Summary
Wir beschreiben ein Verfahren zur Induktion von neutrophilen Lungenentzündung durch Herausforderung aerosolized Lipopolysaccharid durch Vernebelung, akuter Lungenschädigung-Modell. Darüber hinaus werden grundlegende chirurgische Techniken für Lungen Isolation, Intubation und Bronchiallavage ebenfalls beschrieben.
Abstract
Akutem Lungenversagen (ALI) ist eine schwere Erkrankung, die alveoläre Neutrophilie, mit begrenzten Behandlungsmöglichkeiten und eine hohe Sterblichkeit. Experimentelle Modelle der ALI sind der Schlüssel bei der Verbesserung unseres Verständnisses der Pathogenese der Erkrankung. Lipopolysaccharid (LPS) aus grampositiven Bakterien stammt induziert neutrophile Entzündung in den Atemwegen und Lungenparenchym von Mäusen. Efficient pulmonalen Verabreichung von Verbindungen, wie LPS ist jedoch schwierig zu erreichen. In der hier beschriebenen Vorgehensweise wird pulmonalen Verabreichung bei Mäusen durch Herausforderung aerosolized Pseudomonas aeruginosa LPS erreicht. Gelöst LPS wurde durch einen Zerstäuber mit Druckluft angeschlossen vernebelt. Die Mäuse wurden in einen kontinuierlichen Strom von LPS Aerosol in einer Plexiglas-Box 10 Minuten lang ausgesetzt, gefolgt von 2 min Konditionierung nach dem Aerosol wurde abgebrochen. Intubation und anschließende Bronchiallavage, gefolgt von Formalin Perfusion wurde als nächstes durchgeführt, die für die Charakterisierung des sterilen p ermöglichtulmonary Entzündung. Aerosolized LPS erzeugt eine Lungenentzündung gekennzeichnet durch alveoläre Neutrophilie, in Bronchiallavage und durch histologische Begutachtung festgestellt. Diese Technik kann gegen eine geringe Gebühr mit wenigen Geräten eingestellt werden, und erfordert nur minimale Schulung und Know-how. Das Belichtungssystem durch eine Routinejeder Labor durchgeführt werden, mit dem Potential, das Verständnis der Lungenpathologie verbessern.
Introduction
Lipopolysaccharid (LPS) ist ein Zellwandkomponente von Gram-negativen Bakterien 1. Herausforderung LPS ist ein gut dokumentiertes Modell des akuten Lungenversagens, ein Syndrom, das durch eine akute neutrophile Entzündung und Ödem 2. Zusätzlich ist Lungen Neutrophilie auch ein Markenzeichen von chronisch obstruktiver Lungenerkrankung (COPD) 3 und LPS bei Menschen verwendet wurde, um COPDExazerbationen 4 modellieren. So sind experimentellen Modellen der LPS Exposition klinisch relevante und wertvolle Werkzeuge für die menschliche Pathologie zu verstehen.
Das Ziel der pulmonalen Verabreichung von hier beschriebenen aerosolized LPS ist es, eine neutrophile Entzündungsreaktion in den leitenden und den Atemwegen, ohne systemische Beteiligung erzeugen. Verschiedene Techniken von LPS wurden bereits beschrieben. Intravenöse Injektion von LPS ist die am häufigsten verwendete Art der Verabreichung. Obwohl diese Technik ist leicht zugänglich, ter Primärschaden ist an das Endothel, mit sekundären Zerstörung der Lungenepithel folgenden neutrophilen Migration in die Lunge. Intravenöse Verabreichung induziert auch systemische Entzündung 2, die das klinische Bild in Tiermodellen erschweren kann. Systemische Entzündung ist hingegen nicht durch intratracheale Verabreichung beobachtet. Diese Technik ist jedoch arbeitsintensiv und erfordert Anästhetika sowie erhebliche Trainings 5, 6. Darüber hinaus ist Lung dieses Verabreichungsweg abhängig von Atem 7. Somit wird Lungenablagerung durch die Narkosetiefe für die intra tracheale Verabreichung und variable Abscheidung in den Atemwegen beobachtet werden benötigt betroffen. Im Gegensatz dazu pulmonalen Verabreichung mit aerosoli LPS erfordert minimales Training, und kann leicht zu einer großen Anzahl von Tieren, die mit wenig oder gar keine Variation zwischen Individuen 5, 8 durchgeführt werden.Eine aktuelle Studie bestätigt, dass die Aerosolabgabe ist besser als die intratracheal im Hinblick auf die Abscheidung und relevanter Dosen von LPS induziert neutrophilen Entzündung mit diesem Modell 8.
Frühere Studien haben gezeigt, dass diese Herausforderung vernebelt Pseudomonas aeruginosa LPS erzeugt eine deutliche Entzündungsreaktion in den Atemwegen Lumen und Lungenparenchym, einschließlich der Alveolarräumen 9, 10. Die Entzündung wird durch ein Vorherrschen der Neutrophilen und die Anwesenheit von Lungenödem gekennzeichnet und können daher verwendet werden, um die Pathogenese von akuter Lungenverletzung Adresse weiter und gewinnt die Kenntnis der Mechanismen Beitrag zur Krankheitspathologie.
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Protocol
Die tierexperimentellen Studien wurden von der Nord Stockholm Tierschutz Ethikkommission genehmigt. Die experimentellen Verfahren wurden in Übereinstimmung mit schwedischen Rechts durchgeführt.
1. Erstellen eines LPS Aerosol
- Man löst 0,5 g gereinigtes P. aeruginosa LPS in 50 ml steriler Kochsalzlösung unter leichtem Schütteln und überprüfen Sie die Auflösung. Gebrauchslösung: 1 ml LPS gelöst in 9 ml steriler Salzlösung bis zu einer Endkonzentration von 1 mg / ml. Vor Licht mit Aluminiumfolie und bei -20 ° C.
- Auftauen solubilisierten LPS im Dunkeln bei Raumtemperatur und gut mischen unmittelbar vor der Verwendung.
- An einem gut belüfteten Ebene II Biohazard Haube, legen Sie eine rote Einlass in einem Zerstäuber, und verbinden Sie den Vernebler unter Druck Raumluft über den Schlauch durch den Hersteller (Überprüfung Schema präsentiert die experimentellen Geräten in Abbildung 1) zur Verfügung gestellt.
ACHTUNG: Geeignete Schutzausrüstung einschließlich eines Halbgesichtsmaske wiederverwendbaren respiratoder mit Partikelfilter, Schutzbrille, Handschuhe und Schutzkleidung sollte im Verlauf der Exposition verwendet werden.
Fig. 1: Schematische Darstellung der Versuchsvorrichtungen zum Erzeugen eines Aerosols verwendet Der Einlass des Zerstäubers ist mit einer Luftversorgung verbunden ist. Der Auslass des Zerstäubers wird zunächst auf einen Strömungsmesser über einen 15,9-mm-Rohr und einem Luftfilter und Luftzufuhr verbunden ist, um 5,0 l / min bei 2 kbar Druck eingestellt. Der Auslaß ist an einen nächsten verbundenen Plexiglasbox mit abnehmbarem Deckel und 5 mm Löcher um einen Druckaufbau zu verhindern ausgestattet.
- Verbinden des Auslasses des Zerstäubers an einen Massendurchflussmesser über einen Luftfilter. Verbinden Sie den Massedurchflussmesser mit einer elektrischen Versorgung.
- Stellen Sie die Luftzufuhr zu 5 l / min, mit 1,0 bis 2,0 bar Restdruck.
- Entfernen Sie die Massedurchflussmesser undTrennen Sie die Luftzufuhr.
- Verbinden den Auslaß der Zerstäuber auf eine 15,9-mm-Rohr, die sich gabelt und verbindet zwei Plexiglasboxen mit den Abmessungen: 150 x 163 x 205 mm, mit abnehmbaren Deckeln versehen. Jede Box ist ein 5 mm Loch in der Seite gegenüber der Einlass, um Druckaufbau zu verhindern.
- Platzieren Sie bis zu 5 Mäusen in jeder Plexiglas-Box, und schließen Sie den Deckel.
- Öffnen des Zerstäubers und Füllen des Einsatzes mit mindestens 4 ml LPS in sterile Kochsalzlösung oder Vehikel gelöst allein (sterile Kochsalzlösung; sollte das Volumen 8 ml nicht überschreiten). Schließen Sie den Einlass zum Luftzufuhr.
- Lassen Sie das Aerosol in die geschlossene Plexiglasboxen für 10 min fließen. Überwachen Sie die Tiere kontinuierlich. Sicherstellen, dass die Luftzufuhr bleibt fest mit dem Einlass des Zerstäubers gesichert.
- Trennen Sie die Luftzufuhr. Bei geschlossenen Lidern, lassen Sie die Tiere bleiben in den Plexiglas-Boxen für 2 min.
- Öffnen Sie den Deckel und lassen für das Aerosol zu zerstreuen, und kehren die Tiere auf ter Käfigen. Wenn die Tiere nass erscheinen, legen Sie die Käfige auf einem Heizkissen auf kleiner Flamme eingestellt, um eine Unterkühlung zu verhindern.
- Überwachung der Tiere kontinuierlich für die ersten 30 min und danach alle 2 h während der ersten 6 Stunden. Die Tiere sollten normale Atemmuster und Aktivität während und nach der Vernebelung Verfahren aufweisen.
2. Bronchiallavage (BAL)
- Bei der experimentellen Endpunkt, tief betäuben die Tiere mit Isofluran wirksam wie tierärztliche Personal Ihrer Einrichtung empfohlen. Pinch der Hinterpfote für einen Rückzug Reflex, um eine ausreichende Narkosetiefe zu gewährleisten, um eine größere Operation durchführen zu überprüfen. Sprühen Sie den Pelz der Tiere mit 70% Ethanol.
- Öffnen Sie den Unterleib mit einer Schere und durchtrennen die Aorta, das Tier exsanguinate. Legen Sie ein Stück Gewebe über den Bauch, um das Blut aufzusaugen.
- Follwing Euthanasie, eine einzige anterior-posterioren Schnitt der SchereSetzen Sie den Brustkorb. Heben Sie den Brustkorb von der vorderen Spitze des Brustbeins und die Schere, um die Membran am meisten Bauchpunkt durchstoßen, ohne Schneiden in alle Lungenlappen. Öffnen Sie den Brustkorb, indem zwei Schnitte in der Vorwärts-Rückwärts-Richtung (Sitzung unter dem Kiefer).
- Ziehen Sie vorsichtig neben den Brustkorb mit einer Pinzette und schneiden Sie die Luftröhre unterhalb des Kehlkopfes.
- Heben Sie die Luftröhre mit der Zange und entfernen Sie die Lunge, die durch Schneiden der Bänder, welche die Lappen in die Brusthöhle und leichtes Ziehen vom Fett- und Herzgewebe.
- Legen Sie eine Polyethylenschlauch (Innendurchmesser: 0,58 mm; Außendurchmesser: 0,965 mm) in die Luftröhre und sichern Sie den Schlauch mit einer Reihe von Seidenfaden.
- Binden Sie die multilobe (die vier Lappen der rechten Lunge) mit Seidenfaden.
- Legen Sie eine 23-Gauge-Nadel in die Polyethylen-Rohr und langsam injizieren 250 ul eiskaltem sterilem PBS in den einzelnen Lappen mit einer 1 ml Spritze.
- Tippen Sie vorsichtig die Lunge30mal und sammeln die Flüssigkeit durch die Spritze. Wiederholen Sie den Vorgang mit 200 ul PBS (etwa 300 ul PBS von der Betriebslappen aus der gesamten injizierten Volumen von 450 ul wiederhergestellt werden).
- Halten Sie den bronchoalveolären Lavage (BAL) auf Eis oder Aufzählung der BAL-Zellen sofort. Zähle die Zellen mit einem heamocytometer mit Turk-Lösung, um die Zellen 11 zu färben. Berechnen der Gesamtzellzahl durch Multiplikation der Anzahl der Zellen, die mit dem Verdünnungsfaktor der Färbelösung und das Volumen innerhalb der gezählten Feld des heamocytometer.
- Bereiten Differentialzellzählungen von zytozentrifugierten Zellen wie anderswo 11 beschrieben.
3. Formalin-Fixierung von Lungengewebe für die histologische Bewertung
- Entfernen Sie die multilobe und Snap-freeze auf Trockeneis. Bei -80 ° C.
- Montieren Sie einen 60-ml-Spritze mit dem Kolben auf einem Metallträger Stand entfernt. Füllen Sie die Spritze mit 10% Formalin zudie Höhe von 20 cm über dem Labortisch, was 20 cm konstanter Druck.
- Verbinden den 23-Gauge-Nadel zur Luftröhre zu dem 60 ml Spritze über ein Kunststoffrohr mit einem Ventil, um den Fluss von Formalin steuern gesichert.
- Insufflate die Lungenflügel mit Formalin für 5 min. Ziehen Sie die Nadel heraus und entfernen Sie sie zusammen mit der Polyethylenschlauch aus der Luftröhre beim Ziehen an der Seidenfaden, um die Luftröhre zu schließen und den Druck in der Lunge zu erhalten.
- Tauchen Sie den Lungenlappen in Formalin und beheben 24 Stunden lang bei 4 ° C.
- Dreimal für mindestens 20 min mit 70% Ethanol waschen das fixierte Gewebe und zu entwässern, um die folgenden Schema (jeweils 1 Stunde) Xylol:
- 3x 70% Ethanol
- 3x 95% Ethanol
- 3x 100% Ethanol
- 3x Xylol
- 1x (flüssig) Paraffin
- Betten Sie dehydriert Gewebe in Paraffin in 4-5 & mgr; m Schnitte geschnitten, und Fleck mit Hämatoxylin und Eosin zur histologischen Beurteilung ermöglichen.
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Representative Results
Herausforderung aerosolized P. aeruginosa LPS ergibt in der Regel eine starke entzündliche Reaktion in den Atemwegslumen und Alveolarraum, gekennzeichnet durch ein Vorherrschen der Neutrophilen an beiden frühen und späten Zeitpunkten.
Aerosolized LPS induziert Lungen Neutrophilie
C57BL / 6by und BALB / c-Mäuse wurden einem Aerosol ausgesetzt P. aeruginosa LPS oder Vehikel und Neutrophile wurden in BALF aufgezählt. Die Gesamtzellzahl in der BALF von C57BL / 6by Mäusen zu einem Aerosol mit Fahrzeugs erzeugt ausgesetzt nur typischerweise um oder unterhalb 200.000 Zellen und die Zellen aus 95-100% mononukleare Zellen, wobei nur wenige Lymphozyten (0,5-5%) und keine Neutrophilen im BALF (2A-C). Mäuse, die mit aerosoli LPS zeigen nach 6 h in Frage eine erhöhte Gesamtzellzahl in der BALF, typischerweise> 500.000 Zellen. Die Zellinfiltrate hoch bleibt nach 24 Stunden. Die zelluläre Profil in BALF richtet ap verschobenredominance von Neutrophilen (80-95%) nach der LPS-Exposition (2B und C).
Fig. 2: Pulmonary Neutrophilie in C57BL / 6by Mäusen mit 1 mg / ml LPS aerosolized C57BL / 6by Mäusen herausgefordert wurden auf 1 mg belichteten / ml vernebelt P. aeruginosa LPS oder Vehikel (Kochsalzlösung, weiße Balken) allein für 10 min. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde nach 6 h oder 24 h in geführt und die Leukozyten in der BAL (BALF) aufgezählt wurden. (A) Die Gesamtzellzahl (TCN), (B) Neutrophile und (C) mononukleare Zellen (MNC) BALF. Signifikante Unterschiede wurden mit Hilfe nicht-gepaarten t-Tests analysiert. n = 3-4, * zeigt Ihnen, p <0,05, ** zeigt an, p <0,01.
Eine vergleichbare Steigerung der Entzündungszellen in BALF in LPS fordert BALB / c-Mäusen beobachtet (3A (3B und C) vergleichbar.
Fig. 3: Pulmonary Neutrophilie in BALB / c-Mäusen mit 1 mg / ml LPS aerosolized gefordert BALB / c-Mäuse wurden auf 1 mg belichteten / ml vernebelt P. aeruginosa LPS oder Vehikel (Kochsalzlösung, weiße Balken) allein für 10 min. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde nach 6 h oder 24 h in geführt und die Leukozyten in der BAL (BALF) aufgezählt wurden. (A) Die Gesamtzellzahl (TCN), (B) Neutrophile und (C) mononukleare Zellen (MNC) BALF. Signifikante Unterschiede wurden mit Hilfe nicht-gepaarten t-Tests analysiert. n = 3, ** zeigt p <0,01, *** zeigt p <0,001.
Ähnliche entzündliche Zellprofil ein d Lungen Neutrophilie mit Vernebelung von 5 mg / ml LPS (4A-C) und durch intranasale Verabreichung von LPS beobachtet, wie bereits berichtet 12,13.
Fig. 4: Pulmonary Neutrophilie in BALB / c-Mäusen mit 5 mg / ml LPS aerosolized gefordert BALB / c-Mäuse wurden zu 5 mg belichteten / ml vernebelt P. aeruginosa LPS oder Vehikel (Kochsalzlösung, weiße Balken) allein für 10 min. Bronchoalveoläre Lavage (BAL) wurde nach 24 h durchgeführt und die Leukozyten in der BAL (BALF) aufgezählt wurden. (A) Die Gesamtzellzahl (TCN), (B) Neutrophile und (C) mononukleare Zellen (MNC) in der BALF. Signifikante Unterschiede wurden mit Hilfe nicht-gepaarten t-Tests analysiert. n = 3, *** zeigt p <0,001.
Lungen Lokalisierung von Neutrophilen in LPS-herausgefordert
NHALT "> Neutrophile werden in der epithelialen Submucosa als Räume rund um die leitenden Luftwege und Blutgefäße des LPS fordert Mäusen (5) beobachtet wird, als auch. Dispergierte Neutrophile werden auch im Parenchym und Alveolarbereich detektiert.
Fig. 5: Pulmonary Lokalisierung von Neutrophilen in LPS fordert Mäusen Hämatoxylin und Eosin-Färbung von formalinfixierten Lungengewebe von (A) C57BL / 6by Mäuse Vehikel allein oder (B) 1 mg belichteten / ml LPS aerosolized geopfert nach 6 h oder (C) 24 Stunden. Der Pfeil zeigt eine Neutrophilen. Bar gibt 200 um. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild anzuzeigen.
Konzation der Neutrophilen-Chemolockstoffe in BALF
Der Gesamtproteingehalt in der BALF von LPS fordert Mäusen erhöht ist im Vergleich zu Mäusen (Abbildung 6), um Kochsalzlösung ausgesetzt werden. Auch sind der Ausdruck der neutrophilen Chemoattraktanten Chemokine (CXC-Motiv) Liganden (CXCL) 1 und CXCL2 in LPS fordert Mäusen 10 (7A und B) erhöht.
Fig. 6: Erhöhte Gesamtproteinkonzentration in der bronchoalveolären Lavageflüssigkeit (BALF) von LPS fordert C57BL / 6by Mäusen Gesamtproteingehalt in BALF von Mäusen herausgefordert, 1 mg / ml LPS aerosolierter oder Vehikel (Kochsalzlösung, weiße Balken) ausgesetzt war allein durch spektrophotometrische Analyse gemessen. Signifikante Unterschiede wurden mit Hilfe nicht-gepaarten t-Tests analysiert. n = 3-4, ** zeigt an, p <0,01.
Abbildung 7: I ncreased Expression CXCL1 und CXCL2 in bronchoalveolären Lavageflüssigkeit (BALF) von LPS-Mäusen herausgefordert Expression von (A) CXCL1 und (B) CXCL2 in BALF von Mäusen, 1 mg / ml LPS aerosolized gefordert oder Fahrzeug ausgesetzt. (Kochsalzlösung, weiße Balken) allein mittels ELISA quantifiziert. Signifikante Unterschiede wurden mit Hilfe nicht-gepaarten t-Tests analysiert. n = 3.
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Discussion
Aerosolierte LPS erzeugt eine Entzündungsreaktion in den Atemwegen von Neutrophilen im epithelialen submucosa gekennzeichnet, umgebenden Räumen die leitenden Atemwege, sowie die Alveolen. Dies ist zusammen mit der erhöhten Gesamtproteingehalt in BALF anzeigt Plasmaleckage, repräsentativ für die Pathologie von akuter Lungenverletzung. LPS induziert eine sterile Entzündung ist die Reaktion unabhängig von der adaptiven Immunantwort, und es gibt Grenzen für die Relevanz für bakterielle Infektionen. Die Technik kann jedoch verwendet werden, um Entzündungsmechanismen durch Ausschließen der adaptiven Immunantwort zu sezieren werden.
Obwohl die Methode einfach ist und leicht an unterschiedliche wissenschaftliche Fragen zu beantworten, ist die Wahl des Zerstäubers und Schläuche kritisch. Die Abscheidung von LPS und resultierende Neutrophilie muss mit Einlässen, Zerstäuber und Schlauch andere als die hier beschriebenen validieren. Darüber hinaus als weniger verbreitet Maus stRegenfälle können unterschiedliche Reaktionen auf LPS anzuzeigen, sollte die optimale Dosis von LPS für jeden Stamm bestimmt werden. Darüber hinaus ist die neutrophile Entzündung mit aerosolisiertem LPS erzeugten vergleichbar mit der Entzündung, die durch intranasale Verabreichung von LPS induziert wird, wie von anderen 12, 13 beobachtet. Obwohl die intranasale Verabreichung leicht durchgeführt wird, die Methodik erfordert Anästhetika und könnte möglicherweise die Mikrobenflora der Nasenhöhle einführen zu den Lungen, die Nasenhöhle ist nicht steril, und die Technik erfordert ein großes Volumen an Vehikel.
Neben der Bedeutung für die akute Lungenverletzung kann die Technik weiterentwickelt werden, um mehrere Herausforderungen mit aerosolisiertem LPS enthalten. Die Methodik kann somit verwendet werden, um Mechanismen der Entstehung der chronischen Entzündung der COPD, die mit anhaltenden Neutrophilie 14 verbunden ist mit wiederkehrenden bakteriellen Infektionen oder dauerhafte mikrobielle Besiedlung zu studieren, werden
Herausforderung mit aerosoli LPS kann gegen eine geringe Gebühr mit wenigen Geräten eingestellt werden und erfordert nur minimale Schulung. Ferner kann die Technik somit routinemßig in großem Umfang bei jedem Labor durchgeführt werden, mit wenig oder keiner Variation zwischen Personen und ist somit überlegen andere Wege der pulmonalen Verabreichung.
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Disclosures
Abraham Roos hat ein Dozent Gebühr von Boehringer Ingelheim, Reisestipendien von Astrazeneca R & D und ein Forschungsstipendium von Astrazeneca R & D erhalten. Magnus Nord ist ein Vollzeit-Mitarbeiter von Astrazeneca R & D und hat ein Forschungsstipendium von Astrazeneca R & D erhalten. Johan Grunewald und Tove Berg sind Co-Ermittler auf einem nicht verwandten Forschungsprojekt von Astrazeneca R & D gefördert.
Acknowledgments
Wir möchten Kerstin Thim (Astrazeneca, Lund, Schweden), Benita Dahlberg und Dr. Anders Eklund (Karolinska Institutet, Stockholm, Schweden) sowie Dr. Martin Stampfli (McMaster University, Hamilton, ON, Kanada) für geschickte Unterstützung danken und kompetente Beratung.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Purified Pseudomonas aeruginosa LPS | Sigma-Aldrich | Harmful. Recomended purification. LPS purified from other bactria may be used. | |
| Pari LC sprint star nebulizer | PARI Respiratory Equipment Inc. | 023G1250 | |
| TSI mass flowmeter 4040 | TSI | 4040 | Alternative product from supplier may be used. |
| Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tube | Sigma-Aldrich | Z685704 | Recomended brand. |
| Plexiglas boxes with removable lids | Custom built | N/A | 150 x 163 x 205 mm (a 2 mm hole on the side). |
| 3M Half Facepiece Reusable Respirator | 3M | 7503 | Recomended brand. |
| 3M Advanced Particulate Filters (P100) | 3M | 2291 | Recomended brand. |
| Scissors | VWR | 233-1104 | Preferred scissors may be used. |
| Forceps | VWR | 232-1313 | Preferred forceps may be used. |
| Intramedic PE50 polyethylene tube | BD | 427411 | Recomended brand. |
| Ethicon 2-0 Perma-hand silk tread | VWR | 95056-992 | Recomended brand. |
| 26 ½ gage needle | Alternative suppliers exist. | ||
| 1 ml BD slip-tip syringe, non-sterile |  BD |
301205 | Alternative suppliers exist. |
| 60 ml BD Luer-Lok syringe, non-sterile, polypropolene | BD | 301035 | Alternative suppliers exist. |
| Fluka Hematoxylin-Eosin | Sigma-Aldrich | 3972 | Alternative suppliers exist. |
| Türk's solution | Merck Millipore | 109277 | |
| Table top centrifuge | Alternative manufacturers exist. | ||
| Cytospin 4 cytocentrifuge | Thermo Scientific | A78300003 | Alternative centrifuge can be used. |
| HEMA-3 stat pack | Fisher Scientific | 23-123-869 | Alternative staining kits exists. |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | Alternative suppliers exist. |
References
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