के दृश्य<em> स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया</em> कार्डिएक Microlesions और बाद में कार्डिएक Remodeling के भीतर
Summary
Streptococcus pneumoniae forms discrete non-purulent microscopic lesions in the heart. Outlined is the protocol for a murine model of cardiac microlesion formation. Instruction is provided on microlesion visualization using microscopy, discrimination between early and late microlesions, and methods to detect cardiac remodeling in hearts of convalescent animals.
Abstract
Bacteremia दौरान स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया मायोकार्डियम में संवहनी अन्तःचूचुक भर सरकाना और असतत बैक्टीरिया से भरे सूक्ष्म घावों की वजह से प्रतिरक्षा कोशिकाओं में घुसपैठ के अभाव के उल्लेखनीय हैं कि (microlesions) के रूप में कर सकते हैं। कारण cardiotoxic उत्पादों की उनकी रिहाई, एस के लिए microlesions भीतर निमोनिया अक्सर वयस्कों में फूटना आक्रामक न्यूमोकोकल रोग के दौरान मनाया जाता है कि दिल की विफलता के लिए योगदान करने के लिए लगा रहे हैं। इस के साथ साथ 30 घंटा के भीतर हृदय microlesion गठन प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के लिए जाता है कि प्रयोगात्मक माउस संक्रमण के लिए एक प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया जाता है। निर्देश hematoxylin और दाग दिल वर्गों और जल्दी और देर microlesions के बीच रूपात्मक भेद eosin में microlesion पहचान पर प्रदान की जाती है डाला जाता है। निर्देश एस के सत्यापन के लिए एक प्रोटोकॉल पर प्रदान की जाती है न्यूमोकोकल सम्पुटी polysaccharide और के खिलाफ एंटीबॉडी का उपयोग microlesions भीतर निमोनियाImmunofluorescent माइक्रोस्कोपी। पिछले है, संक्रमित चूहों और पता लगाने और स्वास्थ्य लाभ चूहों के दिलों में निशान गठन के आकलन के लिए बचाता है कि एंटीबायोटिक हस्तक्षेप के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान की जाती है। साथ में, इन प्रोटोकॉल एस से संपर्क का एक परिणाम के रूप में न्यूमोकोकल हृदय आक्रमण, cardiomyocyte मौत, हृदय remodeling के अंतर्निहित आणविक तंत्र की जांच की सुविधा होगी निमोनिया, और दिल में pneumococci के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया।
Introduction
समुदाय उपार्जित निमोनिया (कैप) के लिए वयस्कों के अस्पताल में भर्ती मृत्यु दर 1-4 के लिए योगदान देता है कि प्रतिकूल हृदय की घटनाओं के लिए एक दस्तावेज जोखिम वहन करती है। Corrales-मदीना एट अल द्वारा हाल ही में एक अध्ययन में। कार्डियक जटिलताओं के साथ और / या जिम्मेदार निमोनिया से जुड़े लोगों की मृत्यु तीन के 27% के लिए जुड़ा पाया गया। स्ट्रैपटोकोकस निमोनिया (pneumococcus), टोपी और पूति 5 का सबसे आम कारण, सीधे भर्ती कराया वयस्क रोगियों 6 के रूप में कई के रूप में 19% में प्रतिकूल हृदय की घटनाओं के साथ संबद्ध किया गया है। निमोनिया के साथ जुड़े प्रतिकूल हृदय की घटनाओं की आवृत्ति 6 घटते के क्रम में नए या बदतर congestive दिल विफलता, अतालता, और रोधगलन शामिल हैं।
ब्राउन एट अल द्वारा हाल ही में एक PLoS रोगज़नक़ों लेख में।, एस निमोनिया myocardiu में हृदय संवहनी अन्तःचूचुक, प्रविष्टि के माध्यम से स्थानान्तरण करने में सक्षम होना पाया गयामी, और आक्रामक न्यूमोकोकल रोग (आईपीडी) 7 दौरान निलय में बैक्टीरिया से भर असतत गैर पीबयुक्त सूक्ष्म घावों (microlesions) के गठन। हृदय microlesion गठन के साक्ष्य न्यूमोकोकल संक्रमण के आगे घुटने टेक दिए थे जो गैर मानव प्राइमेट और व्यक्तियों से हृदय नमूनों में मनाया गया। इसी तरह, प्रयोगात्मक संक्रमित चूहों reproducibly हृदय microlesions विकसित की है। चूहों में, microlesion आकार और संख्या सकारात्मक अवधि और bacteremia, सीरा में कार्डियक ट्रोपोनिन के स्तर की गंभीरता, और न्यायपालिका हृदय इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के साथ सहसंबद्ध किया गया था। दिल में बैक्टीरियल स्थानान्तरण रक्त मस्तिष्क बाधा और न्यूमोकोकल दिमागी बुखार के विकास, एक Laminin रिसेप्टर और प्लेटलेट में संवहनी endothelial कोशिकाओं की यानी, Choline बाध्यकारी प्रोटीन एक मध्यस्थता आक्रमण भर pneumococcus के स्थानान्तरण के लिए जिम्मेदार एक ही तंत्र के माध्यम से हो पाया था -activating कारक रिसेप्टर निर्भर तरीके 8। Microlesआयन गठन भी cardiomyocytes 7 को मारने के लिए पाया गया था कि न्यूमोकोकल ताकना गठन विष pneumolysin की आवश्यकता है।
न्यूमोकोकल हृदय microlesions स्ताफ्य्लोकोच्चुस सहित अन्य ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया की वजह से कर रहे हैं कि पीबयुक्त नरम ऊतक और हृदय फोड़े से अलग कर रहे हैं। ये न्यूट्रोफिल और आतंच बयान 9,10 से घिरा हुआ बैक्टीरिया की एक भी foci की विशेषता है। Microlesions एस द्वारा गठित निमोनिया एक प्रभावित दिल भर में वितरित आकार में छोटे होते हैं, और प्रतिरक्षा सेल पैठ की कमी है। संक्रमण के प्रारंभिक चरण के दौरान, microlesions एस की वजह से निमोनिया कार्डियोमायोपैथी के रोग लक्षण की याद ताजा क्षतिग्रस्त या सूजन के ऊतकों के क्षेत्रों के रूप में दिखाई देते हैं। कुछ monocytes लेकिन उनकी उपस्थिति कम रहता है और घावों तेजी से एक साथ जीआर करने के लिए जारी है, जबकि उपस्थिति में परिगलित हो जाते हैं और बैक्टीरिया से भरा है, इस समय के दौरान देखा जा सकता हैजानवर या रोगाणुरोधी हस्तक्षेप की मृत्यु तक के आकार में ओउ। महत्वपूर्ण बात है, एंटीबायोटिक हस्तक्षेप के 3 दिन के भीतर, विपुल प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ पूर्व घाव स्थल पर मनाया जाता है और इस मजबूत कोलेजन बयान के साथ है। इसी प्रकार के हृदय remodeling के हृदय समारोह 11-15 पर परिणामों को स्थायी के साथ रोधगलन निम्नलिखित घटित करने के लिए सूचित किया गया है। इस प्रकार, microlesions रोग प्रकरण बच गया है जो स्वास्थ्य लाभ व्यक्तियों में हृदय संबंधी मृत्यु दर की वृद्धि हुई घटना आइपीडी के दौरान और संभवतः होती है कि प्रतिकूल हृदय की घटनाओं के लिए एक संभावित व्याख्या कर रहे हैं।
इस के साथ साथ, अनुदेश संक्रमण के जल्दी और देर चरणों में आइपीडी और हृदय घाव गठन और हृदय microlesions के दृश्य का प्रायोगिक माउस मॉडल पर प्रदान की जाती है। रोगाणुरोधी हस्तक्षेप से बचा लिया गया है कि पशुओं में कोलेजन बयान का पता लगाने के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया जाता है। इस अनुच्छेद के लक्ष्य एफ करने के लिए हैइस महत्वपूर्ण और उपन्यास न्यूमोकोकल विकृति पर अन्य जांचकर्ताओं के अनुसंधान acilitate।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस रिपोर्ट में, एक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि एस प्रेरित करने के लिए निमोनिया आइपीडी दौरान चूहों में हृदय microlesions मध्यस्थता और उनके दृश्य के लिए तकनीक का प्रदर्शन किया जाता है। चू?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by grant 13IRG14560023 from the American Heart Association and NIH grants AI078972 and HL108054 to CJO. Support for AOB was from the NIH National Center for Advancing Translational Sciences NIH ULTR001120, and F31 A110417701.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Todd-Hewitt broth | Neogen | 7161A | |
| O.C.T Compound | Tissue-Tek (Sakura Finetek) | 4583 | |
| Triton X-100 | Fisher Scientific (Acros) | 9002-93-1 | |
| Normal Goat Serum | Abcam | ab7481 | |
| anti-serotype 4 pneumococcus antiserum | Statens Serum Institut | 16747 | |
| goat anti-rabbit FITC conjugated antibody | Jackson ImmunoResearch | 111-096-144 | |
| DAPI | Invitrogen | D1306 | |
| Fluorsave | Millipore | 345789 | |
| Permount | Fisher Scientific | S70104 | |
| Ampicillin | Sigma | A9393 | |
| phosphomolybdic acid 0.2% | Electron Microscopy Sciences | 26357-01 | |
| 0.1% Sirius Red in picric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-02 | |
| 0.01 N hydrochloric acid | Electron Microscopy Sciences | 26357-03 | |
| Tissue Tack Microscope Slides | Polysciences, Inc | 24216 | |
| Paralube Vet Ointment | Dechra | 12920060 | |
| Hematoxylin and Eosin Staining Kit | unspeciified | Standard |
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