Abstract
Under bakteriæmi kan Streptococcus pneumoniae translokerer over det vaskulære endotel i myocardium og danne diskrete bakterier fyldt mikroskopiske læsioner (småsår), der er bemærkelsesværdige på grund af fraværet af infiltrerende immunceller. På grund af deres udslip af kardiotoksiske produkter, S. pneumoniae inden småsår menes at bidrage til hjertesvigt, der ofte observeres under rase invasiv pneumokoksygdom hos voksne. Heri påvises en protokol for eksperimentel mus infektion, der fører til reproducerbar hjerte- mikrolæsion dannelse inden for 30 timer. Undervisningen tilbydes på mikrolæsion identifikation i hematoxylin & eosin farvede hjerte sektioner og de morfologiske forskelle mellem tidlige og sene småsår er fremhævet. Undervisningen tilbydes på en protokol til verifikation af S. pneumoniae inden småsår anvendelse af antistoffer mod pneumokok kapselpolysaccharid ogimmunofluorescens-mikroskopi. Endelig er en protokol for antibiotisk indgreb, der redder inficerede mus og til påvisning og vurdering af ardannelse i hjerterne på rekreationshjem mus forudsat. Tilsammen vil disse protokoller lette efterforskningen af de molekylære mekanismer bag pneumokok hjerte- invasion, cardiomyocyte død, hjerte remodellering som følge af eksponering for S. pneumoniae, og immunresponset på pneumokokker i hjertet.
Introduction
Indlæggelse af voksne til community-erhvervet pneumoni (CAP) bærer en dokumenteret risiko for uønskede hjertetilfælde, der bidrager til dødeligheden 1-4. I en nylig undersøgelse fra Corrales-Medina et al. Hjertekomplikationer viste sig at være forbundet med og / eller er ansvarlige for 27% af lungebetændelse-associerede dødsfald 3. Streptococcus pneumoniae (den pneumokokker), den mest almindelige årsag til den fælles landbrugspolitik og sepsis 5, har været direkte forbundet med uønskede hjertetilfælde hos så mange som 19% af optaget voksne patienter 6. Utilsigtede hjertetilfælde forbundet med lungebetændelse omfatte ny eller forværret hjerteinsufficiens, arytmier og myokardieinfarkt efter faldende frekvens 6.
I en nylig PLoS Patogener artikel af Brown et al., Blev S. pneumoniae fundet at være i stand til translokation gennem hjertets vaskulære endotel, indtræden i myocardium, og dannelse af diskrete ikke-purulent mikroskopiske læsioner (småsår) fyldt med bakterier i hjertekamrene under invasiv pneumokoksygdom (IPS) 7. Dokumentation af hjerte mikrolæsion dannelse blev observeret i hjerte-prøver fra ikke-menneskelige primater og enkeltpersoner, der var bukket under for pneumokok-infektion. Ligeledes eksperimentelt inficerede mus reproducerbart udviklet kardiale småsår. Hos mus var mikrolæsion størrelse og antal positivt korreleret med varigheden og sværhedsgraden af bakteriæmi, niveauer af kardial troponin i sera, og afvigende hjerteelektrofysiologi. Bakteriel translokation ind i hjertet blev fundet at ske via de samme mekanismer, der er ansvarlige for translokation af pneumokok over blod-hjerne-barrieren og udvikling af pneumokok-meningitis, dvs., cholin-bindende protein A-medieret invasion af vaskulære endotelceller i en laminin receptor og Blodplade -activating faktor receptor afhængig måde 8. Microlesiondannelse kræves også pneumokok poredannende toksin pneumolysin, der blev fundet at dræbe cardiomyocytter 7.
Pneumokok kardiale småsår er adskilt fra purulent blødt væv og hjerte abscesser, der er forårsaget af andre Gram-positive bakterier, herunder Staphylococcus aureus. Disse er kendetegnet ved en enkelt foci af bakterier omgivet af neutrofiler og fibrinaflejring 9,10. Småsår dannet af S. pneumoniae er mindre i størrelse, fordelt i en berørt hjerte og mangler immune celleinfiltrater. I de tidlige stadier af infektion, småsår forårsaget af S. pneumoniae fremstå som områder med beskadiget eller betændt væv, der minder om de patologiske tegn på kardiomyopati. Nogle monocytter kan observeres i løbet af denne tid, men deres tilstedeværelse er kortvarig og læsioner hurtigt blive nekrotiske i udseende og fyldt med bakterier og samtidig fortsætte med at grow i størrelse, indtil dyrets død eller antimikrobielle intervention. Vigtigere er det, inden for 3 dage antibiotika indgriben, er rigelig immun celle infiltration observeret ved den tidligere læsion websted, og dette er ledsaget af robust kollagenaflejring. Lignende hjerte-remodellering er blevet rapporteret at forekomme efter infarkt sammen med varige konsekvenser for hjertefunktionen 11-15. Således småsår er en potentiel forklaring på de negative kardiale hændelser, der opstår i løbet af IPD og eventuelt øget forekomst af hjerte-dødelighed i rekonvalescente personer, der har overlevet sygdommen episode.
Heri er undervisning, som gives på den eksperimentelle musemodel af IPD og hjerte-læsion dannelse og visualisering af hjerte-småsår på tidlige og sene stadier af infektionen. Protokollen til påvisning af kollagenaflejring hos dyr, der er blevet reddet af antimikrobielle indgriben demonstreres. Målet med denne artikel er at facilitate forskningen af andre forskere på dette vigtige og nye pneumokok patologi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Alle mus forsøg blev revideret og godkendt af Institutional Animal Care og Brug udvalg ved The University of Texas Health Science Center på San Antonio (protokol # 13032-34-01C). Animal pleje og forsøgsprotokoller overholdes Public Law 89-544 (Animal Welfare Act) og ændringer, sundhedstjenester retningslinjer, og vejledningen for pleje og anvendelse af forsøgsdyr (US Department of Health & Human Services).
1. Infektion
- Opnå BALB / c-mus af begge køn i alderen 10-12 ugers alderen.
BEMÆRK: S. pneumoniae serotype 4 stamme TIGR4 er en virulent klinisk isolat, der er blevet sekventeret 16. - Grow TIGR4 i Todd-Hewitt-bouillon ved 37 ° C i 5% CO 2, indtil den når en optisk densitet (OD) 620 0,5 (svarende til 1,0 x 10 8 kolonidannende enheder [CFU] / ml). Pelletere pneumokok kultur ved centrifugering i 10 minutter ved 3, 500 xg og fjern supernatanten under anvendelse af en vakuumledning. Suspender og fortyndes bakterier med steril phosphatpufret saltopløsning (PBS) til en slutkoncentration på 1,0 x 10 4 CFU / ml.
- Ved hjælp af en induktion kammer, bedøver mus med 2,5% fordampet isofluran i oxygen. Bekræft bedøvede tilstand ved forsigtig tå pinch med stumpe pincet.
- Hold bedøvede mus ved sin harmoniske og oprejst med den ene hånd, injicere hver mus intraperitonealt (ip) med 100 pi af S. pneumoniae suspension ved hjælp af en sprøjte med en 27-30 gauge nål (svarende til en belastningsdosis på 1,0 x 10 3 CFU). Placer musen tilbage i sit bur. Mus typisk vække 30-40 sek efter injektion.
- Lad infektionen forløbe i mindst 24 (tidligt) eller 30 (avanceret) HR.
- Aflive musene ved CO 2 kvælning. Udfør cervikal dislokation at sikre musen er afgået ved døden. Eutanasi bekræftes yderligere ved fjernelseaf hjertet i trin 1.6.
- Desinficer halen med en spritserviet, og snip en 2-3 mm sektion. Collect 2 pi blod og serielt fortynde blodet 10-fold i PBS indeholdende natriumheparin 1 U / ml fem gange. Plate seriefortyndinger på et tryptisk soja blodagarplade og inkuberes natten over ved 37 ° C i 5% CO 2. Den næste dag ekstrapolere fra kolonitællinger niveauet af bakteriæmi.
- Immobilisere musen i liggende stilling på en kirurgisk platform. Spray brystet med 70% ethanol og dup tør. Brug af kirurgiske sakse og tænger åbner brysthulen, fjern brystkassen, og transekt membranen for at blotlægge hjertet og lungerne. Med en saks skære blodkar forbundet til hjertet og forsigtigt udskære hjerte med forsigtighed for at undgå blå mærker med pincet.
- Skyl hjertet med PBS og derefter placere i vævsprøve indsamling kassetter, således at kronafsnit ville blive opnået under væv sektionering. For paraffinindlejring, place kassetterne i 10% pufret-formalinopløsning og den næste dag sende for paraffin embedding.
- Alternativt flash fryse hjælp oktober Compound inden en kryoformen der er blevet placeret på tøris.
2. Visualisering af Hjerte læsioner og Pneumokokker inden Læsioner
- Skær ned paraffinindlejrede hjerte sektioner, således at de 4 kamre i hjertet er synlige i hvert væv sektion. Skær slides ved tykkelse på 5 um.
- Afparaffiniser og plette lysbilleder med hematoxylin & eosin (H & E) under anvendelse af standardfremgangsmåder. 17
- Vis H & E farvet hjerte-sektioner ved hjælp af et lysmikroskop ved lav (100X, 200X) og høj (olieimmersion: 400X, 1.000X) forstørrelser. Karakterisere hjerter for tilstedeværelsen af småsår i myokardiet. Her erhverver H & E billeder ved hjælp af en Zeiss Axioskop 2 mikroskop udstyret med en 100X 1.3 blændetal Plan-Neofluar mål.
BEMÆRK: I tidlige stadier hjerte- lesions diskrimineres ved deres forskellen farvet udseende og i nogle tilfælde forekomsten af immunceller (monocytter og granulocytter), hvad der synes at være monocytter. I avancerede læsioner, især dem, der ses ved 30 timer, er immunceller fraværende og store vacuole-lignende læsioner observeres i deres sted. Det er vigtigt at bemærke, at mens immunsystemet celleindstrømning under de tidlige stadier af hjerte- læsion udvikling kan forekomme det synes ikke at være et krav.
3. Immunfluorescerende Microscopy for Pneumokokker inden småsår
- Afsnit hjerte i cryomolds med mikrotom til en tykkelse på 5 um og sted sektioner onto positivt ladede objektglas. Tillad frosne hjerte-sektioner at tø og lufttørre. Fix sektioner i 10 minutter i 10% neutral bufret formalin (pH 6,8-7,2 ved 25 ° C).
- Vask slides (3x) i PBS i 5 minutter, permeabilisere i 15 minutter i 0,2% Triton X-100 i PBS, derefter vaskes igen i PBS.
- Block væv secti på på objektglas med 10% gedeserum i PBS i 1 time.
- Skyl objektglassene med PBS, dække og inkuber kardiale sektioner med kanin-anti-serotype 4 pneumococcus antiserum ved 1: 1.000 i PBS med 10% gedeserum i 2 timer ved 37 ° C.
BEMÆRK: negative kontroller efterforskere bør bruge naive kaninantiserum - Efter vask med PBS, cover og inkuber sektioner med 10% gedeserum-PBS med gede-anti-kanin-FITC-konjugeret antistof ved 1: 2.000 i 30 minutter ved 37 ° C.
- Efter fabrikantens instruktioner bruge DAPI (4 ', 6- diamidino-2-phenylindol) ved 5 mg / ml til visualisering af eukaryote kerner. Vask og montere vævssnit med FluorSave.
- Anskaf fluorescerende billeder ved hjælp af et konfokalt mikroskop system på både lav og høj forstørrelse. Juster numeriske apertur følgelig at opnå optimale resultater. Her erhverve fluorescerende billeder ved hjælp af et konfokalt system med en 60X 1,42 numerisk mål åbning.
- Begynd med mus inficeret ip med 1,0 x 10 3 CFU af TIGR4 som tidligere angivet i trin 1.
- Begyndende ved 30 timer efter infektion, administrere farmaceutisk kvalitet ampicillin ip (80 mg / kg legemsvægt) i 100 pi saltvand hver 12 timer til 36 timer. Samle hjerter på det ønskede tidspunkt, og som er beskrevet i trin 1.6 for paraffinindlejring og væv, sektionering.
5. kollagenaflejring Detection
- Brug xylen og sorterede alkohol vasker med deioniseret vand, afparaffiniser og hydrat vævssnit under anvendelse af standardfremgangsmåder 17. Behandl sektioner med vandig 0,2% phosphomolybdensyre i 5 minutter og skyl med deioniseret vand i 5 minutter.
- Stain sektioner med 0,1% Sirius Red i picrinsyre i 2 timer ved stuetemperatur.
- Vask sektioner i 0,01 N saltsyre i 3 minutter og skylles ved hjælp af 70% ethanol i 1 min.
- Dehydrate afsnittene ved brug af identiske, men omvendt rækkefølge vasker til dette er beskrevet i 5.1, dehydrere hjerte-sektioner i stigende og gradueret koncentrationer af ethanol derefter xylen.
- Mount vævssnit med et monterings opløsning til mikroskopisk evaluering.
- At identificere områder af kollagenaflejring undersøge farvede vævssnit for områder af dyb læse farvning under lav og høj forstørrelse med anvendelse af et lysmikroskop. Ethvert område i hjertekamrene af hjertet, der er rød er et område, hvor kollagen er blevet deponeret. Områder uden denne røde plet er steder af sundt væv, der mangler kollagen deposition. Heri erhverve Picro Sirius Red farvede billeder ved hjælp af et mikroskop udstyret med en 20X 0,5 numerisk mål blænde.
BEMÆRK: Atriet pletter røde hos raske væv.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Visualisering af småsår af H & E
Hjerte småsår blev observeret i hjertekamrene af H & E-farvede hjerte-afsnit fra mus med IPD efter deres IP udfordring med TIGR4. Figur 1 viser stigningen i størrelsen af disse læsioner mellem 24 og 30 timer efter infektion (HPI), med større antal hematoxylin -stained (dvs. lilla-blå) pneumokokker synlig i læsionen. Småsår blev karakteriseret ved en vacuole-lignende morfologi, tættere eosin (rød) farvning af cardiomyocytter i cellerne umiddelbart støder op til læsionsstedet, diplococci inden læsioner, og en generel mangel på immunceller. Cirka halvdelen af læsioner var tilstødende til synlige blodkar. Mellem 24 og 30 HPI småsår blev mere talrige og væsentligt større. Ved 30 HPI ekstracellulære bakterier ofte kunne ses streaming fra en læsion mellem celler.
Visualizatipå S. pneumoniae Brug Immunfluorescerende Microscopy
At visualisere og bekræfter, at S. pneumoniae var faktisk inden læsioner blev immunfluorescensfarvning for serotype 4 kapselpolysaccharid, der er produceret af TIGR4 (figur 2), der anvendes. Billeder taget viste tilstedeværelsen af tætpakkede og tætte aggregater af S. pneumoniae inden mikrolæsion sites.
Dokumentation for Cardiac ardannelse
Picro Sirius Red-farvning blev udført på hjerte-sektioner fra mus, der var blevet reddet med ampicillin og uinficerede kontroller. I antibiotiske reddet rekonvalescente mus, var der en dramatisk stigning i nærvær og intensitet Picro Sirius Red pletten med bands streaming fra hvad der synes at være tidligere læsioner steder i hjertekamrene (Figur 3). I modsætning hertil blev hjertekamrene i kontrolsektionerne ufarvede indikerer, at kollagenaflejring var fraværende (Ikke vist).
Tilsammen viser disse resultater evnen til at visualisere hjerte- småsår i mus med svær IPD og adgang resulterende ardannelse i hjertekamrene anvendelse af standard histologiske procedurer. Vigtigere, hjerte- småsår uvægerligt forbundet med høje titere af S. pneumoniae og tidskrævende at mediere deres dannelse.
Figur 1: Påvisning af småsår i H & E farvet hjerte-sektioner Repræsentative billeder (1.000 x) af hjerte-småsår observeret ved 24 hor og 30 timer efter infektion.. Sort skala barer svarer til 10 um. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
filer / ftp_upload / 52590 / 52590fig2.jpg "/>
Figur 2: Immunfluorescerende påvisning af S. pneumoniae inden kardiale småsår. Immunfluorescerende mikroskopi under anvendelse af antistof mod serotype 4 kapselpolysaccharid (grøn) bekræftede tilstedeværelsen af S. pneumoniae indenfor hjerte- småsår. Kernerne blev farvet blå med DAPI. Hvid skala bar svare til 20 pm. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Figur 3: kollagenaflejring på et tidligere hjerte-mikrolæsion websted i en rekonvalescent mus Repræsentant billede (200X), der viser en Picro siriusrødt farvede hjerte-mikrolæsion i ventriklen af en mus 5 dage efter antibiotisk indgreb i.vasive pneumokoksygdom. Rød indikerer collagen deposition. Sort skala bar svare til 20 pm. Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne rapport, at en meget reproducerbar metode fremkalde S. pneumoniae medieret hjerte- småsår i mus under IPD og teknikker til deres visualisering demonstreres. Mus inficeret med en dosis af bakterier, der overgår immunsystemets tærskel for clearance, hvilket fører til høj kvalitet bakteriæmi svarende til den, der forekommer i løbet af human sepsis og fører til eventuel bakteriel translokation i myokardiet. Af endnu ukendte årsager, S. pneumoniae i hjertet er i stand til at replikere ufortrødent af værtens immunrespons. Dette er genstand for igangværende efterforskning og denne publikation kan fremme andre efterforskere i deres bestræbelser på at deltage.
H & E farvning tillader mikrolæsion visualisering ved hjælp af standard lysmikroskopi da kardiomyocytter pletten lyserød til rød, mens hjerte-småsår og bakterier i pletten blå til dyb lilla. Denne skarp kontrast gør det nemt Detectipå af de småsår på senere stadier af infektionen, når læsionerne er større. For at kontrollere tilstedeværelsen af S. pneumoniae inden for de kardiale småsår blev immunfluorescerende mikroskopi under anvendelse af antiserum mod serotype 4 kapselpolysaccharid, som bæres af TIGR4 udføres. Vigtigere er det, specifikke anti-kapsel-antistof, der skal anvendes, afhænger af serotype af pneumokok-stamme, der anvendes til eksperimentel udfordring. Alternativt kan forskere også anvende kommercielt tilgængelige monoklonale antistoffer mod pneumolysin, det poredannende toksin S. pneumoniae, eller at detektere komponenter i pneumokok cellevæg (dvs. TEPC-15). Mens disse antistoffer opdage pneumokokker i hjertet, tidligere erfaringer viser, at antistoffer mod kapselpolysaccharid giver de mest overbevisende billeder 7.
S. pneumoniae medieret hjerte- mikrolæsion formation kræver interaktionpneumokok adhesin cholinbindingsprotein A med værten protein laminin receptor for bakteriel adhæsion til vaskulære endotelceller og interaktion af bakterier cellevæg phosphorylcholin med værten blodpladeaktiverende faktor receptor for bakteriel transmigration gennem cellen 7,8. Derfor er det vigtigt at bemærke, at mikrolæsion dannelse tæt knyttet til infektiøs byrde og tid, hvilket øger hyppigheden og varigheden af disse interaktioner og giver tid til bakterierne til at replikere og synlige læsioner at udvikle sig. Vi har tidligere fastslået, at en IP infektiøs dosis på mere end 1,0 x 10 3 CFU S. pneumoniae-stamme TIGR4 resulterer i for hurtig død mus og som følge dårlig læsion formation. Under denne infektiøs dosis spontan clearance forekommer i nogle mus, og i andre forsinkede indtræden af alvorlig sygdom iagttages. Men for mus udfordret med 1,0 x 10 3 CFU af TIGR4 mellem 24 og 36 timer,læsioner hurtigt akkumuleres i antal og vokse i størrelse kontinuerligt indtil musen bliver døende. Således infektiøs dosis af den inficerende stamme skal titreres til at replikere en lignende tilstand af sygdom med en døende tilstand udvikler sig i ikke mindre end 30 hpi. Vigtigt er det, har vi gentagne gange observeret hjerte- læsion dannelse i mus, der var inficeret intranasal med 1,0 x 10 7 CFU og intratrakealt med 1,0 x 10 5 CFU af TIGR4. Efter disse udfordring ruter udvikling af alvorlig sygdom forekom på senere tidspunkter. Vi observerede også mikrolæsion formation med andre virulente stammer af S. pneumoniae, såsom serotype 2 isolat D39, omend ved forskellige frekvenser. Således læsioner er ikke et resultat af undersøgelsesperioden infektion rute eller specifikke for TIGR4, men i stedet bundet til varigheden og sværhedsgraden af sygdommen episode. Heri anbefaler vi at inficere mus ip da denne udfordring rute giver den højeste grad af reproducerbarhed. Hvis en different stamme af S. pneumoniae er brugt eller en anden smitsom rute ønskes, efterforskere bør sigte mod bakteriæmi ved niveauer> 10 5 CFU ml blod i mindst 24 timer.
Antimikrobiel indgriben tillader studiet af hændelser, der opstår under rekonvalescens, modellering et menneske i det intensive indstilling Care Unit. Det er værd at bemærke, at ikke alle mus overlever trods antimikrobiel behandling og bekræftet bakterieclearance. Undersøgere bør forvente overlevelsesrater mellem 50-60%, og som sådan skal regulere kohorten størrelse derfor at behandle tabet af dyr. Regelmæssig overvågning af dyrene efter 24 timers anbefales at sikre overholdelse af Institutional godkendte dyr protokoller. Picro Sirius Red-farvning er en enkel og standard teknik, der anvendes til at visualisere collagen deposition. Heri er det vist, hvordan denne plet kan anvendes til at undersøge hjertets remodellering i hjertekamrene i hjertet efter en traumatisk infectious episode. Picro Sirius Red blev valgt frem for andre almindeligt anvendte teknikker til at visualisere kollagenaflejring, såsom "Massons Trichrome Stain", på grund af den skarpe kontrast det tilbudt mellem den deponerede collagen og det omgivende væv. Dette har vist sig at være uhyre nyttig ved vurderingen af omfanget af myocardial kollagenafsætning efter antibiotikum i en kvantitativ måde ved hjælp af software som ImageJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Todd-Hewitt broth | Neogen | 7161A | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
| anti-serotype 4 pneumococcus antiserum | Statens Serum Institut | 16747 | |
| goat anti-rabbit FITC conjugated antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillin | Sigma | A9393 | |
| phosphomolybdic acid 0.2% | Electron Microscopy Sciences | 26357-01 | |
| 0.1% Sirius Red in picric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-02 | |
| 0.01 N hydrochloric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-03 | |
| Tissue Tack Microscope Slides | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Paralube Vet Ointment | Dechra | 12920060 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | unspeciified | Standard |
References
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes. Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies. PLoS Med. 8, e1001048 (2011).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin. Proc. 89, 60-68 (2014).
- Kumar, S., et al. Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection. Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).
- Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events. Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).
- Brown, A. O., et al. Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function. PLoS Pathogens. In press, (2014).
- Orihuela, C. J., et al. Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models. The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).
- Flick, M. J., et al. Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia. Blood. 121, 1783-1794 (2013).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).
- Arenal, A., et al. Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias. Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).
- Deneke, T., et al. Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).
- Bakker, J. M., et al. Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation. Circulation. 77, 589-606 (1988).
- Verma, A., et al. Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).
- Wu, K. C. Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI. Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).
- Tettelin, H., et al. Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae. Science. 293, 498-506 (2001).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008, (2008).
