Abstract
Во бактериемии пневмококк может перемещать через сосудистый эндотелий в миокард и образуют дискретные бактерий, заполненные микроскопические повреждения (микроповреждениям), которые замечательно из-за отсутствия проникновения иммунных клеток. Из-за их выпуском кардиотоксичных продуктов, S. пневмонии в микроповреждениям, как полагают, внести свой вклад в сердечной недостаточности, которая часто наблюдается при гремучей инвазивной пневмококковой инфекции у взрослых. В этом свидетельствует протокол для экспериментального заражения мыши, что приводит к непередаваемы образование сердца microlesion в течение 30 часов. Обучение проводится по идентификации microlesion в гематоксилином и эозином окрашенные срезы сердца и морфологические различия между ранними и поздними микроповреждениям будут выделены. Обучение проводится по протоколу для проверки S. пневмонии в микроповреждениям с использованием антител против пневмококковой капсульного полисахарида ииммунофлуоресцентный микроскопии. Наконец, протокол для вмешательства антибиотиков, что спасает мышей, инфицированных и для выявления и оценки формирования рубцовой в сердцах выздоровления мышей предоставляется. Вместе, эти протоколы будут содействовать расследованию молекулярных механизмов, лежащих в основе пневмококковой сердца вторжение кардиомиоцитов смерть, ремоделирования сердца в результате воздействия S. пневмонии, а иммунный ответ на пневмококков в центре.
Introduction
Госпитализация взрослых внебольничной пневмонией (ВП) осуществляет документально риск неблагоприятных сердечных событий, которые являются причиной смертности 1-4. В недавнем исследовании, проведенном Корралес-Медина и др. Сердечно-сосудистых осложнений, оказались связаны с и / или ответственность за 27% от пневмонией смерти, связанных 3. Пневмококк (пневмококк), наиболее распространенной причиной CAP и сепсиса 5, была непосредственно связана с неблагоприятными сердечно-сосудистых событий в целых 19% допущенных взрослых пациентов 6. Неблагоприятные сердечные события, связанные с пневмонией включают новые или ухудшение сердечной недостаточности, аритмии и инфаркта миокарда в порядке убывания частоты 6.
В недавней статье PLoS патогенов Коричневый и др., S.pneumoniae, было установлено, что способен транслокации через сердечной сосудистого эндотелия, вступления в myocardiuм, и формирование дискретных негнойный микроскопических повреждений (микроповреждениям), заполненных бактерий в желудочки во время инвазивной пневмококковой инфекции (IPD) 7. Данные образования сердечной microlesion наблюдалось в сердечных пробах приматов и людей, которые умерли от пневмококковой инфекции. Кроме того, экспериментально инфицированных мышей воспроизводимо разработан сердца микроповреждениям. У мышей, размер microlesion и номер был положительно коррелирует с длительностью и тяжестью бактериемии, уровни сердечного тропонина в сыворотке и аномальным сердечной электрофизиологии. Бактериальной транслокации в сердце был обнаружен с помощью тех же механизмов, ответственных за транслокацию пневмококка через гематоэнцефалический барьер и развития пневмококковой менингита, то есть, холин-связывающий белок опосредованной инвазии эндотелиальных клеток сосудов в рецептора ламинина и тромбоцитов -activating рецептора фактора зависит способ 8. Microlesформирование ионного также требуется пневмококковой порообразующий токсина пневмолизин, который был найден, чтобы убить кардиомиоцитов 7.
Пневмококковые сердца микроповреждениям отличаются от гнойного мягких тканей и сердечной абсцессов, вызываемых другими грамположительных бактерий, включая золотистый стафилококк. Они характеризуются одним очагов бактерий в окружении нейтрофилов и осаждения фибрин 9,10. Микроповреждениям формируется S. пневмонии меньше по размеру, распределенной по всей пораженной сердце, и не хватает инфильтраты иммунных клеток. На ранних стадиях инфекции, микроповреждениям, вызванного S. пневмонии появляются как области поврежденной или воспаленной ткани, напоминающей патологических признаков кардиомиопатии. Некоторые моноциты можно наблюдать в течение этого времени, однако их присутствие недолго и быстро стал поражения некротических по внешнему виду и заполнены бактерий, одновременно продолжая GRой по размеру до смерти животного или антимикробной вмешательства. Важно отметить, что в течение 3 дней вмешательства антибиотиков, обильное проникновение иммунных клеток наблюдается на месте бывшего поражения, и это сопровождается надежной отложения коллагена. Подобно сердечной ремоделирование, как сообщалось, происходит следующее миокарда наряду с длительностью последствий от сердечной функции 11-15. Таким образом, микроповреждениям являются потенциальное объяснение для неблагоприятных сердечных событий, которые происходят во время ИПД и, возможно, увеличение случаев сердечной смертности, связанной в выздоравливающих людей, которые пережили эпизод заболевания.
При этом инструкция предусмотрен на экспериментальной модели мыши IPD и формирования повреждения сердца и визуализации сердца микроповреждениям на ранних и поздних стадиях инфекции. Протокол для обнаружения отложения коллагена у животных, которые были сохранены антибактериальной вмешательства продемонстрировали. Цель этой статьи заключается в Facilitate исследования других исследователей по этой важной и новой пневмококковой патологии.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ПРИМЕЧАНИЕ: Все экспериментах на мышах были рассмотрены и одобрены Институциональные уходу и использованию животных комитетов в университете Техаса Научного центра здоровья в Сан-Антонио (протокол # 13032-34-01C). Уход за животными и экспериментальные протоколы придерживались закона 89-544 общественной (Закон Animal Welfare) и поправок к нему, общественных принципов здравоохранение, а также руководства по уходу и использованию лабораторных животных (Департамент здравоохранения и социальных служб).
1. Инфекция
- Получить BALB / C мышей обоих полов в возрасте 10-12 недель.
ПРИМЕЧАНИЕ: С. пневмонии серотипа 4 штамма TIGR4 является вирулентным клинический изолят, который был последовательность 16. - растут TIGR4 в Тодд Хьюитт-бульоне при 37 ° С в 5% СО 2 до достижения оптической плотности (OD) 620 0,5 (соответствует 1,0 х 10 8 колониеобразующих единиц [КОЕ] / мл). Гранул пневмококковой культуры центрифугированием в течение 10 мин при 3, 500 мкг и удалить супернатант с помощью вакуумной линии. Приостановка и разбавленной бактерии стерильной фосфатно-солевом буфере (PBS) до конечной концентрации 1,0 х 10 4 КОЕ / мл.
- По индукции, камеру, обезболить мышей с 2,5% испарившегося ИФ в кислороде. Подтвердите наркозом состояние нежным ног крайнем случае с тупыми пинцетом.
- Проведение наркозом мыши, его загривок и в вертикальном положении с одной стороны, придать каждой мыши внутрибрюшинно (IP) с 100 мкл S. пневмонии суспензию с помощью шприца с иглой 27-30 (соответствующего вызова дозе 1,0 · 10 3 КОЕ). Уложить мыши в клетке. Мыши, как правило, пробудить 30-40 сек после инъекции.
- Разрешить инфекция протекать в течение, по крайней мере 24 (в начале), или 30 (Дополнительно) часов.
- Эвтаназии мышей CO 2 удушья. Выполните шейки дислокации, чтобы обеспечить мышь, умер. Эвтаназия подтверждается еще и удалениясердца в стадии 1.6.
- Лечить хвост с тампоном, смоченным спиртом и СНиП раздел 2-3 мм. Собирают 2 мкл крови и серийно разбавленной крови в 10 раз в PBS, содержащего гепарин натрий 1 Ед / мл пять раз. Пластинчатые серийные разведения на трипсином соевым агаром крови и инкубируют в течение ночи при 37 ° С в 5% СО 2. На следующий день экстраполировать подсчета колоний уровень бактериемии.
- Зафиксировать мыши в положении лежа на спине на хирургическом платформы. Спрей груди с 70% этанола и высушите. Использование хирургические ножницы и щипцы открыть грудную полость, удалить грудную клетку, и секут диафрагму выставить сердце и легкие. С помощью ножниц вырезать кровеносные сосуды, подключенных к сердцу и слегка вырезать сердце с осторожностью, чтобы избежать синяков щипцами.
- Промойте сердце с PBS, а затем поместить в ткани ЗАБОР кассет, таких, что корональные разделы будут получены в ходе ткани срезов. Для парафин, PLAн.э. кассеты в 10% -ном растворе в буфер формалина и на следующий день отправить на парафин.
- Кроме того Ледяная вспышка с помощью октября соединение в cryomold, который был помещен на сухом льду.
2. Визуализация поражения сердца и пневмококки в поражениями
- Сократите парафиновые срезы сердца, такие, что 4 камеры сердца видны в каждой секции ткани. Сокращение слайдов при толщине 5 мкм.
- Deparaffinize и пятен срезов гематоксилин и эозином (H & E), используя стандартные методы 17.
- Посмотреть H & E окрашенных сердца разделы с помощью светового микроскопа при низких (100X, 200X) и высокий (нефти погружения в воду: 400X, 1,000X) увеличениях. Определение характеристик сердца в присутствии микроповреждениям в миокарде. Здесь приобретают H & E изображения, используя Zeiss Axioskop 2 микроскопа, снабженного 100X 1,3 числовая апертура план-NEOFLUAR цели.
ПРИМЕЧАНИЕ: На ранних стадиях сердечной лesions различаются по их внешнему виду окрашенных дифференциального и в некоторых случаях в присутствии иммунных клеток (моноцитов и гранулоцитов), что представляется моноциты. В продвинутой стадии заболевания, особенно такие, как в 30 часов, иммунные клетки отсутствуют и большие вакуолей, как поражения наблюдаются на своем месте. Важно отметить, что в то время как приток клеток иммунной на ранних стадиях развития повреждения сердца может происходить не по всей видимости, будет требование.
3. Иммунофлуоресцентного микроскопии для пневмококков в микроповреждениям
- Раздел сердце в cryomolds с микротома до толщины 5 мкм секций и место на положительно заряженных стеклах. Разрешить замороженные сердца разделы таять и сухой воздух. Закрепить секции в течение 10 мин в 10% нейтральный буферный формалин (рН 6,8-7,2 при 25 ° С).
- Промыть слайдов (3x) в PBS в течение 5 мин, проницаемыми в течение 15 мин в 0,2% Triton X-100 в PBS, затем промыть еще раз в PBS.
- Блок тканей secti на слайдах на 10% козьей сывороткой в PBS в течение 1 часа.
- Промыть слайды с PBS, и инкубировали крышки сердечных секции с кроличьей анти-серотипа 4 пневмококка антисыворотки 1: 1000 в PBS с 10% козьей сывороткой в течение 2 ч при 37 ° С.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для отрицательных контролей следователи должны использовать наивный кроличьей антисыворотки - После промывки PBS, и инкубировали крышки секции с 10% козьей сывороткой в PBS-козы против кролика FITC конъюгированных антител в 1: 2000 в течение 30 мин при 37 ° С.
- После инструкцией изготовителя, использовать DAPI (4 ', 6 диамидино-2-фенилиндол) в 5 мг / мл для визуализации эукариотических ядер. Вымойте и смонтировать разделы ткани с FluorSave.
- Приобретать флуоресцентные изображения с помощью конфокальной системы микроскопа при низких, так и высоких увеличения. Регулировка числовую апертуру, соответственно, чтобы получить оптимальные результаты. Здесь, приобретать флуоресцентные изображения с помощью конфокальной системы с 60X 1,42 численного цели апертуры.
- Начните с мышей, инфицированных IP с 1,0 х 10 3 КОЕ TIGR4 как указывалось ранее в шаге 1.
- Начиная с 30 ч после инфекции, администрирование фармацевтического качества ампициллину IP (80 мг / кг массы тела) в 100 мкл физиологического раствора каждые 12 ч в течение 36 ч. Сбор сердца в нужной точке времени и процесс, как описано в стадии 1,6 для парафин и ткани, секционирования.
5. Коллаген осаждения обнаружения
- Использование ксилол и градуированные моет спирта с деионизированной водой, deparaffinize и гидрата срезах ткани с помощью стандартных методов 17. Treat секции с водным 0,2% фосфорно-молибденовой кислоты в течение 5 мин и промывают деионизированной водой в течение 5 мин.
- Пятно секции с 0,1% Sirius Red в пикриновой кислоты в течение 2 ч при комнатной температуре.
- Промыть секции в 0,01 Н хлористоводородной кислотой в течение 3 мин и промыть с использованием 70% этанола в течение 1 мин.
- Dehydraт.е секции с помощью идентичной, но в обратном порядке стирок в том, что изложенные в 5,1, обезвоживают сердечных секции в увеличении и переменной концентрации этанола, то ксилол.
- Гора ткани участки с решение для монтажа микроскопическом исследовании.
- Для идентификации областей отложения коллагена, изучить окрашенные срезы ткани для районов глубокого окрашивания читать под низким и высоким увеличением с помощью светового микроскопа. Любой район, в желудочках сердца, которое есть красный область, где коллаген был сдан на хранение. Области без этого красного пятна сайты здоровой ткани, лишенные отложение коллагена. При этом приобрести Picro Сириус Красные окрашенные изображения с помощью микроскопа, снабженного 20X 0,5 численного цели апертуры.
ПРИМЕЧАНИЕ: атриуме пятна красные в здоровых тканях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Визуализация микроповреждениям Н & Е
Сердечные микроповреждениям наблюдались в желудочках H & E окрашенных сердечной секции из мышей с IPD следующие их ИС вызов с TIGR4. Рисунок 1 демонстрирует увеличение размера этих поражений между 24 и 30 ч после инфекции (ИНН), с большим числом гематоксилином -stained (то есть, пурпурно-синий) пневмококки видны в поражении. Микроповреждениям характеризовались вакуолей, как морфология, плотнее эозином (красный) окрашивания кардиомиоцитов в клетках, непосредственно примыкающих к месте повреждения, диплококки в поражениях, и общее отсутствие иммунных клеток. Примерно половина повреждения были рядом с видимыми кровеносными сосудами. Между 24 и 30 HPI микроповреждениям стали более многочисленными и значительно больше. В 30 HPI внеклеточные бактерии часто можно было видеть в потоковом режиме с поражением между клетками.
Visualizatiна поверхности S. пневмонии Иммунофлуоресцентной микроскопии
Для визуализации и убедитесь, что С. пневмонии были действительно в течение поражений, был использован иммунофлуоресцентный окрашивание серотипа 4 капсульного полисахарида, который производится TIGR4 (рисунок 2). Изображения, захваченные показал наличие плотно упакованных и плотных агрегатов S. пневмонии в microlesion сайтов.
Свидетельство сердечной рубцов
Picro Сириус красный окрашивание проводили на сердечных секций от мышей, которые были спасены с ампициллином и неинфицированных контрольных. В антибиотиков спас выздоравливающих мышей, было резкое увеличение присутствия и интенсивности Picro Сириус красное пятно с полосами потокового от того, что, как представляется, бывшие сайты поражения в желудочки (рисунок 3). В отличие от этого, желудочки в контрольных участках были запятнано о том, что отложение коллагена отсутствовал (Не показан).
Вместе эти результаты свидетельствуют о возможности визуализации сердца микроповреждениям у мышей с тяжелой IPD и для доступа к образованию результирующего рубца в желудочках использованием стандартных гистологических процедур. Важно отметить, что сердечные микроповреждениям неизменно связана с высокими титрами S. пневмонии и время, необходимое для посредничества на их формирование.
Рисунок 1: Обнаружение микроповреждениям в H & E окрашенных сердца разделах Типичные изображения (1,000X) сердечных микроповреждениям, наблюдаемых на 24 горизонте и 30 ч после заражения.. Черный масштабные линейки соответствуют 10 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Файлы / ftp_upload / 52590 / 52590fig2.jpg "/>
Рисунок 2: иммунофлуоресцентного выявления S. пневмонии в сердечных микроповреждениям. Иммунофлуоресцентного микроскопии с использованием антитела против серотипа 4 капсульного полисахарида (зеленый) подтвердили наличие S. пневмонии в сердечных микроповреждениям. Ядра окрашивали синий с DAPI. Масштабная линейка Белый соответствуют 20 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 3: Коллаген осаждения на прежнем месте сердца microlesion в выздоравливающих мыши представитель изображение (200X), показывающий Picro Сириус Красный окрашены сердца microlesion в желудочке мыши 5 дней после вмешательства антибиотиками в.инвазивной пневмококковой инфекции. Красный цвет означает отложение коллагена. Черный линейка соответствует 20 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этом докладе, высоко воспроизводимым методом, чтобы вызвать С. пневмонии -опосредованной сердца микроповреждениям у мышей при ИПД и методы их визуализации демонстрируется. Мыши заражены дозы бактерий, который превосходит порог иммунной системы для оформления, что приводит к высокой степени бактериемии, подобного тому, который происходит во время человеческой сепсиса и приводит в конечном итоге к бактериальной транслокации в миокард. Для еще неизвестным причинам, S. пневмонии в центре может повторить смущаясь иммунного ответа хозяина. Это предмет проводимого расследования и эта публикация может облегчить другим исследователям в их участии.
H & E окрашивание позволяет microlesion визуализации с использованием стандартной световой микроскопии с кардиомиоциты пятен розового до красного, тогда как нарушения микроповреждениям и бактерий в течение пятен голубого до темно-фиолетового. Это резкий контраст позволяет легко Детективна из микроповреждениям на более поздних стадиях инфекции при поражениях больше. Для того, чтобы проверить наличие S. пневмонии в сердечных микроповреждениям, была выполнена иммунофлуоресцентный микроскопии с использованием антисыворотки против серотипа 4 капсульного полисахарида, который осуществляется путем TIGR4. Важно отметить, что конкретные анти-капсульных антитело, которое должно быть использовано, зависит от серотипа пневмококковой штамма, который используется для экспериментальном заражении. Кроме того, исследователи также можно использовать имеющиеся в продаже моноклональные антитела против пневмолизина, порообразующего токсин S. пневмонии, или которые обнаруживают компоненты пневмококковой клеточной стенки (т.е. TEPC-15). В то время как эти антитела обнаружить пневмококки в сердце, прошлый опыт показывает, что антитела против капсульного полисахарида обеспечить наиболее убедительные образы 7.
S.pneumoniae, опосредованного формирования сердечной microlesion требуется взаимодействиепневмококковой Адгезиновая холина связывание белка А с хост белка рецептора ламинина для бактериальной адгезии к эндотелиальных клеток сосудов и взаимодействия бактерии клеточной стенки фосфорилхолина с хост фактор активации тромбоцитов рецептора бактериального перерождений через ячейку 7,8. Поэтому важно отметить, что формирование microlesion тесно связан с инфекционным бремени и времени, что повышает частоту и продолжительность этих взаимодействий и позволяет время для бактерий, чтобы повторить и видимые повреждения развиваться. Ранее мы установили, что IP-инфекционная доза превышает 1,0 х 10 3 КОЕ S. Штамм пневмонии TIGR4 приводит к слишком быстрой смерти мыши и, как следствие плохого образования поражение. Ниже этого инфекционная доза спонтанное оформление происходит в некоторых мышей, а в других задерживается начало серьезного заболевания наблюдается. Тем не менее, для мышей, зараженных 1,0 х 10 3 КОЕ TIGR4 между 24 и 36 ч,поражения, быстро набирают в количестве и увеличиваются в размерах непрерывно, пока мышь не становится умирающим. Таким образом, инфекционная доза заражения штаммом необходимо титровать повторить подобный состояние болезни с умирающим состояние развивается в не менее чем на 30 HPI. Важно отметить, что мы неоднократно наблюдали образование повреждения сердца у мышей, которые были инфицированы через нос с 1,0 х 10 7 КОЕ интратрахеально 1,0 х 10 5 КОЕ TIGR4. После этих задач в области развития маршрутов тяжелого заболевания произошла в более поздние моменты времени. Мы также наблюдали образование microlesion с другими вирулентных штаммов S. пневмонии, такие как серотипа 2 изолята D39, хотя на разных частотах. Таким образом, поражение не результат Route IP-инфекции, специфичной для TIGR4, но вместо этого привязаны к продолжительности и тяжести эпизода заболевания. Здесь мы советуем, чтобы заразить мышей IP, так как это задача маршрут предлагает высокую степень воспроизводимости. Если в Diffразличны штамм S. пневмонии используется или различных инфекционных маршрут желательно, следователи должны стремиться к бактериемии на уровнях> 10 5 КОЕ мл крови, по крайней мере, 24 ч.
Антимикробная вмешательство позволяет изучать события, которые происходят в период выздоровления, моделирующих человека в интенсивной ступени Уход за штуку. Стоит отметить, что не все мыши выжить, несмотря антибактериальной терапии и подтверждено наличие бактериального зазор. Следователи должны ожидать выживаемости 50-60% и как таковая должна регулировать размер когорты соответственно для борьбы с потерей животных. Регулярный мониторинг животных после 24 часов настоятельно рекомендуется обеспечить соответствие Институциональная утвердил протоколы животных. Picro Сириус Красный окрашивание простой и стандартный метод, используемый для визуализации отложение коллагена. При этом он продемонстрировал, как это пятно может быть использован для изучения ремоделирования сердца в желудочках сердца после травматического infectiouс эпизодом. Picro Сириус красный был выбран по сравнению с другими, обычно используемых методов визуализации отложение коллагена, такие как "Массона трихромом пятна", из-за резкого контраста между его предлагаемого осажденного коллагена и окружающие ткани. Это оказался чрезвычайно полезным при оценке степени осаждения инфаркта коллагена после антибиотиков в количественном моды с помощью таких программ, как ImageJ.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Todd-Hewitt broth | Neogen | 7161A | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
| anti-serotype 4 pneumococcus antiserum | Statens Serum Institut | 16747 | |
| goat anti-rabbit FITC conjugated antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillin | Sigma | A9393 | |
| phosphomolybdic acid 0.2% | Electron Microscopy Sciences | 26357-01 | |
| 0.1% Sirius Red in picric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-02 | |
| 0.01 N hydrochloric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-03 | |
| Tissue Tack Microscope Slides | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Paralube Vet Ointment | Dechra | 12920060 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | unspeciified | Standard |
References
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: incidence, timing, risk factors, and association with short-term mortality. Circulation. 125, 773-781 (2012).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Acute bacterial pneumonia is associated with the occurrence of acute coronary syndromes. Medicine (Baltimore). 88, 154-159 (2009).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Cardiac complications in patients with community-acquired pneumonia: a systematic review and meta-analysis of observational studies. PLoS Med. 8, e1001048 (2011).
- Corrales-Medina, V. F., et al. Risk stratification for cardiac complications in patients hospitalized for community-acquired pneumonia. Mayo Clin. Proc. 89, 60-68 (2014).
- Kumar, S., et al. Detection of 11 common viral and bacterial pathogens causing community-acquired pneumonia or sepsis in asymptomatic patients by using a multiplex reverse transcription-PCR assay with manual (enzyme hybridization) or automated (electronic microarray) detection. Journal Of Clinical Microbiology. 46, 3063-3072 (2008).
- Musher, D. M., Rueda, A. M., Kaka, A. S., Mapara, S. M. The association between pneumococcal pneumonia and acute cardiac events. Clin Infect Dis. 45, 158-165 (2007).
- Brown, A. O., et al. Streptococcus pneumoniae translocates into the myocardium and forms unique microlesions that disrupt cardiac function. PLoS Pathogens. In press, (2014).
- Orihuela, C. J., et al. Laminin receptor initiates bacterial contact with the blood brain barrier in experimental meningitis models. The Journal of Clinical Investigation. 119, 1638-1646 (2009).
- Flick, M. J., et al. Genetic elimination of the binding motif on fibrinogen for the S. aureus virulence factor ClfA improves host survival in septicemia. Blood. 121, 1783-1794 (2013).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19, 225-232 (2011).
- Arenal, A., et al. Do the spatial characteristics of myocardial scar tissue determine the risk of ventricular arrhythmias. Cardiovasc Res. 94, 324-332 (2012).
- Deneke, T., et al. Human histopathology of electroanatomic mapping after cooled-tip radiofrequency ablation to treat ventricular tachycardia in remote myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 1246-1251 (2005).
- Bakker, J. M., et al. Reentry as a cause of ventricular tachycardia in patients with chronic ischemic heart disease: electrophysiologic and anatomic correlation. Circulation. 77, 589-606 (1988).
- Verma, A., et al. Relationship between successful ablation sites and the scar border zone defined by substrate mapping for ventricular tachycardia post-myocardial infarction. J Cardiovasc Electrophysiol. 16, 465-471 (2005).
- Wu, K. C. Assessing risk for ventricular tachyarrhythmias and sudden cardiac death: is there a role for cardiac MRI. Circ Cardiovasc Imaging. 5, 2-5 (2012).
- Tettelin, H., et al. Complete genome sequence of a virulent isolate of Streptococcus pneumoniae. Science. 293, 498-506 (2001).
- Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. CSH Protoc. 2008, (2008).
