Abstract
여기에서 우리는 왕새우 복부 신경 코드의 해부를 보여줍니다. 제제는 지난 흉부 신경절 (T4, T5) 및 복부 신경절 쇄 (A1 내지 A6)을 포함한다. swimmeret 시스템 : 신경절이 체인 pleopods (swimmerets)의 운동을 구동 코디 중추 신경계 (CNS)의 일부를 포함한다. 그것은 가재의 각 swimmeret이 리듬 교류 활동 1-3를 생성 독자적 패턴 생성 커널에 의해 구동되는 다섯 년 이상으로 알려져있다. 운동 뉴런 swimmeret 각 근육의 해부학 적 및 기능적으로 구별되는 4 개의 집단에 분포를 포함한다. 하나는 swimmeret의 후퇴 (전원 뇌졸중, PS)에 대한 책임이 있습니다. 다른 하나는 swimmeret의 길게 끌기 (귀국일 스트로크, RS)를 구동한다. swimmeret 시스템의 운동 뉴런은 생체 내에서 자연적으로 기록 된 패턴과 동일하다 허구 모터 패턴을 생성 할 수있다 1.
이 보고서의 목적은 리듬을 생성하는 네트워크와 학생들의 실제적인 실험 과정에 대한 독립적 인 초소형의 조정을 공부 재미 있고 편리한 모델 시스템을 소개하는 것입니다. 제공하는 프로토콜은 신경의 절연 체인의 달아 신경을 desheathing와 격리 신경 시스템에서 세포 외로 swimmerets 허구 모터 패턴을 기록, 왕새우의 복부 신경 코드의 해부에 대한 단계별 지침이 포함되어 있습니다.
또한, 우리는 수상 돌기에서 세포 내 기록 swimmeret 신경 세포의 활동을 모니터 할 수 있습니다. 여기에서 우리는 간단히 이러한 기술을 설명하고 몇 가지 예를 제공합니다. 또한, swimmeret 뉴런의 형태는 다양한 염색 기술을 사용하여 평가할 수있다. 여기에서 우리는 염료 가득 뉴런과 swimmeret 운동 신경의 풀 backfills (이온 토 포레 시스에 의해) 세포의 예를 제공합니다. 우리가 실험실에서우리는 세포 수준에서 미세 회로 사이의 허구 운동, 중추 신경계의 활동에 대한 감각 피드백의 효과 및 조정의 기본 기능을 연구하기 위해이 준비를 사용합니다.
Introduction
왕새우 swimmerets는 자세 제어의 기능을 수행하고, 동물이 앞으로 수영 리듬 때 이길 자신의 굴 또는 암컷이 알 5, 6 탄산 가스를 환기 시키십시오. 신호 가재, Pacifastacus의 leniusculus의 swimmerets을, 다섯 번째 두 번째에서 쌍으로 발생 복부 (7)의 각 측면에 하나의 다리와 복부 세그먼트. 중추 신경계 손상은 동물뿐만 아니라 절연 신경 코드 준비 swimmeret 운동 자체를 구동 모터 두둑 리듬에 생성한다. 더 감각 피드백 또는 내림차순 입력되는 현재 존재하지 않는 경우 생성 된 리듬 모터 패턴은 허구 식 이동 (1, 2)라고한다. swimmeret 시스템에서는이 모터 패턴이 그대로 동물에서 측정 swimmerets의 활성에서 어떤 파라미터에서 다르지 않다.
각 swimmeret의 움직임의 위치는 하나의 C로 제한되는 미세 회로에 의해 구동hemiganglion 1 orresponding -. 3 각 저항기에서 다섯 식별 비 요동 치고의 interneurons를 포함하는 패턴 생성 커널이있다. 그들은 기능적 것을 특징으로 할 수 있습니다 동력 행정의 억제제 (IPS) 또는 Return 키 스트로크의 억제제 (IRS) 8. 자신의 교류 활동이 상호 억제 (9)에 의해 구동 오히려 이러한 IPS와 국세청의 interneurons는 내생 발진기 없습니다. 이들의 interneurons 직접 swimmeret 운동 뉴런을 억제하기 때문에, 상기 교류 PS-RS 운동은 열을 발생한다. 운동력은 그러나, 또한 다른 독립 미소의 코디 활성의 생성을 필요로하지 않지만. swimmeret 시스템에서 이러한 조정은 사지가 정확한 시간에 활성화되어 있도록 보장하는 조정 저항기에 의해 설정됩니다. 이 마이크로는 각 세그먼트 11 ~ 15 세 확인 된 신경 세포에 의해 만들어집니다.
이 프로토콜은 일 제공E는 처음 단계별 해부 가이드 신경절 (A6 T4에,도 1)의 체인을 분리. 우리는 고립 된 복부 신경 코드를 고정하고 각 신경절을 desheathe하는 방법을 보여줍니다. 이 격리 신경계 대비, swimmeret 운동을 담당하는 신경 세포 전기 생리 및 형태 학적 실험에 사용하기위한 준비가되어 있습니다. 이 프로토콜의 두번째 부분은 모터 swimmeret 패턴의 주요 특징을 설명한다. 이 세포 외로 레코드에 대한 단계별 가이드를 swimmeret 운동 뉴런의 활동을 포함한다. RS의 운동 신경의 축색 돌기 (axon)은 PS 모터 신경의 축색 돌기 (axon)가 같은 신경의 후방 지점을 통해 (그림 1) 프로젝트 동안, 신경 N1의 전방 지점을 통해 프로젝트 4. 따라서 그들의 활동은 차동 핀 전극이 지점에서 녹음 할 수 있습니다.
그림 1 : 복부 신경절 6 (A6)과 T4의 개략도에 흉부 신경절 4 (T4)에서 고립 신경계 :. 흉부 신경절 4; T5 : 흉부 신경절 5; A1, A2 ... A6 복부 신경절 1, 복부 신경절이 ... 복부 신경절 (6); N1 : 신경 N1; N2 : 신경 N2; N3 : 신경 N3; PS : 파워 스트로크; RS : 리턴 스트로크. 방향 약어 : A = 전방; P = 후방.
이 해부 절차 및 시연 전기 생리학 기술 학부 학생들을위한 편리하고 생리 학생 실용적인 교육 과정을 보완 할 수있다. 신경절 절연 체인 신경계 기능, 조정, 또는 swimmeret 미세 회로 (6)의 변조뿐 아니라 운동 (16) (17) 적응 행동의 신경 조절을 연구하기 위해 다수의 실험에 사용되었다. 가재 swimmeret 시스템은 이와 같이 방대한드립니다 흥미로운 교육 또는 t의모든 가재와 허구 모터 패턴의 세포 외 기록의 복부 신경 코드의 절개로 시작하는 기회를 비가.
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Protocol
이 절차는 해부 유럽 공동체위원회 (22)의 지령 ND 2010년 9월 (63분의 2,010 / EU)에 따른다.
1. 준비
- 크기 ≥8 cm 남녀 가재, Pacifastacus의 leniusculus (다나)를 얻습니다. 동물은 매우 중요하고 복부와 복부 사지가 그대로 있는지 확인합니다.
- 등딱지를 검사하는주의이 표피는 단단하고 견고한입니다. 사전 및 postmolt 동물 소프트 갑이 때문에 많은 매개 변수 변경 털갈이 과정에서 실험에 적합하지 않다 (예를 들면, 운동 활성의 감소).
- , 해부하는 동안 사용되는 모든 도구 및 재료를 조립 달아 및 신경 코드의 desheathing 그림 2와 제공되는 보충 교재에 나와.
(1) 얼음을 가득 큰 양동이; (2) 왕새우 식염수; (3) 염수 디스펜서; (4) 해부 현미경; (5) 해부 접시; (6) 강한 가위; (7) 집게 (8) 스프링 가위; 분명 실 가드 늘어서 (9) 페트리 접시; (10)의 고정 핀; (11) 감기 램프 소스. 2. 총 해부 3. 미세 해부 4. 페트리 접시에 신경 코드 피닝 참고 : 신경 코드를 핀 (보충 참조) 스테인레스 스틸 와이어에서 잘라 작은 핀을 사용합니다. 집게로 끝나는에만 신경을 터치 squeez을하지 않습니다접속사 또는 신경 전자. 5. 신경절을 Desheathing 모터 뉴런 6. 세포 외 녹음 
그림 2 :
참고 : 다음 단계 (2.12-4.8)는 오른 손잡이 실험자에 적용 방향 지시 사항이 포함되어 있습니다. 다음 단계 (2.12-6.8)에서는 차가운 생리 식염수, 등 간격으로 매 20-30 분 바닷가 식염수를 교체 건강한 신경 시스템을 유지하는 것이 중요하다.
참고 : 흉부 신경과 관련된 신경이 부분적으로 다리 근육과 cephalothoracic sterna이 적용됩니다. cephalothoracic sterna 서로로부터 복부 신경 코드가있는 내측 캐비티로부터 보행 다리의 측 방향 위치 공동을 분리하는 골격을 형성한다.
주 : 신경 선이 과정에서 손상 될 수 있으므로 NERV 발생을 방지전자 코드를 여러 번.
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Representative Results
RS 및 PS 번 신경절의 운동 신경 세포에서 동시 녹화,이 운동 신경 풀 교류 활성은, 허구 식 이동 패턴을 나타내는 (도 18)를 모니터링 할 수있다.
그림 18 : 하나의 신경절 및 차등 핀 전극의 배치의 개략도 세포 외 RS 모터 뉴런의 기록 (상단 트레이스) 및 PS 모터 뉴런 (낮은 추적)..
PS 5 운동 신경 동측 PS 2의 세포 외 PS 활동은 swimmeret 시스템 (그림 19A)의 마디 사이 조정의 흥미로운 측면을 강조한다.
첫 번째 <, 활동은 항상 A5 (그림 19A, 4 번째 추적)에서 PS 버스트로 시작하고 여기 파 (전방 방향으로 전파강한> 그림 19A, 녹색 선). 둘째, 각 세그먼트 (다음 버스트의 시작에 하나의 버스트의 시작에서 측정 시간) 기간은 상수 (그림 19A, 시안 화살표)가 남아있다. 이렇게 한 다음 한 신경절에서의 정보 흐름은 그대로이고, 실험 조건은 변화하지 않기 때문에, 사실이다.
다른 준비에서 또는 다른 실험 조건에 따라 기간과 버스트 지속 시간은 실질적으로 달라질 수 있습니다 : 0.25의 기간에서 1 초에. 다른 제조법이 이들 파라미터를 비교하기 위하여, 그들은 정규화 위상 히스토그램 (도 19B)에 그래프로 할 필요가있다. 이는 모터 패턴의 제 흥미로운 양태를 보여준다 : 세그먼트 사이의 위상 지연, 마디 사이의 지연은, 일정한 리듬의 주파수와 무관 남아있다.
위상의 히스토그램을 계산하기 위해, 다음과 같은 측정 및 계산 nece 아르ssary :
우선, 기준 추적이 선택되어야한다. 보통 우리는 MS에서 (예를 들어, PS 5) 참조 여러 세그먼트 (그림 19A) 그 때는 걸쳐 기록 된 swimmeret 리듬주기를 측정의 위상 히스토그램 (시간이 0 인)으로 (가장 후방 신경절의 PS 추적을 사용 ) 하나 PS 다섯 버스트 (시간 0 초부터 리듬, 다음 PS 다섯 버스트 (도 19A, 시안 화살표) 가까이하고이 사이클을 시작으로도 19A, 오렌지 점선), MS의 대기 시간 (측정 PS는 다른 신경의 각 버스트의) PS 5 버스트 (시간 0) 및 시작 (버스트 발병, 그림 19A와 B, 주황색 화살표)과 끝의 시작 사이에 (), 그림 19A와 B 보라색 화살표를 오프셋 . 따라서 위상 발병을 계산하고 각각의 대기 시간이 동시 기간으로 분할된다 버스트 오프셋합니다. 이러한 측정은 숫자 V가 발생합니다도 19B에 도시 된 바와 같이 0과 1 사이 alues 마지막 위상 히스토그램이 값을 플롯.
그 결과 위상 히스토그램 (그림 19B)은 각 세그먼트에서 버스트 PS의 듀티 사이클에 대한 정보가 포함되어 있습니다. 그리고 이웃 세그먼트 사이 0.25 ~의 마디 사이 위상 지연이 명확하게 볼 수 있습니다.
도 19 (A)의 전극 배치 및 위상 히스토그램 필요한 PS 2. (B) 측정 및 계산 동측 PS (5)의 세포 외 기록의 개략도. 연속 10 버스트 (N = 10)에서 계산 된 위상 히스토그램 ~ 0.25의 마디 사이 위상 지연을 보여줍니다.
고급 실험자를 들어, 운동 뉴런의 수상 돌기에서 날카로운 미소 전극과 세포 내 기록은 유용 할 수 있습니다. 막 전위개인의 세포 내 기록 PS 모터 뉴런 동일한 hemiganglion 모든 PS 모터 뉴런의 세포 외 기록 활성 위상의 진동 (도 20, 패널 회색)을 나타낸다. 다르게는, RS의 운동 뉴런의 interneurons 또는 동일한 방식으로 세포 내에 기록 될 수있다 (데이터는 보이지 않음).
그림 20 :. 전극 배치의 도식은 하나의 세포 내 기록 PS 모터 뉴런 (상단 트레이스)의 막 전위는 세포 외 기록 PS 활동 (하단 추적)과 상 (회색 패널)에 진동한다.
세포 내 기록 뉴런 (의 interneurons 또는 운동 신경)의 식별을 위해, 세포는 날카로운 미소 전극과 이온 토 포레 시스를 (설명 참조)를 사용하여 충전 염료가 될 수 있습니다. 그림 21에서 두 세포 내에서 작성 염료 PS 모터 뉴런이 표시됩니다. 그들의 복부 세포체신경 N1의 기지로 후방에 위치하고 있습니다. 측면 Neuropil (그림 21A와 B-3) 내 차 신경 돌기 전방 프로젝트 (그림 21B-2) 분기; swimmeret 근육 (그림 21B-4)에 신경 N1의 후방 지점을 통해 축삭 프로젝트.
도표 21 : 복부 신경절의 (A) 도식 (B) 두 세포 내 스테인드 PS 모터 뉴런.. (1) 세포체; (2) 주요 신경 돌기; 횡 neuropil에서 분기 (3) 수지상; (4) 신경 N1의 후방 지점을 통해 프로젝트를 축색 돌기; 바 = 100 μm의.
적은 고급 실험자, 또는 복부 신경절의 형태를 연구하고자하는 사람들을 위해, 신경 N1을 통해 PS 및 RS 모터 신경 풀에서 backfills, 재미있는 운동입니다. 그림 2에서(2), RS와 하나의 hemiganglion PS 모터 뉴런은 각각 공동 2+ (RS) 및 Ni 2+ 이온 (PS)으로 염색 하였다. PS 모터 뉴런의 세포체는 신경 N1 (그림 22-1)의 기지로 후방에 위치하고 있습니다. RS 모터 뉴런의 모든 세포체는 신경 N1 (그림 22-2)의베이스에 전방에 위치하고 있습니다.
그림 22 : 전방 (오렌지, 공동 2+)과 후방 (파란색, 니켈 2+) 신경 N1의 지점에서 Backfills (1) PS 모터 뉴런의 세포체;. RS의 운동 뉴런 (2) 세포체. 바 = 100 μm의.
그림 3 : 제거 발톱 (1) uropods (2). 레드 라인 (1)과 (2)는 상처의 위치를 나타냅니다. 바 = 5cm.
그림 4 :. (A) 동물 텔슨에서 복부 측면까지 고정 및 고정 (B) 가재는 차가운 식염수 발톱 구멍을 통해하여 죽인됩니다. 바 = 5cm.
그림 5 : (A) 참수 걷는 다리의 (B) 제거. 레드 라인은 상처의 위치를 나타냅니다. 바 = 1cm.
도 6 (A, B, C 및 D) 및 전방 두흉부의 측면 부분의 제거. 측면을 따라 복부의 E. 오프닝.적색 선은 (1), (2), (4), (5)의 절단 위치를 나타낸다. (3) 소화 선. 빨간색 화살표는 이미 열려 복강을 가리 킵니다. 바 = 1cm.
도 7은, (A) 시료 보행 다리 (적색 화살표)의 개구에 잡고있다 시험편가 개방되는 동안 (B) 등쪽 근육 가닥 (1)으로 횡단한다.. 흰색 화살표는 흉골 플레이트가 당겨지는 방향을 나타낸다. 흉골 동맥 (2), 신경 코드로 복강 (C) 개요 (3).
그림 8 : 고정 등의 근육 가닥 (1)와 왕새우 복부의 가로보기 및 흉골 동맥 (2); 적색 선 (3) 및 (4)의 절단 위치를 나타낸다. 바= 5mm.
그림 9 : 지느러미와 복부의 복부 부분이 서로 분리되어 (1) 레드 라인이 절단의 위치를 나타냅니다.. 복부 신경 코드와 흉골 판 (2); 복부 (3)의 일부를 지느러미.
그림 10 :.. (A) 집게의 위치가 전방 cephalothoracic sterna를 제거하는 (B) 레드 라인 (1)과 (2) 여기서 나머지 cephalothoracic sterna 사이의 근육을 절단하는 표시 (C) 흉부 신경이에 가로로되어있다 적색 선 (3) 주위의 조직으로부터 흉부 신경절을 차단. 레드 라인 (4)은 T3와 T4 사이의 컷을 나타냅니다. 바 = 5mm.
그림 11 : (A와 B) A2에서 흉골 판보기. 신경 N1은 후방 흉골 cuticular infolding (1) 전방에 흉골 cuticular infoldings (B 2) 모두에 따라 컷 조직으로부터 격리됩니다. 격리 된 신경 N1와 (C) A2 주변 지역의 높은 배율. ( 비슷한 인하와 함께 반대편에 신경 N1의 D) 분리. 적색 라인 (2) 및 (3)의 절단 위치를 나타낸다; (1) 전방 및 흉골 cuticular infoldings 후부; 바 = 5mm.
도 12 (A 및 B) A6이 조직으로부터 격리되어 신경 코드 A6의 신경에서 해제 될 수있다 (C). (D) 절연 신경 코드는 분명 실 가드 늘어선 페트리 접시에 옮겨 식염수로 채워진. 레드 라인은 상처의 위치를 나타냅니다. 바 = 5mm.
그림 13 :. 신경 코드의 지느러미와 복부 측면 (검은 선) 중 하나 신경절 식별의 측면보기. 바 = 5mm
그림 14 :. N1은 후방 지점 바 = 5mm에서 분리 된 신경의 전방 지점.
그림 15 : 접속사 (빨간색 화살표)의 외피를 통해 첫 번째 작은 컷의 복부 신경절 (A) 위치의 desheathing에 대한 방향은 신경절에 측면과 후방에 위치. 상기 결합 시쓰 통해 후속 컷 (1). (B) 적색 라인 (1)과 (2)의 신경절 테두리를 따라 횡 절단을 표시 적색 라인으로 표시된다. 칼집 그 다음은 신경절에서 가져온 할 수 있습니다. 바 = 1mm.
그림 16 :. 녹화 설정의 (A) 개요 (B) 재료 및 세포 외 녹음에 필요한 도구를 제공합니다. 전기 생리 녹음에 필요한 C. 장비. (1) 냉 램프 소스; (2) 패러데이 케이지; (3) 스테레오 현미경; (4) 공기 테이블; (5) 현미경 테이블; (6) 거울; (7) 시차 핀 전극; (8) 주사기 석유 가득젤리; (9) 점토; (10) 집게; (11) 액체 폐기물 처리; (12) 디지타이저; (13) 외 증폭기; (14) 컴퓨터, 레코딩 소프트웨어와 모니터를 장착.
도 17 : (A 및 B) (1) 및 기준 (2)의 전극 핀의 위치를 기록. (C와 D) N1이 기록 전극 주위 벤드 신경의 후방 지점입니다. 기록 전극의 E. 기본 (4) 석유 젤리 격리됩니다. F. 전체 기록 전극은 목욕 솔루션에서 석유 젤리 격리됩니다. 석유 젤리 가득 (3) 야구. 바 = 2mm.
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Discussion
가재의 해부학 및 복부 신경절 이전에 5, 18, 19, 20을 설명되었지만 그것은 중요한 신경의 절단을 방지하기 위해 절개 전에 급 숙지 권장된다.
그것은 고립 된 신경 코드의 저하를 방지하기 위해 23 ° C 이하의 온도에서 준비를 유지하는 것이 중요합니다. 이 용액을 차가운 입욕 가재 염수 매 20-30 분 여분으로 쉽게 달성 될 수있다. 이러한 상황에서 신경절 체인은 최대 12 시간 동안 전기 생리 학적 실험을 위해 사용될 수있다.
때때로 swimmeret 운동 신경이 비활성화되어 더 자연 파열 활동을 보여주지. 콜린성 작용제 카바 콜은 이들 제제의 붕괴 활성을 유도하는 데 사용된다. 차가운 왕새우 식염수에 용해, 1-3 μM의 카바 콜의 목욕 응용 프로그램은 swimmeret 리듬 (21)을 활성화하기에 충분하다.
"ove_content> 허구 운동과이 시스템에 기록 팔다리 특히 코디 리듬 활성 및 코디 세포 성질에 대한 많은 정보를 제공한다.이 시스템에서의 연결 요소는 로컬 미소 8-10 식별 추가적으로 아르 조정 네트워크는 셀룰러 세부 11,14,15 알려져있다. 세포 외 녹음을 수행 실험에서 도출 결과는 이미 수학적 모델 및 로봇 공학에 대한 예측을 할 수 있습니다.모든 swimmeret 신경 돌기는 측면 Neuropil 내에서 분기 및 세포 내이 수상 돌기에서 기록 할 수 있습니다 보여줍니다. 도 20에서, PS 모터 뉴런의 세포 내 기록이 도시되어있다. 1 M KAC + 0.1 M의 KCl (35 사이의 전극 저항 - 45 MΩ)로 채워진이 날카로운 미소 전극 (보충 참조) 측면 Neuropil 위에 배치됩니다. 진동 막 전위 w로전극이 신경 N1의베이스 부근 삽입되면 PS 및 RS 운동 뉴런의 수지상에서 엘 스파이크 기록 할 수있다.
도 21에 도시 된 바와 같이, 세포 내에서 각각의 뉴런 (예를 들면, 운동 뉴런) 얼룩, 날카로운 미세 추가적으로 1 M KAC + 0.1 M KCl을 중에 용해 형광 색소 (예를 들어, 1 % 덱스 트란 텍사스 레드, 참조 보조제)로 채워 져야한다. 2 Hz에서 250 ms의 기간에 1 nA의 펄스 편광, 이온 토 포레 시스에 의해 세포 내 운동 신경을 채우려면 적어도 10 분 동안 적용됩니다. 양으로 대전 된 염료 펄스를 탈분극과 음으로 하전 된 염료 사용하기에 과분극 펄스를 사용합니다. 긴 채우기 강한 레이블 신경 세포에서 발생합니다. 시각화를위한 신경 코드, 탈수 고정, 22를 장착해야합니다.
운동 뉴런의 풀을 염색하기위한 한 방법은 신경 N1에서 backfills을 사용하는 것이다 (도 22) (4), (23). PS 모터 뉴런의 풀을 백필 신경 N1의 후방 지점 주위에 바셀린의 잘 놓습니다. RS 모터의 풀을 염색하는 것은 물론이 신경 N1의 전방 지점에 배치 뉴런. 잘 왕새우 식염수 DDH 2 O.로 대체 그런 다음 잘 안쪽이 신경을 절감하고 실온에서 DDH 2 O (RT)에서 15 분 정도 둡니다. 또는 5 % NiCl 2 - - 석유 젤리 (DDH 2 O에 용해) 솔루션과 가까운 우물 그 후, 5 %의 CoCl2 중 하나와 우물에서 DDH 2 O를 교체합니다. 샘플은 4 ° C에서 최소 15 시간 동안 배양 할 필요가있다. , 우물을 열고 염료를 제거하고 식염수로 샘플을 3 회 씻어. 실온에서 20 분 동안 후드, Dithiooxamid 페트리 접시에 매 10 ml의 가재 식염수 (100 %를 EtOH 포화 용액) 10 방울과 니켈 2 + 또는 공동 2 + 이온을 침전. 니켈은 2 + - 이온은 파란색 니켈 (SCH)과 공동 2 +에 침전됩니다
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Acknowledgments
우리는 그림의 일부 돕는 호세 Burgert 감사합니다. 우리는 잉고 Selbach (및 그룹 "Edelkrebsprojekt NRW") 실험 동물 연구실을 공급하기 위해 자신의 노력에 감사드립니다. 우리는 원고의 첫 번째 버전을 교정 안나 C. 슈나이더 감사합니다. 이 연구는 에미 뇌터 DFG 보조금 SM 206 / 3-1과 여성의 능력에 대한 쾰른 대학의 시작 기금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-channel extracellular amplifier: MA 102 | Amplifier | Elektroniklabor, Zoologie, Universität zu Köln, Germany | |
| air-table | Technical Manufacturing Corporation (TMC) a unit of AMETEK Ultra Precision Technologies, Peabody, MA, USA |
63-534 | |
| Axon Digidata 1440A | Digitizer | Axon Instruments, Molecular Devices Design, Union City, CA | DD1440A |
| big bucket | |||
| Clampex & Clampfit | pClamp 10, recording and analysis software | Molecular Devices Design, Union City, CA | pClamps 10 Standard |
| cold lamp source | with flexible light guide (fiber optic bundle) | Euromex microscopes holland, Arnhem, BD | LE.5211 & LE.5235 |
| computer and monitor | equipped with recording software | ||
| container and pipette for liquid waste | |||
| crayfish saline | contains (in mM): 5.4 KCl, 2.6 MgCl2, 13.5 CaCl2, and 195 NaCl, buffered with 10mM Tris base and 4.7mM maleic acid; aerated for 3 hours. Adjust at pH of 7.4. | ||
| dextran, Texas Red (3000MW, lysine fixable) | fluorescent dye, lysine fixable | Life Technologies GmbH, Darmstadt, Germany | D3328 |
| dissection dish | (l x w x h) 15x7x5 cm; linned with black silicone | ||
| faraday cage | |||
| fixing pins | |||
| forceps (biology, Dumont #5) | Forceps: Biology, tip 0.05 x 0.02 mm, length 11cm, INOX | Fine Science Tools (FST), Germany | 11252-20 |
| forceps (biology, Dumont #55) | Forceps: Biology, tip 0.05 x 0.02 mm, length 11cm, INOX | Fine Science Tools (FST), Germany | 11255-20 |
| forceps (electronic, Dumont #5) | Forceps: Standard, tip 0.1 x 0.06 mm, length 11cm, INOX | Fine Science Tools (FST), Germany | 11251-20 |
| intracellular electrode | Borosilicate glass capillaries (outer/inner diameter: 1mm/0.5mm), with filament | Sutter Instruments, Novato, CA | BF100-50-10 |
| Leica S8 Apo StereoZoom | Dissection Microscope Zoom 1x - 8x | Leica, Germany | 10446298 |
| microscope table | |||
| mirror | to illuminate preparation from below | ||
| modeling clay | |||
| Olympus SZ61 | Dissection Microscope Zoom 0.67x - 4.5x | Olympus, Germany | |
| petri dish | 94 x 16 mm; lined with clear silicone | Greiner bio-one, Germany | 633180 |
| ring scissors | ThoughCut, cutting edge: sharp/blunt, straight: 13cm | Fine Science Tools (FST), Germany | 14054-13 |
| spring scissors or alternative: Vannas spring scissors | cutting edge: 8 mm, tip diameter: 0.2mm, straight: 10cm or cutting edge 2.5 mm, tip diameter 0.075 mm, straight: 8cm | Fine Science Tools (FST), Germany | 15024-10 or 15000-08 |
| student Vannas spring scissors or alternative: Moria Spring Scissors | cutting edge: 5mm, tip diameter: 0.35mm, straight: 9cm or cutting edge: 5mm, tip diameter 0,1 mm, straight: 8 cm | Fine Science Tools (FST), Germany | 91500-09 or 15396-00 |
| sylgard | 184 Silicone Elastomer Base and Curing Agent; for black sylgard add activated carbon | Dow Corning, Midland, MI, USA | |
| syringe filled with petroleum jelly and equipped with a 20 gauche needle with rounded tip |
References
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