Hücre içi Ca İki foton Görüntüleme<sup&gt; 2+</sup&gt; Bir İzole Sıçan Aort Kullanım ve Endotel Nitrik Oksit Üretimi ve düz kas hücreleri

Bradley T. Endres; Alexander Staruschenko; Marie Schulte; Aron M. Geurts; Oleg Palygin

doi:10.3791/52734

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Hücre içi Ca İki foton Görüntüleme

10.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52734

⸱

10 Haziran 2015

Bradley T. Endres¹^,² , Alexander Staruschenko¹ , Marie Schulte⁴ , Aron M. Geurts¹^,²^,³ , Oleg Palygin¹

¹Departments of Physiology, Medical College of Wisconsin, ²Human and Molecular Genetics Center, Medical College of Wisconsin, ³Cardiovascular Center, Medical College of Wisconsin, ⁴Blood Research Institute of Wisconsin

Bu makalede

Özet

Vasküler hücre fonksiyonu, hücre içi habercilerin aktivitesine bağlıdır. Burada tarif edilen, izole bir aortun bireysel endotel ve düz kas hücrelerinde fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak hücre içi kalsiyum ve nitrik oksit seviyelerinin ölçülmesine izin veren bir ex vivo iki foton görüntüleme yöntemidir.

Özet

Kalsiyum vasküler dokularda çok sayıda fizyolojik süreçte önemli bir düzenleyicidir. En endotel ve düz kas fonksiyonları yüksek hücre içi kalsiyum ([Ca2 ^+] _i) ve nitrik oksit (NO) değişikliklere bağlıdır. Amacıyla iki foton mikroskobu ile boyaları [Ca ^{2 +]} _i, NO ve alt molekülleri vazokonstriktörlere ve vazodilatörler yanıt olarak bir kan damarı tarafından işlenir, biz kalsiyum etiketleme geçerli yeni bir teknik (ya da NO-etiketleme) geliştirdi nasıl anlamak için İzole kan damarlarındaki kalsiyum taşıma (veya NO üretimini) ölçmek için. Burada anlatılan sıçan, etiket kalsiyum veya HAYIR endotel veya düz kas hücrelerinin içinde aort izole ve görüntü kalsiyum geçici (veya HAYIR üretim) fizyolojik aşağıdaki iki foton mikroskop kullanarak nasıl gösterir bir ayrıntılı adım-adım prosedürü ya da farmakolojik uyaranlar. yöntemi kullanmanın yararları çok yönlüdür: 1) aynı anda mümkündürly endotel hücreleri ve farklı uyarıcılara tepki olarak, düz kas hücreleri, hem de geçici kalsiyum ölçülmesi; 2) görüntü, endotelyal hücreler ve nativ ortamda düz kas hücrelerinin bir sağlar; 3) Bu yöntem hücre içi kalsiyum veya HAYIR değişiklikler ve hassas ölçümler için yüksek çözünürlüklü görüntüler üretir karşı çok hassastır; ve 4) tarif edilen yaklaşımı, bu reaktif oksijen türleri gibi diğer moleküller, ölçümü için uygulanabilir. Özetle, iki foton lazer emisyon mikroskobu uygulama geçici kalsiyum ve izole bir kan damarı endotel ve düz kas hücrelerinde NO üretimini yüksek kalitede nicel verilerin sağlanan ve vasküler fonksiyonları düzenleyen mekanizmaların anlayışımızı teşvik etmiştir izlemek için.

Giriş

Kalsiyum, endotel ve düz kas hücreleri gibi vasküler hücreler içinde temel bir ikinci mesajcı olan. Bu vasküler kasılma için birincil uyaran ve endotel içinde YOK nesil yoluyla etkileri de dahil olmak üzere, vasküler dilatasyon önemli bir rol oynamaktadır. Nedeniyle görüntüleme teknolojilerinin sınırlamaları nedeniyle, sağlam geminin içinde kalsiyum işleme gözlemlemek neredeyse imkansız olmuştur. İki foton görüntüleme sistemleri ve yeni kalsiyum yaratılması veya HAYIR etiketleme boyalarının geliştirilmesi, kalsiyum dinamikleri ve damarsal içinde NO üretimini anlamaya başlamak için yeterli derinlik ve çözünürlükte görüntü mümkün kılar.

İki....