeşitli teknikleri, daha önce tarif edilmiştir. LPS'nin damardan zerk edilerek verilme yolu, en yaygın olarak kullanılan bir yoldur. Bu teknik, kolayca erişilebilir, ancak, tO birincil hasar akciğere nötrofil göç aşağıdaki pulmoner epitel ikincil yıkımı ile, endotel olduğunu. İçi venöz yönetimi de hayvan modellerinde klinik tabloyu komplike edebilir sistemik inflamasyon 2, uyarmaktadır. Sistemik inflamasyon içi trakeal için elde edilmemiştir tersidir. Bu teknik, bununla birlikte, emek yoğun ve anestezi hem de önemli bir eğitim 5, 6 gerektirir. Bundan başka, bu uygulama yoluyla pulmoner birikimi nefes 7 bağlıdır. Bu nedenle, pulmoner birikimi solunum yollarında içi trakeal yönetim ve değişken yerleştirme gözlenebilir için gerekli anestezinin derinliği ile etkilenir. Bunun aksine, aerosol haline getirilmiş LPS ile pulmoner uygulama minimum eğitim gerektirir ve kolayca küçük hayvanların çok sayıda ya da bireyler 5, 8 arasında bir varyasyon gerçekleştirilebilir.Yeni bir çalışmada, solunum hacmi birikimi ile ilgili içi trakeal yönlendirmek için üstün olduğunu, ve LPS'nin daha fazla dozları bu modele 8 nötrofilik enflamasyonu doğrulamaktadır.
Aerosol Pseudomonas aeruginosa LPS alveoller 9, 10 de dahil olmak üzere solunum yolu lümeni ve akciğer parankimi, belirgin bir inflamatuar yanıt oluşturur Önceki çalışmalar meydan göstermiştir. inflamasyon nötrofil ve pulmoner ödem varlığı, bir üstünlük kurmasıyla karakterize edilir ve bu nedenle, akut akciğer hasarı patogenezini ele almak ve hastalık patolojisine katkıda mekanizmaların daha ayrıntılı bilgi edinmek için kullanılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvan çalışmaları Kuzey Stockholm hayvan refahı etik kurulu tarafından onaylandı. Deneysel işlemler İsveç hukuka uygun olarak yapılmıştır.
1. Bir LPS aerosol üretimi
- S. saflaştırılarak 0.5 g çözülür Hafifçe çalkalama ile 50 ml steril tuzlu su içinde aeruginosa LPS ve çözünme edin. 1 mg / ml'lik nihai bir konsantrasyona kadar, 9 ml steril tuzlu su içinde LPS çözülmüş 1 ml seyreltin. -20 ° C'de alüminyum folyo ve mağaza ile ışıktan koruyun.
- Oda sıcaklığında, karanlıkta, çözünür LPS çözülme ve kullanım öncesinde de hemen karıştırın.
- Bir havalandırılmış seviye II biohazard kaput, bir püskürtücü içine kırmızı bir giriş eklemek, ve üretici (Şekil 1 deneysel cihazlar sunan yorum şeması) tarafından sağlanan boru aracılığıyla basınçlı oda havasına nebulizeri bağlayın.
DİKKAT: Uygun kişisel koruyucu ekipman, yarım yüz parça yeniden Respirat dahilveya partikül filtreleri, gözlük, eldiven ve koruyucu giysiler ile maruz kalma sırasında kullanılmalıdır.
Şekil 1:. Bir aerosolün üretilmesi için kullanılan deneysel cihazların şematik sunumu püskürtücü giriş hava kaynağına bağlanır. nebulizer çıkış önce 15,9 mm boru ve bir hava filtresi ve hava beslemesi ile bir akış ölçere bağlı olan 2 kbar basınçta 5.0 L / m ayarlanır. çıkış çıkarılabilir kapakları ve basınç birikmesini önlemek için 5 mm'lik delikleri ile donatılmış bir pleksiglas kutu bağlı yanındadır.
- Bir hava filtresi aracılığıyla bir kitle debi ölçer için nebulizatör çıkışını bağlayın. Bir elektrik kaynağına kitle debi ölçer bağlayın.
- 1.0-2.0 barda kalan basınç, 5 L / dk hava kaynağını ayarlayın.
- Kitle debimetre çıkarın veHava kaynağını ayırın.
- 150 x 163 x 205 mm, çıkarılabilir kapak ile donatılmış: ikiye bölen ve boyutları ile iki pleksiglas kutular bağlanan bir 15,9 mm tüp için nebulizatör çıkışını bağlayın. Her kutu basınç birikmesini önlemek için giriş karşı tarafında bulunan 5 mm'lik bir delik, olmalıdır.
- Her pleksiglas kutuya 5 fareler kadar yerleştirin ve kapaklarını kapatın.
- Nebülizatör açın ve sadece steril tuzlu su ya da aracı madde içinde eritilebilir, en az 4 mi LPS ile ekleme doldurun (steril tuzlu su, cilt 8 ml geçmemelidir). Hava kaynağına giriş yeniden bağlayın.
- Aerosol 10 dakika kapalı pleksiglas kutulara akmasına izin verin. Sürekli hayvanları izleyin. Emin hava besleme nebulizatör girişine sıkıca güvenli kalır emin olun.
- Hava kaynağını ayırın. Kapakları kapalı, hayvanlar 2 dakika pleksiglas kutulara kalsın.
- Kapaklarını açın ve aerosol dağıtmak için izin ve t hayvanların dönmekO kafesleri. Hayvanlar ıslak görünüyorsa, hipotermi önlemek için, düşük ısı ayarlı bir ısıtma yastığı kafesleri yerleştirin.
- İlk 30 dakika boyunca sürekli hayvanları izlemek, ve ilk 6 saat sonra her 2 saatte. Hayvanlar sırasında ve nebulization prosedürü sonra normal solunum paterni ve aktivite göstermelidir.
2. Bronkoalveoler Lavaj (BAL)
- Kurumunuzun veteriner personeli tarafından tavsiye edilen deneysel uç noktasında, derin etkisi izofluran ile hayvanları uyutmak. Majör cerrahi yapmak için anestezi yeterli derinlik sağlamak için bir geri çekilme refleksi kontrol etmek için arka pençe sıkıştırın. % 70 etanol ile hayvanların kürk aşağı püskürtün.
- Makas kullanırken karın açın ve hayvan asıl bulbus olfaktoryusları için aort sever. Kan emmek için karın üzerine doku parçası yerleştirin.
- Ötenazi follwing, makas tek ön-arka kesim kullanıntoraks maruz. Sternum ön ucu ile göğüs kafesi yukarı kaldırın ve herhangi bir akciğer lobunun içine kesmeden, en ventral noktada diyaframı delmek için makas kullanın. Ön-arka yönde iki kesim (çene altındaki toplantı) yaparak göğüs kafesi açın.
- Yavaşça forseps kullanarak göğüs kafesi dışında çekin ve gırtlak altında trakea kesti.
- Forseps ile trakea yukarı kaldırın ve göğüs boşluğuna lobu bağlayan ligament kesme ve hafifçe adipoz ve kardiyak doku tarafından çekerek akciğerleri kaldırmak.
- Bir polietilen tüp (: 0.58 mm; dış çap: iç çapı 0.965 mm) takın trakea içine ve ipek iplik bir dize ile tüp sabitleyin.
- Ipek iplik ile multilobe (sağ akciğerin dört lobu) kapalı kravat.
- Polietilen boru içine bir 23 gog iğne yerleştirin ve yavaşça 1 ml şırınga ile bir lob içine buz soğukluğunda steril PBS 250 ul enjekte edilir.
- Dikkatle akciğerleri dokunun30 kat ve şırınga yoluyla sıvının toplanması. 200 ul PBS ile işlemi tekrarlayın (yaklaşık 300 ul PBS 450 ul toplam enjekte birimden tek lob kurtarıldı olmalıdır).
- Buz üzerinde BAL sıvısında (BAL) tutun, ya da hemen BAL hücreleri numaralandırmak. Hücreleri 11 leke Türk çözümünü kullanarak, bir heamocytometer hücreleri sayın. Boyama çözeltisi seyreltme faktörü ve heamocytometer ve sayılan alanında hacmi ile hücrelerin sayısı çarpılarak toplam hücre sayısını hesaplayın.
- Başka bir yerde 11 açıklandığı gibi sitosantrifüjden geçirilidi hücrelerden farklı hücre sayımları hazırlayın.
Histolojik Değerlendirme Akciğer Doku 3. Formol Fixation
- Multilobe çıkarın ve ek-freeze kuru buz üzerinde. -80 ° C'de saklayın.
- Bir metal destek standı kaldırıldı piston ile 60 ml şırınga monte edin. % 10 formalin şırınga doldurunSabit basınç 20 cm temsil laboratuvar tezgah üstünde 20 cm, yüksekliği.
- Formalin akışını kontrol etmek için bir valf ile bir plastik tüp ile 60 ml şırınga trakea sabitlenmiş 23 gauge iğne bağlayın.
- 5 dakika boyunca formalin ile akciğer lobunun insuflasyon. İğneyi çıkarın ve ipek iplik çekerek trakea kapatmak ve akciğer basıncı korumak için ise trakea polietilen tüp ile birlikte çıkarın.
- Formalin akciğer lobu Batmak ve 4 ° C'de 24 saat saptamak.
- % 70 etanol ile en az 20 dakika boyunca sabit bir dokuya üç kez yıkayın ve aşağıdaki rejimi (1 saat her biri) ile ksilen dihidrat:
- 3x% 70 etanol
- 3x% 95 etanol
- 3x% 100 etanol
- 3x ksilen
- 1x (sıvı) parafin
- Hematoksilin ve eosin ile Embed susuz 4-5 mikron bölümleri kesilmiş parafin doku, ve leke histolojik değerlendirme için izin verir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Aerosollaştınlmış P. Mücadelesi aeruginosa LPS genellikle erken ve geç zaman noktalarında hem de nötrofillerin bir üstünlüğü ile karakterize solunum yolu lümeni ve alveollerde, belirgin bir inflamatuar yanıt verir.
Aerosol haline LPS pulmoner nötrofiliyi indükler
C57BL / 6BY ve BALB / c fareleri, aerosol P. maruz bırakıldı aeruginosa LPS veya tek başına araç ve nötrofiller BAL'da sayıldı. C57BL taşıyıcı ile oluşturulan bir aerosolün maruz / 6BY fareleri BAL'da toplam hücre sayısı, sadece, tipik olarak yaklaşık 200,000 ya da hücrenin altındadır ve hücreler sadece birkaç lenfositler (% 0.5-5) ile,% 95-100 mononükleer hücrelerden oluşur, ve BAL sıvısında hiçbir nötrofiller (Şekil 2A-C). Fareler daha sonra 6 saat, aerosol haline getirilmiş LPS sergi ile tipik haliyle> 500,000 hücre BAL sıvısında artan bir toplam hücre sayısı meydan. Hücre sızıntılar 24 saat sonra yüksek kalır. BAL'da hücresel profil ap doğru kaydırılırLPS uygulamasından sonra (Şekil 2B ve C) aşağıdaki nötrofil (% 80-95) olarak redominance.
Şekil 2:., 1 mg / ml LPS ile aerosol halindeki C57BL / 6BY fareler ile tehdit C57BL / 6BY farelerde nötrofili Pulmoner nötrofili 1 mg maruz / ml S. aerosol aeruginosa LPS veya tek başına 10 dakika araç (tuzlu, beyaz çubuk). Bronkoalveoler lavaj (BAL), 6 saat veya 24 saat sonra yapıldı ve lökositlerin BAL sıvısında (BAL) 'de numaralanmıştır. (A) Toplam hücre sayısı (TCN), (B), nötrofiller, ve (C) tek çekirdekli hücre (MNC)' de BALF. Önemli farklılıklar un-eşleştirilmiş t-testi kullanılarak analiz edildi. n = 3-4, *, p <0.05 gösterir ** <0.01 p gösterir.
BAL'da enflamatuar hücre kıyaslanabilir bir artış LPS BALB / c farelerinde de gözlenmiştir (Şekil 3A (Şekil 3B ve C) ile karşılaştırılabilir.
Şekil 3:., 1 mg / ml LPS, aerosol ile tehdit edilmiş BALB / c farelerinde nötrofili Pulmoner nötrofili BALB / c fareleri, 1 mg maruz / ml S. aerosol aeruginosa LPS veya tek başına 10 dakika araç (tuzlu, beyaz çubuk). Bronkoalveoler lavaj (BAL), 6 saat veya 24 saat sonra yapıldı ve lökositlerin BAL sıvısında (BAL) 'de numaralanmıştır. (A) Toplam hücre sayısı (TCN), (B), nötrofiller, ve (C) tek çekirdekli hücre (MNC)' de BALF. Önemli farklılıklar un-eşleştirilmiş t-testi kullanılarak analiz edildi. n = 3, **, p <0.01 gösterir *** <0.001 p gösterir.
Benzer inflamatuar hücre profili bir daha önce 12,13 bildirilen d pulmoner nötrofiliyi, 5 mg / ml LPS (Şekil 4A-C) püskürtülen ve LPS nasal boşluğa verilmesi ile görülmektedir.
Şekil 4:. 5 mg / ml, aerosol LPS meydan BALB / c farelerinde nötrofili Pulmoner nötrofili, BALB / c fareleri, 5 mg maruz / ml S. aerosol aeruginosa LPS veya tek başına 10 dakika araç (tuzlu, beyaz çubuk). Bronkoalveoler lavaj (BAL), 24 saat sonra yapıldı ve lökositlerin BAL sıvısında (BAL) 'de numaralanmıştır. BAL sıvısında (A) Toplam hücre sayısı (TCN), (B), nötrofiller, ve (C) tek çekirdekli hücre (MNC). Önemli farklılıklar un-eşleştirilmiş t-testi kullanılarak analiz edildi. n = 3 olduğunda, *** p <0.001 gösterir.
LPS meydan nötrofil Pulmoner lokalizasyon
"ontent> Nötrofiller LPS meydan farelerde (Şekil 5) iletken hava yolları ve kan damarları çevreleyen alanlar yanı sıra, epitel submukozasında görülmektedir. Dağınık nötrofiller de parankimi ve alveol bölgesinde tespit edilir.
Şekil 5:. LPS ile mücadeleye davet edilen fareler nötrofil solunum lokalizasyonu (A) formalinle sabitlenmiş akciğer dokusunun hematoksilin ve eozin boyama, C57BL / tek başına araç veya (B) 1 mg maruz 6BY fareler / ml LPS ile aerosol halindeki 6 saat sonra kurban veya (C), 24 sa. Ok bir nötrofil gösterir. Bar 200 mikron gösterir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
ConcentrBAL'da nötrofil chemoattractants tirme
LPS ile mücadeleye davet edilen fareler, BAL'da toplam protein içeriği tuz maruz bırakılan farelerde (Şekil 6) göre arttırılır. Aynı zamanda, nötrofil Kemoattraktantlar kemokin (CXC motifinden) ligandlan (CXCL) 1 ve CXCL2 sentezlenmesi LPS farenin 10 (Şekil 7A ve B) artmıştır.
Şekil 6:. Bronkoalveolar lavaj sıvısı LPS C57BL / 6BY farelerin (BAL) artan toplam protein konsantrasyonu 1 mg / ml, aerosol LPS meydan ya da araç (tuz, beyaz çubuk) maruz kalan farelerin BAL'da toplam protein içeriği yalnız spektrofotometrik analiz ile ölçülür. Önemli farklılıklar un-eşleştirilmiş t-testi kullanılarak analiz edildi. n = 3-4, ** p <0.01 gösterir.
Şekil 7:. I bronkoalveolar lavaj sıvısı LPS farelerin (BAL), 1 mg / ml, aerosol LPS meydan farelerin BAL sıvısında (A) CXCL1 ve (B) 'CXCL2 sentezlenmesi de CXCL1 ve CXCL2 ekspresyonunu ncreased veya araç maruz Yalnız ELISA ile ölçülebilir (tuzlu, beyaz çubuk). Önemli farklılıklar un-eşleştirilmiş t-testi kullanılarak analiz edildi. n = 3.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Aerosol haline LPS epitel alt mukozada nötrofiller tarafından karakterize edilen solunum yolları enflamatuar bir tepki üretir, iletken hava yolları, hem de alveoler boşluk çevreleyen alanlarda. Bu arada plazma sızıntı, akut akciğer hasarı patoloji temsilcisi göstergesidir BAL'da artan toplam protein içeriği ile vardır. LPS steril iltihabı teşvik olarak, reaksiyon adaptif bağışıklık tepkisinin bağımsızdır ve bakteriyel enfeksiyonlara karşı ilgisi sınırlamalar vardır. teknik, bununla birlikte, adaptif bağışıklık tepkilerini hariç enflamatuar mekanizmaları incelemek için kullanılabilir.
Metodoloji basit ve kolayca farklı bilimsel sorulara cevap uyarlanmış olmasına rağmen, nebulizatör ve boru seçimi çok önemlidir. LPS ve ortaya çıkan nötrofilisi birikmesi burada açıklanan olandan başka koyları, nebulizerler ve boru ile doğrulanması gerekir. Ayrıca, daha az yaygın fare stLPS farklı yanıtlar görüntüleyebilir yağmurlar LPS'nin optimal doz, her bir suş için belirlenmelidir. Diğerleri, 12, 13 ile gözlemlenen Dahası, aerosol haline getirilmiş LPS ile oluşturulan nötrofilik enflamasyon, LPS'nin nasal boşluğa verilmesi ile neden olunan enflamasyon ile karşılaştırılabilir. Burun yönetimi kolayca yapılır rağmen, metodoloji anestezi gerektirir ve burun boşluğu steril değildir ve tekniğin aracın büyük bir hacim gerektirir potansiyel, akciğerlere burun boşluğunun mikrobiyal florayı tanıtmak olabilir.
Akut akciğer hasarı alaka yanı sıra, tekniği daha aerosolleşmiş LPS ile çeşitli zorluklarla içerecek şekilde gelişmiş olabilir. yöntem bu şekilde birlikte olarak yinelenen bakteriyel enfeksiyonlar ya da kalıcı bir mikrobiyal kolonizasyonu, nötrofiliyi 14 devam eden ilişkili KOAH, kronik inflamasyon, patojenik mekanizmaları incelemek için kullanılabilir
Aerosolize LPS ile meydan birkaç aletleri ile küçük bir maliyetle kurulan ve en az eğitim gerektirir. Ayrıca, bu teknik, böylece düzenli olarak bireyler arasında çok az veya hiç değişiklik ile, herhangi bir laboratuvarda büyük ölçekte gerçekleştirilir ve pulmoner yoldan diğer yolları dolayısıyla daha üstündür edilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
İbrahim Roos Boehringer Ingelheim, AstraZeneca Ar-Ge ve AstraZeneca Ar-Ge bir araştırma bursu seyahat hibelerinden öğretim ücreti aldı. Magnus Nord AstraZeneca Ar-Ge tam zamanlı çalışan ve AstraZeneca Ar-Ge araştırma hibe aldı. Johan Grunewald ve Tove Berg AstraZeneca Ar-Ge tarafından finanse alakasız bir araştırma projesi üzerinde birlikte araştırmacılar vardır.
Acknowledgments
Biz usta yardım için Kerstin Thim (AstraZeneca'yı, Lund, İsveç), Benita Dahlberg ve Dr. Anders Eklund (Karolinska Enstitüsünde, Stockholm, İsveç) yanı sıra Dr. Martin STAMPFLI (McMaster Üniversitesi, Hamilton, ON, Kanada) teşekkür etmek istiyorum ve uzman tavsiyesi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Purified Pseudomonas aeruginosa LPS | Sigma-Aldrich | Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used. | |
| Pari LC sprint star nebulizer | PARI Respiratory Equipment Inc. | 023G1250 | |
| TSI mass flowmeter 4040 | TSI | 4040 | Alternative product from supplier may be used. |
| Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube | Sigma-Aldrich | Z685704 | Recomended brand. |
| Plexiglas boxes with removable lids | Custom built | N/A | 150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side). |
| 3M Half Facepiece Reusable Respirator | 3M | 7503 | Recomended brand. |
| 3M Advanced Particulate Filters (P100) | 3M | 2291 | Recomended brand. |
| Scissors | VWR | 233-1104 | Preferred scissors may be used. |
| Forceps | VWR | 232-1313 | Preferred forceps may be used. |
| Intramedic PE50 polyethylene tube | BD | 427411 | Recomended brand. |
| Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread | VWR | 95056-992 | Recomended brand. |
| 26 ½ gage needle | Alternative suppliers exist. | ||
| 1 ml BD slip-tip syringe, non-sterile |  BD |
301205 | Alternative suppliers exist. |
| 60 ml BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene | BD | 301035 | Alternative suppliers exist. |
| Fluka Hematoxylin-Eosin | Sigma-Aldrich | 3972 | Alternative suppliers exist. |
| Türk's solution | Merck Millipore | 109277 | |
| Table top centrifuge | Alternative manufacturers exist. | ||
| Cytospin 4 cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | Alternative centrifuge can be used. |
| HEMA-3 stat pack | Fisher Scientific | 23-123-869 | Alternative staining kits exists. |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | Alternative suppliers exist. |
References
- King, J. D., Kocincova, D., Westman, E. L., Lam, J. S. Review: Lipopolysaccharide biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa. Innate Immun. 15, 261-312 (2009).
- Grommes, J., Soehnlein, O. Contribution of neutrophils to acute lung injury. Mol Med. 17, 293-307 (2011).
- Pesci, A., et al. Inflammatory cells and mediators in bronchial lavage of patients with chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 12, 380-386 (1998).
- Hoogerwerf, J. J., et al. Lung Inflammation Induced by Lipoteichoic Acid or Lipopolysaccharide in Humans. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178, 34-41 (2008).
- Scheuchenzuber, W. J., Eskew, M. L., Zarkower, A. Comparative humoral responses to Escherichia coli and sheep red blood cell antigens introduced via the respiratory tract. Exp Lung Res. 13, 97-112 (1987).
- Asti, C., et al. Lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. I. Concomitant evaluation of inflammatory cells and haemorrhagic lung damage. Pulm Pharmacol Ther. 13, 61-69 (2000).
- Brand, P., et al. Total deposition of therapeutic particles during spontaneous and controlled inhalations. Journal of pharmaceutical sciences. 89, 724-731 (2000).
- Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trubel, H., Wang, C. Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation. Toxicology. 304, 158-166 (2013).
- Skerrett, S. J., et al. Role of the type 1 TNF receptor in lung inflammation after inhalation of endotoxin or Pseudomonas aeruginosa. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 276, L715-L727 (1999).
- Roos, A. B., et al. Lung epithelial-C/EBPbeta contributes to LPS-induced inflammation and its suppression by formoterol. Biochem Biophys Res Commun. 423, 134-139 (2012).
- Didon, L., et al. Lung epithelial CCAAT/enhancer-binding protein-beta is necessary for the integrity of inflammatory responses to cigarette smoke. Am J Respir Crit Care Med. 184, 233-242 (2011).
- Silverpil, E., et al. Negative feedback on IL-23 exerted by IL-17A during pulmonary inflammation. Innate Immunity. 19, 479-492 (2013).
- Mercer, P. F., et al. Proteinase-Activated Receptor-1, CCL2 and CCL7 Regulate Acute Neutrophilic Lung Inflammation. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. , (2013).
- Korkmaz, B., Horwitz, M. S., Jenne, D. E., Gauthier, F. Neutrophil Elastase, Proteinase 3, and Cathepsin G as Therapeutic Targets in Human Diseases. Pharmacological Reviews. 62, 726-759 (2010).
- Bafadhel, M., et al. Acute Exacerbations of COPD: Identification of Biological Clusters and Their Biomarkers. Am. J. Respir. Crit. Care Med. , 201104-200597 (2011).
- Hurst, J. R., Perera, W. R., Wilkinson, T. M. A., Donaldson, G. C., Donaldson, G. C., Wedzicha, G. C. Systemic and Upper and Lower Airway Inflammation at Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 173, 71-78 (2006).
- Rabe, K. F., et al. Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease: GOLD Executive Summary. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).
