Summary
Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken erleichtert die Beurteilung der Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel während der Maus embryonalen Harnwege Entwicklung. Hier wird ein Protokoll für Methylenblau-Dye-Injektion in das Nierenbecken beschrieben.
Abstract
Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel sind angeborene Anomalien induzierende Hydronephrose und Hydroureter. Murine Harnwege Kreuzung Obstruktion Mängel können beurteilt werden, durch die Verfolgung Methylenblau färben Strömung innerhalb der Harnwege. Methylenblau-Dye in das Nierenbecken der perinatalen embryonale Nieren injiziert und Farbstoff wird überwacht von den Nierenbecken der Niere durch den Harnleiter und in das Lumen der Blase nach dem hydrostatischen Druck anwenden. Farbstoff Anhäufung werden deutlich in der Blase Lumen der normalen perinatale Harnwege, sondern wird zwischen dem Nierenbecken und den Endpunkt der eine abnorme Harnleiter, eingeschränkt werden, wenn die Harnwege Hindernisse auftreten. Diese Methode ermöglicht die Bestätigung der Harnwege Kreuzung Hindernisse und Visualisierung von Hydronephrose und Hydroureter. Dieses Manuskript beschreibt ein Protokoll für Methylenblau färben Injektion in das Nierenbecken, Harnwege Kreuzung Hindernisse zu bestätigen.
Introduction
Das Harnsystem besteht aus einem Paar Nieren und Harnleiter und einer gemeinsamen Blase und Harnröhre. Die Hauptfunktion des Harnsystems ist Körper-Homöostase durch die Verwaltung der Wasser- und Elektrolyt-Gleichgewicht des Blutes. Die Nieren filtern das Blut zur Kontrolle Elektrolyt Konzentrationen und Säure-Basen-Gleichgewicht und produzieren Urin um überschüssiges Wasser und Abfällen einschließlich Solute und Stoffwechselprodukte auszuscheiden. Urin wird dann durch den Harnleiter aus dem Nierenbecken der Niere, die Bladderin einer unidirektionalen Weise transportiert, wo es gespeichert und schließlich über die Harnröhre1beseitigt.
Die Harnleiter sind gerade Rohre mit Ursprung aus dem nephric Rohr. Nach angehenden aus dem nephric Rohr an embryonalen Tag 10.5 (E10.5) in der Maus, der Harnleiter Stiel verlängert und differenziert in eine mehrschichtige Struktur namens Urothel, die zwischen Maus undurchlässig ist, E12.5 und E16.5. Die mesenchymalen Zellen umgibt den Harnleiter Stiel unterscheiden sich auch in drei Schichten bestehend aus inneren Stromazellen Zellen, zwischen dicken glatten Muskelzellen und äußeren adventitial Fibroblasten. Harnleiter peristaltische Wellen, Einleitung in das Nierenbecken werden vermehrt durch die glatte Muskulatur Schicht der Mauer Harnleiter in die Blase Urin2,3, transportieren die ab E16.5 in der Maus-1produziert wird.
Angeborene Fehlbildungen der Nieren und Harnwege (CAKUT) gehören zu den häufigsten Erbkrankheiten, bei rund 1 % der menschlichen Föten1,4, und setzt sich aus einer Vielzahl von Phänotypen einschließlich Hydronephrose und Hydroureter. Die abnorme Ansammlung von Urin in der Niere und Harnleiter führt Hydronephrotic Nieren- und Hydroureter Bildung. Eine Ursache der Hydronephrose und/oder Hydroureter Formation ist eine Obstruktion der Harnwege. Ureteropelvic Kreuzung Obstruktion (UPJO), verursacht durch aberrante Harnfluss durch eine Blockade zwischen den proximalen Harnleiter und das Nierenbecken, wodurch Hydronephrose und proximale Hydroureter Verengung mit Winkelung oder hartnäckige Falten5, 6. Darüber hinaus wird die ektopische Einfügung von den distalen Harnleiter in die Blasenwand oder die Fortpflanzungsorgane vesikale Kreuzung Obstruktion (UVJO) genannt. UVJO kann auch Hydronephrose und Hydromegaureter Bildung7,8induzieren. Ein zusätzliche vesikale Kreuzung (UVJ) defekt ist Vesicoureteric Reflux (VUR). VUR zeichnet sich durch retrograde Urin-Flow aus der Blase in Richtung Niere bei UVJ. Im Vergleich zu UVJO, zeigen perinatale Embryonen mit VUR deutlich einen aufgeblähten Hydronephrotic Nieren- oder schweren Hydroureter Phänotyp9nicht.
In der Labormaus kann Urin-Flow durch Injektion eines Farbstoffes, wie Methylenblau, in das Nierenbecken9untersucht werden. Die Injectedmethylene blaue Lösung wird die Flugbahn der Urin aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter und in die Blase verfolgen. Hydronephrose kann durch eine Erweiterung des Farbstoffs in der Niere erkannt werden. UPJO kann als eine Blockade der Farbstoff Strömung an den proximalen Harnleiter mit aufgeblähten Nierenbecken5erkannt werden. Dilatation der Harnleiter durch einen aufgeweiteten Durchmesser angegeben zeigt ein Beispiel für Hydroureter. Zu guter Letzt Farbstoff Ansammlung an der Blasenwand oder auf der Website der Fortpflanzungsorgane zeigt UVJO mit aufgeblähten Hydronephrotic Niere und geweitet Hydromegaureter7,10. Um VUR zu erkennen, die Farbstofflösung in die Blase injiziert und anschließende retrograde wird in der Niere9überwacht.
Hier ist ein Protokoll für Methylenblau färben Injektion in das Nierenbecken eines perinatalen Embryos präsentiert. Dieses Protokoll ermöglicht die Rückverfolgung von Urin-Flow aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter und in die Blase und prüft mögliche Harnwege Kreuzung Hindernisse wie UPJO oder UVJO.
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Protocol
Mäuse (Wnt5a Flox / Flox Mäuse (Wnt5a tm1.1Tpy) und Dll1Cre Linie, UVJO-Maus-Modell) 7 wurden nach NIH-Richtlinien für die Pflege und Verwendung von Labortieren verwaltet und studierte unter ein Protokoll durch die NCI-Frederick Animal Care and Use Committee genehmigt.
1. Vorbereitung des Methylenblau Farbstofflösung
- 0,1 g Methylenblau Pulver zu messen.
- Lösen sich die Methylenblau in 10 mL normale Kochsalzlösung oder 1 x Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) vollständig durch vortexen.
- Filtern die 10 mg/mL Methylenblau-Lösung mit einer Spritze Filter (Membran Porengröße 0.45µm) zu beseitigen, Verstopfungen beim Einspritzen.
- Montieren einer sterilen Kopfhaut Vene Set (27GX3/4 ″) mit 3 mL Einwegspritze und füllen Sie die Spritze mit 3 mL Methylenblau-Lösung gefiltert.
Hinweis: Zur Vermeidung von hydrostatischen Druck und nachfolgenden Farbstoff Fluss legen Sie die Spitze der Nadel über die Spritze gefüllt mit Methylenblau-Lösung.
2. Dissektion der pränatalen Embryonen
- sauber sezieren, Scheren und Pinzetten mit 70 % igem Ethanol.
- , Perinatale Embryonen im E18.5 oder E19.5, sammeln einschläfern schwangere Mäusen zuerst mit CO 2 Einatmen und zervikale Dislokation nach NIH-Richtlinien führen.
Hinweis: Die schwangere weibliche Maus in der Regel gebiert E18.5 ab, jedoch größere Nieren sind leichter zu manipulieren. Daher sind die Nieren im E19.5 näher zur Geburt leichter auf diese Analyse durchzuführen. Aber Welpen mit bilateralen Harnwege Hindernisse sterben nach der Geburt. Abhängig von den Eigenschaften der experimentellen Mäuse, sollte eine entsprechende Sammlung Wochentag/Uhrzeit empirisch ermittelt werden. - 70 % igem Ethanol auf der ventralen Bauch-Oberfläche sprühen und öffnen Sie dann die Bauchhöhle mit ventral sezierenden Schere und Zange.
- Heben die gesamte Gebärmutter und trennen Sie ihn aus dem Körper durch Schneiden mit Präparierscheren an den Spitzen der uterinen Hörner.
- Spülen die gesamte Gebärmutter mit 1 X PBS in einer Petrischale.
- Die Gebärmutter segmentartig mit Präparierscheren schneiden und entfernen Sie plazentar Decidua mit sezieren Zange um die Embryonen im Dotter Sacs freizulegen.
- Der Dottersack erst dann entfernen und die amniotische Membrane mit sezieren Zange um die perinatalen Embryonen zu befreien.
- Enthaupten einen Embryo mit Präparierscheren. Wischen Sie überschüssiges Blut mit steriler Gaze-Pads. Festnageln des Embryos mit der ventralen Oberfläche bis auf einen sezierenden Mikroskop, ausgestattet mit einer digitalen Kamera für die Bildgebung. Seine Rute für die Genotypisierung zu sammeln, wenn nötig.
Hinweis: Führen Sie Injektionen ein Embryo zu einem Zeitpunkt. - Öffnen Sie vorsichtig die Bauchhöhle des Embryos mit der Pinzette durch Aufreißen der Haut. Dann sorgfältig entfernen Sie überschüssige Organe und Gewebe wie Leber, Magen und Darm mit der Pinzette durch Schneiden oder herausziehen um zu entlarven, die Nieren, die Harnleiter und die Blase, die dorsal befinden ( Abbildung 1A). Absorbieren überschüssiges Blut aus den seziert Embryo mit steriler Gaze-Pads, wenn nötig.
Hinweis: Überschüssige Blut stört bei der Identifizierung von Nierenbecken für die Injektion von Farbstoff.
3. Injektion von Methylenblau-Dye in das Nierenbecken und Überwachung fließen Dye
- Entfernen Luftblasen in die Nadel und Schlauch durch Ausweisung Methylenblau-Lösung aus der Nadelspitze durch hydrostatischen Druck. Heben Sie die Spritze mit der Farbstofflösung über dem Niveau der Nadelspitze zu fließen beginnen, und senken Sie dann die Spritze zu unterbrechen.
- Stechen Sie die Nadel in das Nierenbecken in der Nähe von den proximalen Harnleiter, kümmert sich nicht um ihn einmal stören. Dye Injektion in eine Niere zu bestimmen, Obstruktion der Harnwege führen.
Hinweis: Führen Sie färben Injektion in jede abnorme Nieren 7 ersten folgen die gleiche Weise zu bestimmen, seine Harnwege Obstruktion. - Heben die Spritze bis etwa 20 cm hydrostatischen Druck und 15 µL - 60 µL Farbstoff Lösung fließen zu lassen. Die Durchflussmenge wird über 3 µL/s sein, wenn die Spritze zu dieser Höhe oberhalb des Embryos ausgelöst wird.
- Überwachen die blaue Farbe des Farbstoffs zuerst in das Nierenbecken und dann in der Länge von den Harnleiter und schließlich in die Blase Lumen.
Hinweis: Es dauert ca. 5 s zu sehen, eine schwache Farbe innerhalb der Blase Lumen entstehen, wenn die Harnleiter in die Blase richtig eingelegt ist. Den Farbstoff der Website blockiert ca. 15 ansammeln lassen s erscheint keine Farbe in die Blase Lumen. - Legen Sie die Spritze bis Haltestelle Farbstoff Strömung und ziehen Sie die Nadel aus der Niere.
- Nehmen Sie Bilder von der Niere, der Harnleiter und der Blase mit Farbstofflösung verfolgt mit der Kamera und imaging-Programm verbunden zu einem Stereomikroskop.
- Notieren Hydronephrose der Niere, Hydroureter und die endgültige Position der Farbstofflösung in einem Labor Notebook.
- Perform Injektion der kontralateralen Niere wie beschrieben in Abschnitt 3.1), 3.5) und ermöglichen Farbstoff Fluss etwa 20 s insgesamt.
Hinweis: Die Blase Lumen wird mit Farbstofflösung, durch eine starke blaue Farbe angezeigt, wenn der Harnleiter in die Blase Lumen richtig eingelegt ist gefüllt werden. Nach Bewertung der Harnwege Kreuzung Obstruktion, die Harnleiter und die Blase für Schnitt fixiert werden können.
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Representative Results
Die Nieren und unteren Harnwege befinden sich dorsal zu den meisten anderen inneren Organe wie Leber und Darm. Nach dem Entfernen dieser andere innere Organe, sind ein paar Nieren und Harnleiter und einer einzelnen Blase sichtbar (Abb. 1A). Auf erfolgreiche Dissektion fließt der Farbstoff injiziert das Nierenbecken in die Blase über den Harnleiter von der Niere. Das Nierenbecken ist der trichterartige dilatative proximalen Teil der Harnleiter in die Niere. Daher ist der Einspritzstelle Farbstoff in der Nähe von den sichtbaren proximalen Harnleiter, verbunden mit der Niere, wie mit schwarzen Pfeilen (Abbildung 1 b-1 C) angegeben. Nach der Injektion mit Methylenblau Farbstofflösung in einer Niere fließt der Farbstoff aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter und in die Blase, was zu einer sichtbaren blauen Farbe in den Harnleiter und Blase Lumen, wenn Harnwege Hindernisse nicht existieren (Abbildung 1 b ). Die Farbstofflösung verschwindet in der Regel in einem normalen Harnleiter schnell noch vor Bildgebung und die Farbe in den Harnleiter ist schwach, weil die normalen Harnleiter einen dünnen Schlauch ist. Farbstoff-Fluss in den Harnleiter kann jedoch mit einem sezierenden Mikroskop beobachtet werden. Eine starke blaue Farbe in das Lumen der Blase erscheint als das Ergebnis eines längeren Flusses von etwa 20 s insgesamt nach der Injektion beider Nieren mit Farbstofflösung (Abbildung 1). Akkumulation von Farbstoff in die Blase nach der kontralateralen Injektion zeigt, dass die zweite Harnwege keine Harnwege Kreuzung Behinderung aufweist.
Es ist sinnvoll, eine offensichtlich abnorme Nieren Harnwege Kreuzung Hindernisse zuerst bestätigen zu injizieren. Abnorme Hydronephrotic Nieren erkennt man an ihrer größeren Größe oder dünne transparente Oberfläche mit einer erweiterten Nierenbecken. Ein Beispiel aufgetrieben Hydronephrotic Niere und eine unnormal geweitete Hydroureter sind in Abbildung 2Adargestellt. Eine dilatative Hydroureter führt in der Regel eine viel stärkere Visualisierung weil seine erweiterte Volumen viel mehr Farbstofflösung als einen normalen, dünnen Harnleiter behält. Wenn die Nieren und/oder die Harnleiter während Dissektion beschädigt werden, ist die Untersuchung der Harnwege Kreuzung Hindernisse unmöglich, weil der Farbstoff akzessorisch an der beschädigten Stelle austreten wird. Beispielsweise die abnorme Hydroureter in Abbildung 2A wurde beschädigt, in der Mitte und daher die endgültige Position der Farbstofflösung ist unklar und UVJO nicht überprüft werden, trotz des Fehlens der Farbstoff in die Blase Lumen (Abbildung 2A). Allerdings müssen diese perinatale Harnwege mit dilatierten Hydroureter und aufgeblähten Hydronephrotic Niere UVJO, wie der Harnleiter entlang seiner Länge erweitert und die Niere deutlich aufgebläht. Die kontralaterale Harnwege scheint normal, da es einen dünnen Harnleiter und der Farbstoff anschließend die Blase Lumen (Abbildung 2 b tritt).
Abbildung 1: Beispiele für Methylenblau färben Injektion in eine normale Harnwege. (A) ein typisches Bild des Harnsystems aus einem perinatalen Embryo (E19.5) nach dem Entfernen überschüssigen Gewebes. Zwei Nieren, zwei Harnleiter und der Harnblase sind Geschlechtsorgane, hier Hoden (B) ein Beispiel für Dye Injektion in eine normale Niere gesehen. Eine Einstichstelle in das Nierenbecken der Niere (schwarzer Pfeil) zu sehen. Eine schwache Farbe ist nach Abzug des Farbstoffs für 5 S. (C) Farbstoff Akkumulation in der Blase Lumen nach Injektion von beiden normalen Nieren fließen in den Harnleiter und die Blase Lumen sichtbar. Die Farbe wird durch Ablagerung von der Farbstofflösung in das Lumen der Blase nach Abzug des Farbstoffs für 20 fließen stark s. Das Nierenbecken ist auch mit der schwachen Farbe in der Niere sichtbar. B: Blase, K: Niere, T: Hoden, o: Harnleiter. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2: Beispiele für Methylenblau färben Injektion in eine Harnwege mit einseitigen Hydroureter. (A) ein Beispiel für Dye Injektion Harnwege mit einem Hydroureter und einer Hydronephrotic Niere eines weiblichen Neugeborenen Welpen mit Farbstoff Fluss von 15 s. Die Hydronephrotic Niere ist deutlich größer als der kontralateralen Niere. Der entsprechenden Harnleiter wird aufgedehnt und die Farbe ist stark zu erkennen aber die Hydroureter deutlich beschädigt ist, wie durch Auslaufen der Farbstofflösung in der Körperhöhle beobachtet. (B) Dye Injektion in der kontralateralen Niere der Harnwege mit einseitigen Hydroureter mit Farbstoff Strömung von 20 S. injiziert Farbstofflösung in der normalen Niere sammelt sich in der Blase Lumen, in der bestätigt wird, dass die Anomalie einseitige ist. B: Blase, HK: Hydronephrotic Niere, HU: Hydroureter K: Niere, o: Harnleiter, Ut: uterine Horn. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
Maus-Nieren sind funktionale Beginn E16.5 und ein Farbstoff-Injektion-Test ist ab diesem Zeitpunkt theoretisch möglich. Jedoch die Niere ist zu klein, um mit der Farbstofflösung injiziert werden und Phänotypen wie Hydronephrose und Hydroureter sind nicht eindeutig beobachtet, da diese Phänotypen als Nebeneffekt des Urins durch abnorme Urin Transport aufgebaut sind. Diese Phänotypen von Hindernissen wie UPJO oder UVJO, sind offensichtlich am E18.5 durch aufgeblähten Nieren und Harnleiter. Größere Nieren von Embryonen im E19.5 oder neugeborenen Welpen sind leichter zu manipulieren als jene von Embryonen im E18.5 oder jünger. Aber Welpen mit bilateralen Harnwege Hindernisse sterben nach der Geburt. Daher führen Sie Experimente zur CAKUT Phänotypen zu validieren, perinatale Embryonen oder Welpen abhängig von experimentellen Maus Eigenschaften entsprechend auswählen.
Sezieren Sie sorgfältig ein intaktes Harntrakts System vor der Durchführung Dye Injektion um mögliche Defekte untersuchen aufrecht zu erhalten. Dies gilt im Wesentlichen für die abnorme Hydronephrotic Nieren und Harnleiter, die bei der Demontage der zusätzlichen Gewebe der Nieren und Harnwege aussetzen sehr aufgetrieben und leicht beschädigt sind. Beschädigung dieser Organe während der Präparation wird verhindert, dass eine vollständige Bestimmung der wirklichen Mängel. Z. B. Abbildung 2 zeigt ausgeprägte Dilatation der ein Harnleiter, aber der Farbstoff Leckage nicht der Endpunkt des distalen Hydroureter angezeigt.
Immer achten Sie darauf, Luftblasen aus dem Schlauch und die Nadel vor der Injektion zu entfernen, da diese Bläschen richtige Farbstoff Fluss blockieren. Nach erfolgreichen Dissektion ist der entscheidende Schritt zu prüfen, die Obstruktion der Harnwege Einfügung der Nadelspitze in das Nierenbecken. Das Einführen der Nadel in der oberen Hälfte der Niere, in der Nähe von den proximalen Harnleiter, empfiehlt sich die Nadelspitze in das Nierenbecken zu leiten. Die Nadelspitze sollte in Richtung der proximalen Harnleiter zeigen. Da die renale Blutgefäße in der Nähe von den proximalen Harnleiter befinden, kann der Farbstoff entlang der renalen Blutgefäße fließen, es sei denn, die Nadelspitze in den proximalen Harnleiter Richtung weist. In diesem Fall sollte die Nadelspitze in das Nierenbecken in den proximalen Harnleiter Richtung angepasst werden. Darüber hinaus kann die Nadel durch die Niere, wenn zu tief eingesetzt, verursacht des Farbstoffs aus der Niere und in der Körperhöhle undicht übergeben. Vorsichtig einführen der Nadelspitze in das Nierenbecken und Überwachung der Nadelspitze in das Nierenbecken kann helfen diesen Fehler zu vermeiden. Manchmal, wird die Nadel durch Nierengewebe beim Einspritzen blockiert werden wenn es nicht in das Nierenbecken eingeführt wird. In diesem Fall entfernen Sie das Gewebe von der Nadel, zurücksetzen Sie Farbstoff Fluss durch einen Neustart des hydrostatischen Druck und leiten Sie die Nadelspitze in Richtung der Nierenbecken. Darüber hinaus möglicherweise Phänotypen, die mit CAKUT verbundenen ein- oder beidseitig. Daher sicherstellen Sie, dass die Injektion für Links und rechts urinausscheidenden Systeme separat durchgeführt wird. Optimal, führen Sie die Injektion zunächst mit einer offensichtlich abnorme Nieren zu prüfen, ob UVJO einseitige ist.
Bild unmittelbar nach der Injektion-Prüfung, da der Farbstoff aus dem Nierenbecken durch den Harnleiter schnell vergeht. Es ist schwer zu sehen, die Farbe während der Bildgebung des normalen Harnleiter denn einen normalen Harnleiter einen dünnen Schlauch, obwohl Farbstoff unter dem sezierenden Mikroskop überwacht werden können. Als Alternative zu Methylenblau 1 % schnell grün mit 1 X PBS-Puffer kann auch verwendet werden und erscheint als eine dunkelgrüne Farbe9. Neben Farbstoff Injektion, histologische Abschnitte der Nieren und Harnleiter nach H & E Färbung werden die Mängel innerhalb der Nieren und Harnleiter bestätigen. Auch ist Bildgebung der Abschnitte mit einem Harnleiter spezifische Reporter eine zusätzliche Möglichkeit, UVJO7bestätigen. Allerdings sollte diese Abschnitte intakt und seriellen Schnitt ist notwendig, um Fehlalarme zu vermeiden. Verglichen mit traditionellen Abschnitt-basierte Analysen der Harnwege, ist dieser Farbstoff-Injektion-Protokoll eine sofortige Möglichkeit, die Integrität der Niere und Harnleiter patent zu beobachten und um Hindernisse wie UPJO oder UVJO zu visualisieren.
Dieses Protokoll bietet eine einfache und unkomplizierte Methode Toquickly visualisieren Harnwege Struktur im späten Maus Entwicklung, wodurch die Analyse der Entwicklung der Harnwege. Die hier beschriebene Methode lässt sich Mutationen zu bewerten, die Entwicklungsstörungen Harnwege Mängel, als Mittel der Identifizierung von Veränderungen der Harnwege Reifung oder Harnleiter Entwicklung verursachen.
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Disclosures
Der Autor hat nichts preisgeben.
Acknowledgments
Ich danke Dr. Alan O. Perantoni (CDBL/NCI/NIH) für die Einreichung des Manuskripts zu unterstützen. Ich danke auch Dr. Michael Hall (CDBL/NCI/NIH) und Nirmala Sharma (CDBL/NCI/NIH) für die Bearbeitung dieser Handschrift. Ich bin dankbar für seine ausgezeichnete Maus Tierhaltung, Lai Thang (SAIC). Diese Arbeit wurde von den National Institutes of Health, National Cancer Institute und Center for Cancer Research unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
References
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