حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي يسهل تقييم المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب أثناء تطوير المسالك البولية الجنينية الماوس. ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي.
المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب هي التشوهات الخلقية حمل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. يمكن تقييم المسالك البولية موريني مفرق عرقلة العيوب من خلال تتبع تدفق صبغة أزرق الميثيلين داخل الجهاز البولي. يتم حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي للكلى الجنينية قبل الولادة، ورصد تدفق صبغ من الحوض الكلوي الكلي عن طريق الحالب وفي التجويف المثانة بعد الضغط الهيدروستاتي. تراكم صبغ سيكون واضحا في التجويف المثانة المسالك البولية الفترة المحيطة بالولادة الطبيعية، ولكن ستكون مقيدة بين الحوض الكلوي ونقطة نهاية الحالب غير طبيعي، في حالة حدوث عوائق المسالك البولية. ويسهل هذا الأسلوب تأكيدا للمسالك البولية مفرق العراقيل والتصور هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويصف هذه المخطوطة بروتوكول لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي لتأكيد العراقيل مفرق المسالك البولية.
الجهاز البولي يتكون من زوج من الكلي والحالب والمثانة ومجرى البول مشتركة. والوظيفة الرئيسية للجهاز البولي المحافظة على التوازن الجسم بإدارة توازن الماء والكهرباء للدم. الكلي تصفية الدم لتركيزات اﻻلكتروﻻيت التحكم وحمض قاعدة التوازن، وإنتاج البول تفرز فائض المياه والنفايات بما في ذلك الذوائب ونواتج الأيض. ثم يتم نقل البول من خلال الحالب من الحوض الكلوي الكلي إلى بلاديرين بطريقة أحادية الاتجاه حيث يتم تخزينها والقضاء عليها في نهاية المطاف عن طريق الاحليل1.
الحالب أنابيب مستقيمة مصدرها القناة ونمائية. بعد الناشئين من لاصق ونمائية يوم الجنينية 10.5 (E10.5) في الماوس، ساق الحالب الغضروفي ويفرق في بنية متعددة الطبقات تسمى أوروثيليوم وكتيمه بين الماوس E12.5 و E16.5. كما تختلف الخلايا الوسيطة التي تحيط بساق الحالب إلى ثلاث طبقات مكونة من الخلايا اللحمية الداخلية وخلايا العضلات الملساء سميكة الوسيطة الليفية أدفينتيتيال الخارجي. موجات تمعجية الحالب الشروع في الحوض الكلوي تنتشر من خلال طبقة العضلات الملساء لجدار الحالب إلى المثانة لنقل البول2،3، الذي يتم إنتاجه في بداية E16.5 في الماوس1.
التشوهات الخلقية في الكلي والمسالك البولية (كاكوت) من بين الأمراض الوراثية الأكثر شيوعاً، في حوالي 1 في المائة من الأجنة البشرية1،4، وتتألف من مجموعة متنوعة من تعمل بما في ذلك هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويؤدي التراكم غير طبيعي للبول في الكلي والحالب تشكيل هيدرونيفروتيك hydroureter والكلى. أحد الأسباب لتشكيل هيدرونيفروسيس و/أو هيدروريتير من انسداد المسالك البولية. انسداد مفرق أوريتيروبيلفيك (أوبجو) بسبب تدفق البول الشاذة بسبب انسداد الحالب الدانية بين الحوض الكلوي، مما أدى إلى هيدرونيفروسيس وتضييق hydroureter الدانية مع أنجولاتيون أو المستمرة للطي5، 6. وباﻹضافة إلى ذلك، إدراج الحالب القاصي حمل خارج الرحم في جدار المثانة أو المسالك التناسلية يسمى عرقلة مفرق أوريتيروفيسيكال (أوفجو). يمكن أيضا لحمل أوفجو هيدرونيفروسيس وهيدروميجوريتير7،تشكيل8. هو عيب مفرق (أوفج) أوريتيروفيسيكال إضافية الجزر فيسيكوريتيريك (فور). فور يتسم بالتدفق إلى الوراء البول من المثانة نحو الكلي في أوفج. بالمقارنة مع أوفجو، الأجنة قبل الولادة مع فور لا واضح إظهار الكلي منتفخة هيدرونيفروتيك أو هيدروريتير الشديد النمط الظاهري9.
في مختبر الماوس، يمكن دراسة تدفق البول بحقن صبغة، مثل الميثيلين الأزرق، في الحوض الكلوي9. الحل إينجيكتيدميثيليني الأزرق وسوف تتبع مسار البول من الحوض الكلوي عن طريق الحالب والمثانة. Hydronephrosis يمكن أن تعترف بزيادة الصبغة في الكلي. ويمكن الكشف عن آبجو كانسداد تدفق الصبغة في الحالب الدانية مع الحوض الكلوي منتفخة5. أي تمدد الحالب المؤشرة قطرها اتسعت يوضح مثال على هيدروريتير. أخيرا، يشير إلى أوفجو مع هيدرونيفروتيك منتفخة الكلي تراكم صبغ في جدار المثانة أو في موقع المسالك التناسلية والمتوسعة7،هيدروميجوريتير10. للكشف عن فور، يتم حقن الحل صبغ في المثانة ورصد تدفق تراجعية لاحقة في الكلي9.
ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى الحوض الكلوي الجنين قبل الولادة. هذا البروتوكول يسمح لتعقب تدفق البول من الحوض الكلوي من خلال الحالب والمثانة والتحقق من المسالك البولية مفرق العراقيل المحتملة مثل آبجو أو أوفجو.
الماوس الكلي الوظيفية بدءاً E16.5 واختبار حقن صبغة من الممكن نظرياً من هذه النقطة الزمنية. ومع ذلك، الكلي صغير جداً بالحقن مع الحل صبغ وتعمل مثل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير لا تراعي وضوح حيث تعمل هذه تأثير ثانوية من البول التي تراكمت بسبب النقل البول غير طبيعي. وتتضح هذه تعمل، من العراقيل مثل …
The authors have nothing to disclose.
أود أن أشكر الدكتور ألن سين بيرانتونى (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لدعم تقديم هذه المخطوطة. أود أيضا أن أشكر الدكتور مايكل هول (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) و Nirmala شارما (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لتحرير هذه المخطوطة. أنا ممتن لأي ثانغ (سايك) لتربية ماوس ممتازة له. وأيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للسرطان، ومركز “أبحاث السرطان”.
Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |