Here, we present a protocol to induce colonic inflammation in mice by adoptive transfer of syngeneic CD4+CD45RBhigh T cells into T and B cell deficient recipients. Clinical and histopathological features mimic human inflammatory bowel diseases. This method allows the study of the initiation of colonic inflammation and progression of disease.
मानव सूजन आंत्र रोग (IBD), अपने फायदे और नुकसान के साथ प्रत्येक के रोगजनन के अध्ययन के लिए उपलब्ध कई विभिन्न पशु मॉडल हैं। हम यहाँ टी और बी सेल की कमी प्राप्तकर्ता चूहों में syngeneic प्लीहा सीडी 4 + CD45RB उच्च टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण द्वारा शुरू की है कि एक प्रयोगात्मक कोलाइटिस मॉडल का वर्णन है। मोटे तौर पर भोले प्रेरक कोशिकाओं से मिलकर बना होता है कि सीडी 4 + CD45RB उच्च टी सेल की आबादी बारीकी से मानव आईबीडी के प्रमुख पहलुओं जैसी पुरानी आंतों में सूजन उत्प्रेरण के लिए सक्षम है। इस विधि रोग शुरुआत और प्रगति के सभी पहलुओं का अध्ययन करने के लिए चालाकी से किया जा सकता है। इसके अतिरिक्त यह आंतों की सूजन में यानी सहज, अनुकूली के समारोह, और विनियामक प्रतिरक्षा सेल आबादी, और पर्यावरण जोखिम की भूमिका, microbiota, अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस लेख में हम एक कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल के साथ कोलाइटिस उत्प्रेरण के लिए कार्यप्रणाली को वर्णन। इस इंकludes सफलतापूर्वक अनुसंधान प्रयोजनों के लिए प्रयोगात्मक कोलाइटिस के इस murine मॉडल विकसित करने के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण तकनीकी पहलुओं की एक वीडियो प्रदर्शन।
The inflammatory bowel diseases (IBD) Crohn’s disease and ulcerative colitis result from an incompletely defined and complex interaction between host immune responses, genetic susceptibility, environmental factors, and the enteric luminal contents1. Recent genome-wide association studies report associations between immune cell regulatory genes and IBD susceptibility2,3. Both innate and adaptive immune cell intrinsic genes are represented in these studies, indicating a central role for these cell populations in IBD pathogenesis.
There currently exist more than 50 animal models of human IBD. While no one model perfectly phenocopies human IBD, many are useful for studying various aspects of human disease, including disease onset and progression and the wound-healing response. In the method described here, intestinal inflammation is initiated with syngeneic splenic CD4+CD45RBhigh T cell adoptive transfer into T and B cell deficient recipient mice4. The CD4+CD45RBhigh T cell population contains mainly naïve T cells primed for activation that are capable of inducing chronic small bowel and colonic inflammation. This method allows the researcher to modify key experimental variables, including both innate and adaptive immune cell populations, to answer biologically relevant questions relating to disease pathogenesis. Additionally, this method provides precise initiation of disease onset and a well-characterized experimental time course. This permits the kinetic study of clinical features of disease progression in mice. Intestinal inflammation induced by this method shares many features with human IBD, including chronic large and small bowel transmural inflammation, pathogenesis driven by cytokines such as TNF and IL-12, and systemic symptoms such as wasting5. Thus, it is an ideal model system for studying the pathogenesis of human IBD.
The method here describes in detail the protocol for inducing experimental colitis by adoptive transfer of CD4+CD45RBhigh T cells into Rag1-/- mice. We discuss key technical steps, expected results, optimization, and trouble-shooting. We address the required elements for the successful development of this murine model of intestinal inflammation for research purposes.
यहाँ हम immunodeficient चूहों में सीडी 4 + CD45RB + टी कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण द्वारा चूहों में colonic सूजन उत्प्रेरण एक कदम-दर-कदम प्रोटोकॉल का वर्णन है। प्राप्तकर्ता चूहों अन्य उपभेदों हालांकि (जैसे, BALB / ?…
The authors have nothing to disclose.
यह काम अमेरिकी Gastroenterological एसोसिएशन (आगा) रिसर्च स्कॉलर्स पुरस्कार और क्रोहन और अमेरिका (CCFA) (ईसीएस के लिए) (SZS के लिए) कैरियर विकास पुरस्कार, एनआईएच NIDDK F30 DK089692 की कोलाइटिस फाउंडेशन, और जठरांत्र जीवविज्ञान के लिए उत्तरी कैरोलिना सेंटर के विश्वविद्यालय द्वारा समर्थित किया गया और रोग अनुदान P30 DK34987 (प्रोटोकॉल कोर)। यूएनसी फ्लो कोर सुविधा यूएनसी Lineberger व्यापक कैंसर केंद्र के लिए एक NCI केन्द्र कोर सहायता अनुदान (P30CA016086) के हिस्से में समर्थित है। हम histopathological विश्लेषण और immunohistochemistry के साथ उनकी मदद के लिए पशु चिकित्सा के उत्तरी कैरोलिना स्टेट यूनिवर्सिटी कॉलेज से ल्यूक बी Borst धन्यवाद।
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
10x PBS | Gibco | 14200075 | |
12x75mm round-bottom tube | Falcon | 352052 | |
15 ml conical | Corning | 430790 | |
26g x 3/8 Needle | BD Biosciences | 305110 | |
50 ml conical | Corning | 430828 | |
70 um Cell Strainer | Fisherbrand | 22363548 | |
BD IMagnet | BD Biosciences | 552311 | |
β-mercaptoethanol | Thermo Scientific | 35602 | |
CD4-FITC IgG2b | eBioscience | 11-0041 | |
CD45RB-PE IgG2a | BD Pharminogen | 553101 | |
Complete Media | RPMI-1640, 1% Pen/Strep, 10% FBS, 0.0004% β-ME | ||
FACS tube + strainer | BD Falcon | 352235 | |
Glass Microscope Slides | Fisherbrand | 12550A3 | |
Heat-inactivated FBS | Gemini | 100-106 | |
Labeling Buffer | 1x PBS, 0.5% BSA, 2 mM EDTA | ||
Lysis Buffer | 0.08% NH4Cl, 0.1% KHCO3, 1 mM EDTA | ||
MoFlo XDP | Beckman Coulter | ||
Mouse CD4 T lymphocyte Enrichment Set – DM | BD Biosciences | 558131 | |
Mouse IgG2a-PE | BD Pharminogen | 553457 | |
Mouse IgG2b-FITC | eBioscience | 11-4732 | |
Pasteur pipet | Fisherbrand | 13-678-20D | |
Penicillin-Streptomycin Solution, 100X | Corning Cellgro | 30-002-CI | |
Petri Dish | Fisherbrand | 875713 | |
Pure Ethanol 200 Proof | Decon Labs | 2705-HC | |
RPMI-1640 | Gibco | 11-875-093 | |
Syringe | BD Biosciences | 309597 | |
Trypan blue | Corning Cellgro | 25-900-CI | |
Wash Media | RPMI-1640, 1% Pen/Strep, 0.0004% β-ME |