Method Article

تقييم البطانية هجرة الخلايا بعد التعرض للمواد الكيميائية السامة

DOI:

10.3791/52768

⸱

July 10th, 2015

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Bundeswehr Institute of Pharmacology and Toxicology, 2Walther Straub Institute of Pharmacology and Toxicology, Ludwig-Maximilians-Universität München, 3Department of Molecular and Cellular Sports Medicine, German Sports University Cologne

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد التحقيق في هجرة الخلايا البطانية المبكرة (EEC) أمرا مهما لفهم الفيزيولوجيا المرضية لبعض الأمراض وتحديد استراتيجيات جديدة للتدخل العلاجي. يصف البروتوكول التالي تقنيات تقييم هجرة الخلايا التي تم تكييفها للتحقيق في EEC.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التعرض للمواد الكيميائية (بما في ذلك مؤلكل عوامل الحرب الكيميائية مثل الكبريت والنيتروجين الخردل) يسبب عدد كبير من الأعراض السريرية بما في ذلك الجرح اضطراب الشفاء. عملية فسيولوجية التئام الجروح معقدة للغاية. تشكيل النسيج الحبيبي هو خطوة أساسية في هذه العملية مما أدى إلى إغلاق الجرح الأولي وتوفير شبكة من الأوعية الدموية الشعرية الجديدة - إما عن طريق تكون الأوعية (تشكيل رواية) أو الأوعية الدموية (تنتشر السفن الموجودة). كلا vasculo- والأوعية الدموية تتطلب وظيفية، والهجرة الموجهة من الخلايا البطانية. وهكذا، والتحقيق في وقت مبكر من الخلايا البطانية (EEC) الهجرة غير المهم أن نفهم الفيزيولوجيا المرضية من المواد الكيميائية الناجمة عن التئام الجروح الاضطرابات ويحتمل أن تحديد استراتيجيات جديدة للتدخل العلاجي.

قمنا بتقييم ضعف التئام الجروح بعد مؤلكل التعرض لعامل واختبار المركبات المرشحة المحتملة للجراراتeatment. كنا مجموعة من التقنيات الواردة في هذا البروتوكول. A غرفة بويدن المعدلة للتحقيق من الناحية الكمية يوصف تنشيط كيميائي من EEC. وعلاوة على ذلك، ويتضح استخدام التئام الجروح فحص في تركيبة مع تحليل المسار لتقييم نوعيا الهجرة. أخيرا، علينا أن نظهر استخدام TMRM صبغة الفلورسنت للتحقيق في احتمال غشاء الميتوكوندريا إلى تحديد الآليات الكامنة وراء هجرة الخلايا المضطربة. يصف بروتوكول التالية التقنيات الأساسية التي تم تكييفها للتحقيق في EEC.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هجرة الخلايا مهمة في العديد من العمليات الفسيولوجية والمرضية بما في ذلك تطوير والأمراض المختلفة، والتئام الجروح بعد إصابة الجلد.

بعد إصابة الجلد، التهاب الأنسجة ويزيل تحبيب محركات الأقراص التالفة أو الميتة إغلاق الجرح الأولي ويسمح تشكيل شبكة من الشعيرات الدموية الجديدة من خلال تكون الأوعية (تشكيل رواية) أو الأوعية الدموية (تبرعم الحويصلات الموجودة) 1-3. كلا vasculo- والأوعية الدموية تتطلب هجرة الخلايا البطانية. شبكة متنامية من الأوعية الدموية أمر ضروري لنقل الأكسجين والمواد المغذية إلى الخلايا الكيراتينية المتكاثرة التي تخضع في نهاية المطاف التقرن، ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف بروتوكول التالية تقنيات التحقيق في وقت مبكر من هجرة الخلايا البطانية. زراعة السليم للخلايا بطانة الأوعية الدموية تتطلب قبل طلاء قوارير زراعة الخلايا مع الجيلاتين لضمان الانتشار السليم والمحافظة على النمط الظاهري البطانية.

1. قبل طلاء قوارير خلية ثقافة

  1. حل الجيلاتين في 0.1 M PBS إلى تركيز النهائي من 0.1٪.
  2. الأوتوكلاف الحل مع المعلمات من أجل التعقيم السائل (لمزيد من التفاصيل انظر تعليمات الأوتوكلاف معين).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعرض البشرة للعوامل مؤلكل يثير حمامي، تشكيل نفطة وتقرح الجلد الذي يقترن اضطراب التئام الجروح. التئام الجروح يتطلب تكون الأوعية angio- والتي تقوم على هجرة الخلايا البطانية. ويمكن تقييم الهجرة الكمية عن طريق استخدام غرفة الفحص بويدن. كما هو مبين في الشكل 1C تعرض EEC إلى الكلوراميوسيل كيل مؤلكل أدى إلى انخفاض كبير في الهجرة الخلية 9. إضافة حمض اللينولينيك ROS-زبال ألفا (ALA) مباشرة بعد التعرض لالكلوراميوسيل لمدة 24 ساعة انقاذ بشكل كبير هذا النمط الظاهري، و.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعرض البشرة للمواد الكيميائية السامة غالبا ما يؤدي إلى اضطراب شديد التئام الجروح. الآليات الكامنة غير معروفة إلى حد كبير. التئام الجروح هو عملية معقدة تتكون من مراحل مختلفة (الارقاء، والتهاب، وانتشار وإعادة عرض). وتشارك الهجرة خلية في كل مرحلة، ومع ذلك، فإنه من الأهمية القصوى لتشكيل النسيج الحبيبي. هنا، يتم تشكيل الأوعية الدموية الجديدة إما عن طريق angio- أو تكون الأوعية.

تتطلب كل من عمليات الهجرة غير المتضررة من.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل من قبل وزارة الدفاع الألمانية (المنحة رقم M-SAB1-6-A009).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Boyden Chamber 
إدخالات معالجة بزراعة الأنسجة Corning FluoroBlok (TC) ، 24 بئر - 3 & مCorning Incorporated# 351151
Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC) - إدراج معالج ، 24 بئر - 8 & mعلوم الحياة# 351152
(للاستخدام مع Falcon Insert 24 جيدا Companion Plate (353504)
الجرح   فحص الشفاء
أطباق القاع الزجاجيWord Precision Instruments، Inc.#FD35-100
الميتوكوندريا
TMRM (tetramethylrhodamine methyl ester)تقنيات الحياة#T669
زراعة
AccutasePAA ، Pasching ، النمسا# L11-007
& alpha ؛ -حمض اللينولينيكFluka (Sigma) ، شتاينهايم ، ألمانيا  # L2376
كلورامبوسيلفلوكا (سيجما) ، شتاينهايم ، ألمانيا# 23125
الجيلاتينسيجما ألدريتش ، شتاينهايم ، ألمانيا# G2500-100G
تقييم إمكانات الخلايا

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bauer, S. M., Bauer, R. J., Velazquez, O. C. Angiogenesis, vasculogenesis, and induction of healing in chronic wounds. Vascular and Endovascular Surgery. 39, 293-306 (2005).
  2. Reinke, J. M., Sorg, H. Wound....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Endothelial Cell MigrationBoyden Chamber AssayWound Healing AssayMitochondrial Membrane PotentialTMRM Fluorescent DyeAlkylating Agent ExposureChemokinesis AnalysisCell Tracking AssayChlorambacil TreatmentROS Scavenger Rescue

Related Articles