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Biology

Methylene ब्लू डाई इंजेक्शन द्वारा मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोषों का आकलन

doi: 10.3791/56247 Published: October 12, 2017

Summary

Methylene ब्लू डाई इंजेक्शन गुर्दे श्रोणि में माउस भ्रूण मूत्र पथ विकास के दौरान मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोष के आकलन की सुविधा । यहां, गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन किया गया है ।

Abstract

मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोष जन्मजात hydronephrosis और hydroureter उत्प्रेरण विसंगतियों हैं । Murine मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोषों मूत्र प्रणाली के भीतर methylene नीले रंग के प्रवाह पर नज़र रखने के द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है । Methylene ब्लू डाई प्रसवकालीन भ्रूण गुर्दे और डाई प्रवाह के गुर्दे श्रोणि में इंजेक्शन है यूरेटर के माध्यम से गुर्दे की श्रोणि से और मूत्राशय लुमेन में हीड्रास्टाटिक दबाव लागू करने के बाद निगरानी की जाती है । डाई संचय सामांय प्रसवकालीन मूत्र पथ के लुमेन में स्पष्ट हो जाएगा, लेकिन गुर्दे श्रोणि और एक असामांय यूरेटर के अंत बिंदु के बीच विवश हो जाएगा, अगर मूत्र पथ अवरोधों होते हैं । इस विधि मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों और hydronephrosis और hydroureter के दृश्य की पुष्टि की सुविधा । इस पांडुलिपि गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों की पुष्टि ।

Introduction

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मूत्र प्रणाली गुर्दे और मूत्रवाहिनी और एक आम मूत्राशय और मूत्रमार्ग की एक जोड़ी के होते हैं । मूत्र प्रणाली का मुख्य कार्य रक्त के पानी और इलेक्ट्रोलाइट संतुलन का प्रबंधन करके शरीर homeostasis बनाए रखने के लिए है । गुर्दे इलेक्ट्रोलाइट सांद्रता और अम्ल-आधार संतुलन को नियंत्रित करने के लिए रक्त को फिल्टर, और solutes और चयापचयों सहित अतिरिक्त पानी और अपशिष्ट उत्सर्जित करने के लिए मूत्र का उत्पादन । मूत्र तो bladderin एक एकतरफ़ा तरीके से गुर्दे की गुर्दे श्रोणि से यूरेटर के माध्यम से ले जाया जाता है, जहां यह और संग्रहीत अंततः मूत्रमार्ग के माध्यम से समाप्त हो जाता है1

मूत्रवाहिनी सीधे nephric नलिका से उद्भव ट्यूब हैं । के बाद भ्रूण दिवस १०.५ (ई 10.5) में nephric डक्ट से माउस में नवोदित, यूरेटर डंठल लंबी और एक multilayered संरचना में अंतर urothelium कहा जाता है जो माउस e 12.5 और e 16.5 के बीच अभेद्य है । mesenchymal यूरेटर डंठल आसपास की कोशिकाओं को भी तीन भीतरी stromal कोशिकाओं, मध्यवर्ती मोटी चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं, और बाहरी adventitial fibroblasts से मिलकर परतों में विभेदित कर रहे हैं । Ureteral सिकुड़नेवाला गुर्दे श्रोणि में शुरू लहरों मूत्राशय के लिए यूरेटर दीवार की चिकनी मांसपेशी परत के माध्यम से प्रचार के लिए मूत्र परिवहन के लिए कर रहे है2,3, जो माउस1में ई 16.5 प्रारंभ का उत्पादन किया है ।

गुर्दे और मूत्र पथ की जन्मजात विसंगतियों (CAKUT) सबसे अक्सर आनुवंशिक रोगों के बीच में हैं, मानव भ्रूण के 1% के आसपास में मौजूद1,4, और hydronephrosis और hydroureter सहित phenotypes की एक किस्म की रचना । गुर्दे और यूरेटर में मूत्र के असामान्य संचय hydronephrotic गुर्दे और hydroureter गठन में परिणाम है । hydronephrosis और/या hydroureter गठन का एक कारण मूत्र पथ की एक रुकावट है । Ureteropelvic जंक्शन रुकावट (UPJO) समीपस्थ यूरेटर और गुर्दे श्रोणि के बीच एक रुकावट के कारण ंयायपालिका मूत्र प्रवाह की वजह से है, hydronephrosis और समीपस्थ hydroureter के साथ संकुचन angulation या लगातार तह में जिसके परिणामस्वरूप5, 6. इसके अलावा, या तो मूत्राशय की दीवार या प्रजनन पथ में बाहर यूरेटर के अस्थानिक प्रविष्टि ureterovesical जंक्शन रुकावट (UVJO) कहा जाता है । UVJO भी hydronephrosis और hydromegaureter गठन7,8प्रेरित कर सकते हैं । एक अतिरिक्त ureterovesical जंक्शन (UVJ) दोष vesicoureteric भाटा (VUR) है । VUR UVJ में गुर्दे की ओर मूत्राशय से प्रतिगामी मूत्र प्रवाह की विशेषता है । UVJO की तुलना में, VUR के साथ प्रसवकालीन भ्रूण स्पष्ट रूप से एक विवृत्त hydronephrotic गुर्दे या गंभीर hydroureter phenotype9दिखा नहीं है ।

प्रयोगशाला में माउस, मूत्र प्रवाह एक डाई के इंजेक्शन द्वारा जांच की जा सकती है, जैसे methylene नीले, गुर्दे में9श्रोणि. injectedmethylene ब्लू समाधान यूरेटर के माध्यम से और मूत्राशय में गुर्दे श्रोणि से मूत्र पथ का पता लगाने जाएगा । Hydronephrosis गुर्दे में डाई के एक विस्तार से पहचाना जा सकता है । UPJO के साथ समीपस्थ यूरेटर में डाई प्रवाह की एक रुकावट के रूप में पता लगाया जा सकता है गुर्दे श्रोणि5। एक चौड़े व्यास द्वारा संकेत यूरेटर के किसी भी फैलाव hydroureter का एक उदाहरण दर्शाता है । अंत में, मूत्राशय की दीवार पर डाई संचय या प्रजनन पथ के स्थल पर UVJO hydronephrotic गुर्दे और फैली हुई hydromegaureter7,10के साथ इंगित करता है । VUR का पता लगाने के लिए, डाई समाधान मूत्राशय में इंजेक्शन है और बाद में प्रतिगामी प्रवाह गुर्दे में9पर नजर रखी है ।

यहां, एक प्रसवकालीन भ्रूण के गुर्दे श्रोणि में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है । इस प्रोटोकॉल यूरेटर के माध्यम से और मूत्राशय में गुर्दे श्रोणि से मूत्र प्रवाह की अनुरेखण की अनुमति देता है और इस तरह के UPJO या UVJO के रूप में संभावित मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों की पुष्टि ।

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Protocol

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< p class = "jove_content" > चूहों ( Wnt5a flox / flox चूहों (Wnt5a tm 1.1 tpy ) और Dll1Cre लाइन, UVJO माउस मॉडल) < सुप क्लास = "xref" > 7 की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए NIH दिशानिर्देशों के अनुसार प्रबंधित किए गए और एक NCI-फ्रेडरिक पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के तहत अध्ययन किया ।

< p class = "jove_title" > 1. Methylene ब्लू डाई सॉल्यूशन की तैयारी

  1. उपाय ०.१ g Methylene नीला चूर्ण.
  2. भंग द्वारा पूरी तरह से 10 मिलीलीटर सामान्य खारा या 1x फॉस्फेट में methylene नीले रंग का विघटन (पंजाब) ।
  3. फ़िल्टर 10 मिलीग्राम/एमएल methylene ब्लू एक सिरिंज फ़िल्टर के साथ समाधान (झिल्ली ताकना आकार ०.४५ & #181; m) इंजेक्शन के दौरान कॉलेस्ट्रॉल को समाप्त करने के लिए.
  4. एक बाँझ खोपड़ी नस सेट को इकट्ठा (27GX3/4 & #8243;) एक 3 मिलीलीटर डिस्पोजेबल सिरिंज के साथ और 3 मिलीलीटर फ़िल्टर्ड methylene ब्लू समाधान के साथ सिरिंज भरें.
    नोट: हीड्रास्टाटिक दबाव और बाद में डाई प्रवाह को रोकने के लिए, methylene ब्लू समाधान के साथ भरा सिरिंज के ऊपर सुई टिप जगह.
< p class = "jove_title" > 2. जंम के पूर्व के भ्रूण के विच्छेदन

  1. स्वच्छ विदारक कैंची और संदंश ७०% इथेनॉल के साथ ।
  2. ई 18.5 या ई 19.5 पर प्रसवकालीन भ्रूण इकट्ठा करने के लिए, euthanize गर्भवती चूहों पहले सह 2 साँस लेना का उपयोग कर और फिर NIH दिशा निर्देशों के अनुसार ग्रीवा विस्थापन प्रदर्शन.
    नोट: गर्भवती महिला माउस आमतौर पर ई 18.5 में शुरू जंम देता है, तथापि, बड़ा गुर्दे हेरफेर करने के लिए आसान कर रहे हैं । इसलिए, जन्म के करीब ई 19.5 पर गुर्दे इस विश्लेषण पर प्रदर्शन करने के लिए आसान कर रहे हैं । हालांकि, द्विपक्षीय मूत्र पथ अवरोधों के साथ पिल्ले जंम के बाद मर जाते हैं । प्रयोगात्मक चूहों की विशेषताओं पर निर्भर करता है, एक उपयुक्त संग्रह दिन/समय empirically निर्धारित किया जाना चाहिए ।
  3. ventral पेट की सतह पर ७०% इथेनॉल स्प्रे और फिर उदर गुहा विदारक कैंची और संदंश का उपयोग ventrally खोलने.
  4. पूरे गर्भाशय लिफ्ट और गर्भाशय के सींग के सुझावों पर विच्छेदन कैंची के साथ काटने से शरीर से अलग ।
  5. एक पेट्री डिश में 1x पंजाबियों के साथ पूरे गर्भाशय कुल्ला ।
  6. गर्भाशय विदारक कैंची के साथ खंड में कटौती और अपरा decidua विदारक संदंश के साथ हटाने के लिए जर्दी sacs में भ्रूण का पर्दाफाश ।
  7. पहले जर्दी थैली निकालें और फिर प्रसवकालीन भ्रूण को मुक्त करने के लिए विदारक संदंश के साथ एमनियोटिक झिल्ली को हटा दें ।
  8. Decapitate एक भ्रूण विदारक कैंची के साथ । बाँझ धुंध पैड के साथ अतिरिक्त रक्त पोंछ । एक विदारक माइक्रोस्कोप इमेजिंग के लिए एक डिजिटल कैमरा के साथ सुसज्जित पर अपने ventral सतह के साथ नीचे भ्रूण पिन । यदि आवश्यक हो तो genotyping के लिए इसकी पूंछ लीजिए.
    नोट: एक समय में इंजेक्शन एक भ्रूण प्रदर्शन ।
  9. ध्यान से त्वचा को फाड़कर संदंश के साथ एक भ्रूण की उदर गुहा खोल । फिर, ध्यान से अतिरिक्त अंगों और ऊतकों जैसे जिगर, पेट, और आंत संदंश के साथ उन्हें काटने या उन्हें बाहर खींच द्वारा गुर्दे, मूत्रवाहिनी, और मूत्राशय कि पृष्ठीय स्थित हैं का पर्दाफाश करने के लिए निकालें (< मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 1a ). यदि आवश्यक हो तो बाँझ धुंध पैड के साथ विच्छेदित भ्रूण से अतिरिक्त रक्त को अवशोषित ।
    नोट: अतिरिक्त रक्त डाई इंजेक्शन के लिए गुर्दे श्रोणि की पहचान के साथ हस्तक्षेप ।
< p class = "jove_title" > 3. गुर्दे श्रोणि और निगरानी डाई फ्लो

    में Methylene नीले रंग का इंजेक्शन
  1. सुई और हीड्रास्टाटिक दबाव से सुई टिप से Methylene नीले समाधान को निष्कासित करके टयूबिंग में बुलबुले निकालें । प्रवाह शुरू करने के लिए सुई टिप के स्तर से ऊपर डाई समाधान युक्त सिरिंज उठा, और फिर प्रवाह को रोकने के लिए सिरिंज कम.
  2. समीपस्थ यूरेटर के पास गुर्दे श्रोणि में सुई डालने, यह एक बार रखा परेशान करने के लिए नहीं देखभाल ले. एक गुर्दे में डाई इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए अपने मूत्र पथ रुकावट निर्धारित करते हैं ।
    नोट: किसी भी असामान्य गुर्दे में डाई इंजेक्शन प्रदर्शन < सुप वर्ग = "xref" > 7 पहले उसी तरह का पालन करके अपने मूत्र पथ रुकावट का निर्धारण ।
  3. हीड्रास्टाटिक दबाव प्रदान करने के लिए लगभग 20 सेमी ऊपर सिरिंज लिफ्ट और दो 15 & #181; l-६० & #181; डाई समाधान प्रवाह के एल. प्रवाह दर लगभग 3 & #181; L/यदि सिरिंज को भ्रूण के ऊपर इस ऊँचाई तक उठाया जाता है.
  4. गुर्दे श्रोणि में पहले शुरू डाई के नीले रंग की निगरानी, तो यूरेटर की लंबाई में, और अंत में मूत्राशय लुमेन में.
    नोट: यह 5 एस के बारे में एक कमजोर डाई रंग देखने के लिए लेता है मूत्राशय लुमेन के भीतर उभरने अगर यूरेटर ठीक से मूत्राशय में डाला जाता है । डाई की अनुमति के बारे में अवरुद्ध साइट पर जमा करने के लिए 15 एस अगर कोई डाई रंग मूत्राशय लुमेन में दिखाई देता है.
  5. जगह सिरिंज नीचे डाई प्रवाह को रोकने के लिए और गुर्दे से सुई को दूर.
  6. गुर्दे की छवियों को ले, यूरेटर, और मूत्राशय एक stereomicroscope.
  7. से जुड़े कैमरा और इमेजिंग कार्यक्रम का उपयोग कर डाई समाधान के साथ पता लगाया
  8. गुर्दे, hydroureter, और एक प्रयोगशाला नोटबुक में डाई समाधान की अंतिम स्थिति के hydronephrosis का एक रिकॉर्ड बनाने के लिए ।
  9. ३.१ वर्गों में वर्णित के रूप में contralateral गुर्दे के इंजेक्शन प्रदर्शन) ३.५ करने के लिए) और कुल में 20 एस के बारे में डाई प्रवाह की अनुमति दें ।
    नोट: मूत्राशय लुमेन डाई समाधान के साथ भरा जाएगा, एक मजबूत नीले रंग द्वारा संकेत दिया, अगर यूरेटर ठीक से मूत्राशय लुमेन में डाला जाता है । मूत्र पथ जंक्शन रुकावट के आकलन के बाद, मूत्रवाहिनी और मूत्राशय अनुभाग के लिए तय किया जा सकता है ।

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Representative Results

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गुर्दे और कम मूत्र प्रणाली ऐसे जिगर और आंत के रूप में सबसे अन्य आंतरिक अंगों के लिए पृष्ठीय स्थित हैं । इन अन्य आंतरिक अंगों को हटाने के बाद, एक जोड़ी गुर्दे और मूत्रवाहिनी और एक एकल मूत्राशय (चित्रा 1a) दिखाई दे रहे हैं । सफल विच्छेदन पर, डाई गुर्दे श्रोणि में इंजेक्शन यूरेटर के माध्यम से मूत्राशय में गुर्दे से प्रवाह होगा । गुर्दे श्रोणि यूरेटर गुर्दे में की तरह फैली हुई समीपस्थ भाग कीप है । इसलिए, डाई इंजेक्शन बिंदु के रूप में काले तीर (चित्र 1b-1C) के साथ संकेत के रूप में गुर्दे के साथ जुड़े दिखाई समीपस्थ यूरेटर के पास है । एक गुर्दा में methylene ब्लू डाई समाधान के साथ इंजेक्शन के बाद, डाई यूरेटर के माध्यम से और मूत्राशय में यूरेटर और मूत्राशय लुमेन में एक दृश्य नीले रंग में जिसके परिणामस्वरूप, गुर्दे से बहती है, अगर मूत्र पथ अवरोधों मौजूद नहीं है (चित्र 1b ). डाई समाधान आमतौर पर एक सामांय यूरेटर में जल्दी भी इमेजिंग से पहले गायब हो जाता है, और यूरेटर में डाई रंग कमजोर है क्योंकि सामांय यूरेटर एक पतली ट्यूब है । हालांकि, यूरेटर में डाई प्रवाह एक विदारक माइक्रोस्कोप के साथ मनाया जा सकता है । मूत्राशय लुमेन में एक मजबूत नीले रंग डाई समाधान (चित्रा 1C) के साथ दोनों गुर्दे के इंजेक्शन के बाद कुल में लगभग 20 एस के लंबे समय तक प्रवाह के परिणाम के रूप में प्रकट होता है. contralateral इंजेक्शन के बाद मूत्राशय में डाई संचय इंगित करता है कि दूसरे मूत्र प्रणाली किसी भी मूत्र पथ जंक्शन रुकावट नहीं है ।

यह किसी भी मूत्र पथ जंक्शन अवरोधों की पुष्टि करने के लिए पहले एक स्पष्ट रूप से असामान्य गुर्दे सुई उचित है. असामान्य hydronephrotic गुर्दे एक विस्तृत गुर्दे श्रोणि के साथ उनके बड़े आकार या पतली पारदर्शी सतह से पहचाना जा सकता है । एक उदाहरण hydronephrotic गुर्दे और एक असामान्य रूप से फैली हुई hydroureter का इरादा चित्रा 2aमें चित्रित कर रहे हैं । एक फैली हुई hydroureter आमतौर पर एक बहुत मजबूत दृश्य में परिणाम है क्योंकि इसकी विस्तारित मात्रा एक सामांय, पतली यूरेटर की तुलना में बहुत अधिक डाई समाधान बरकरार रखती है । यदि गुर्दे और/या मूत्रवाहिनी विच्छेदन के दौरान क्षतिग्रस्त हो जाते हैं, मूत्र पथ जंक्शन अवरोधकों की परीक्षा असंभव है क्योंकि डाई क्षतिग्रस्त स्थल पर aberrantly बाहर रिसाव होगा । उदाहरण के लिए, चित्रा 2a में असामान्य hydroureter उसके मध्य में क्षतिग्रस्त हो गया था और, इसलिए, डाई समाधान की अंतिम स्थिति स्पष्ट नहीं है और मूत्राशय लुमेन (चित्रा 2a) में डाई के अभाव के बावजूद UVJO सत्यापित नहीं किया जा सकता है. हालांकि, फैली हुई hydroureter और hydronephrotic गुर्दे के साथ इस प्रसवकालीन मूत्र प्रणाली UVJO हो सकता है के रूप में यूरेटर अपनी लंबाई के साथ चौड़ा है और गुर्दे स्पष्ट रूप से विवृत्त है । contralateral मूत्र प्रणाली के रूप में यह एक पतली यूरेटर है और डाई बाद में मूत्राशय लुमेन (चित्रा बी) में प्रवेश करती है सामांय दिखाई देता है ।

Figure 1
चित्र 1. एक सामान्य मूत्र प्रणाली में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के उदाहरण । (क) अतिरिक्त ऊतक निकालने के बाद एक प्रसवकालीन भ्रूण (ई 19.5) से मूत्र प्रणाली की एक ठेठ छवि । दो गुर्दे, दो मूत्रवाहिनी, और एक मूत्राशय प्रजनन अंगों के साथ देखा जाता है, यहां का परीक्षण (ख) एक सामांय गुर्दे में डाई इंजेक्शन का एक उदाहरण है । गुर्दे श्रोणि (काला तीर) में एक इंजेक्शन बिंदु देखा जा सकता है । एक कमजोर डाई रंग यूरेटर और मूत्राशय लुमेन में डाई 5 एस के लिए प्रवाह करने के लिए अनुमति देने के बाद दिखाई दे रहा है (ग) मूत्राशय लुमेन में डाई संचय दोनों सामान्य गुर्दे के इंजेक्शन के बाद. रंग के लिए डाई प्रवाह की अनुमति के बाद मूत्राशय लुमेन में डाई समाधान के संचय से मजबूत हो जाता है 20 एस । गुर्दे श्रोणि भी गुर्दे में कमजोर डाई रंग के साथ दिखाई दे रहा है । B: मूत्राशय, कश्मीर: गुर्दे, टी: वृषण, यू: यूरेटर । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2. एकतरफा hydroureter के साथ एक मूत्र प्रणाली में methylene ब्लू डाई इंजेक्शन के उदाहरण हैं । (क) एक hydroureter और 15 एस के डाई प्रवाह के साथ एक नवजात महिला पिल्ला के एक hydronephrotic गुर्दे के साथ एक मूत्र प्रणाली में डाई इंजेक्शन का एक उदाहरण है । hydronephrotic किडनी contralateral किडनी से साफ तौर पर बड़ी होती है । इसी यूरेटर फैली हुई है और डाई रंग दृढ़ता से पहचानने योग्य है, लेकिन hydroureter स्पष्ट रूप से शरीर गुहा में डाई समाधान लीक द्वारा मनाया के रूप में क्षतिग्रस्त है । (ख) 20 एस के डाई प्रवाह के साथ एकतरफा hydroureter के साथ एक मूत्र प्रणाली के contralateral गुर्दे में डाई इंजेक्शन के सामान्य गुर्दे में इंजेक्शन डाई समाधान मूत्राशय लुमेन में जमा है कि पुष्टि असामान्यता एकतरफा है. B: मूत्राशय, एच: hydronephrotic गुर्दे, हू: hydroureter कश्मीर: गुर्दे, यू: यूरेटर, यूटी: गर्भाशय हॉर्न । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

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माउस गुर्दे ई 16.5 पर शुरू कार्यात्मक है और एक डाई इंजेक्शन परीक्षण सैद्धांतिक रूप से इस समय बिंदु से संभव है । हालांकि, गुर्दे डाई समाधान और phenotypes जैसे hydronephrosis और hydroureter के साथ इंजेक्शन किया जा करने के लिए बहुत छोटा है स्पष्ट रूप से इन phenotypes मूत्र के एक माध्यमिक प्रभाव असामान्य मूत्र परिवहन के कारण निर्मित कर रहे हैं के बाद से मनाया नहीं कर रहे हैं. इन phenotypes, UPJO या UVJO जैसे अवरोधों से, ई 18.5 में स्पष्ट गुर्दे और मूत्रवाहिनी द्वारा किया जाता है । ई 19.5 या नवजात पिल्ले पर भ्रूण की बड़ी गुर्दे ई 18.5 या छोटी पर भ्रूण की तुलना में हेरफेर करने के लिए आसान कर रहे हैं । हालांकि, द्विपक्षीय मूत्र पथ अवरोधों के साथ पिल्ले जंम के बाद मर जाते हैं । इसलिए, CAKUT phenotypes उचित प्रसवकालीन भ्रूण या पिल्ले प्रयोगात्मक माउस विशेषताओं के आधार पर चुनने के द्वारा सत्यापित करने के लिए प्रयोग करते हैं ।

टुकड़े सावधानी से एक बरकरार मूत्र प्रणाली डाई इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए संभावित दोषों की जांच करने से पहले बनाए रखने के लिए । यह अनिवार्य रूप से असामान्य hydronephrotic गुर्दे और मूत्रवाहिनी के लिए महत्वपूर्ण है, जो बहुत ही हैं और आसानी से गुर्दे और मूत्र पथ का पर्दाफाश करने के लिए अतिरिक्त ऊतक को हटाने के दौरान क्षतिग्रस्त कर रहे हैं । विच्छेदन के दौरान इन अंगों को नुकसान पहुँचाने से असली दोषों का पूर्ण निर्धारण रोका जा सकेगा. उदाहरण के लिए, चित्रा 2 एक यूरेटर का अलग फैलाव दिखाता है, लेकिन डाई रिसाव बाहर के hydroureter के टर्मिनल बिंदु को दिखाने में विफल रहता है ।

हमेशा के लिए टयूबिंग और सुई से पहले इंजेक्शन से हवा के बुलबुले को दूर करने के लिए सुनिश्चित हो, के रूप में इन बुलबुले उचित डाई प्रवाह ब्लॉक होगा । सफल विच्छेदन के बाद, महत्वपूर्ण कदम मूत्र पथ रुकावट की जांच करने के लिए गुर्दे श्रोणि में सुई टिप की प्रविष्टि है । गुर्दे की ऊपरी छमाही में सुई के सम्मिलन, समीपस्थ यूरेटर के पास, गुर्दे श्रोणि में सुई टिप प्रत्यक्ष करने के लिए उपयोगी है. सुई टिप समीपस्थ यूरेटर की ओर इंगित करना चाहिए । के बाद से गुर्दे रक्त वाहिकाओं समीपस्थ यूरेटर के पास स्थित हैं, डाई गुर्दे रक्त वाहिकाओं के साथ प्रवाह कर सकते हैं जब तक कि समीपस्थ यूरेटर की ओर सुई टिप अंक. इस मामले में, सुई टिप समीपस्थ यूरेटर की ओर गुर्दे श्रोणि में समायोजित किया जाना चाहिए । इसके अलावा, सुई गुर्दे के माध्यम से पारित अगर बहुत गहरा डाला, डाई गुर्दे के बाहर रिसाव और शरीर गुहा में पैदा हो सकता है । गुर्दे श्रोणि में सुई टिप के सावधान प्रविष्टि और गुर्दे श्रोणि के भीतर सुई टिप की निगरानी इस विफलता से बचने में मदद कर सकते हैं । यह गुर्दे श्रोणि में नहीं डाला जाता है, तो कई बार, सुई इंजेक्शन के दौरान गुर्दे के ऊतकों द्वारा अवरुद्ध हो जाएगा । इस मामले में, सुई से ऊतक निकालें, हीड्रास्टाटिक दबाव शुरु करके डाई प्रवाह रीसेट और गुर्दे श्रोणि की ओर सुई टिप अनुप्रेषित. इसके अलावा, CAKUT से जुड़े phenotypes एकतरफा या द्विपक्षीय हो सकते हैं । इसलिए, यह सुनिश्चित करें कि इंजेक्शन अलग से छोड़ दिया और सही मूत्र प्रणालियों के लिए किया जाता है । बेहतर, एक स्पष्ट रूप से असामांय गुर्दे के साथ पहले इंजेक्शन प्रदर्शन सत्यापित करने के लिए कि क्या UVJO एकतरफा है ।

छवि इंजेक्शन परीक्षण के तुरंत बाद के बाद से डाई यूरेटर के माध्यम से गुर्दे श्रोणि से गुजरता है जल्दी से । यह एक सामान्य यूरेटर की इमेजिंग के दौरान रंग देखने के लिए मुश्किल है क्योंकि एक सामान्य यूरेटर एक पतली ट्यूब है, हालांकि डाई प्रवाह विदारक माइक्रोस्कोप के तहत निगरानी की जा सकती है । नीले methylene के लिए एक वैकल्पिक के रूप में, 1x पंजाब में 1% तेजी से हरा भी इस्तेमाल किया जा सकता है और एक गहरे हरे रंग9के रूप में दिखाई देगा । डाई इंजेक्शन के अलावा किडनी के ऊतकीय सेक्शन और मूत्रवाहिनी म् ज & #38; ई दाग गुर्दे और मूत्रवाहिनी के भीतर दोषों की पुष्टि करेगा । इसके अलावा, एक यूरेटर विशिष्ट रिपोर्टर के साथ वर्गों की इमेजिंग7UVJO पुष्टि करने के लिए एक अतिरिक्त तरीका है । हालांकि, इन वर्गों बरकरार होना चाहिए और धारावाहिक के लिए झूठी सकारात्मक से बचने के लिए आवश्यक है । मूत्र प्रणालियों के पारंपरिक अनुभाग आधारित विश्लेषण के साथ तुलना में, इस डाई इंजेक्शन प्रोटोकॉल गुर्दे और पेटेंट यूरेटर की अखंडता का पालन करने के लिए और ऐसे UPJO या UVJO के रूप में अवरोधों कल्पना करने के लिए एक त्वरित तरीका है.

इस प्रोटोकॉल एक सरल और सीधा विधि toquickly देर मंच माउस विकास, जो मूत्र पथ के विकास के विश्लेषण की अनुमति देता में मूत्र पथ संरचना कल्पना प्रदान करता है । विधि यहाँ वर्णित उत्परिवर्तनों का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कारण विकासात्मक मूत्र पथ दोष, मूत्र पथ परिपक्वता या यूरेटर विकास में परिवर्तन की पहचान के एक साधन के रूप में.

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Disclosures

लेखक का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस पांडुलिपि के प्रस्तुतीकरण के समर्थन के लिए मैं डॉ॰ एलन ओ Perantoni (CDBL/NCI/NIH) का धन्यवाद करता हूं । मैं इस पांडुलिपि के संपादन के लिए डॉ॰ माइकल हॉल (CDBL/NCI/NIH) और निर्मला शर्मा (CDBL/NCI/NIH) का भी धन्यवाद करता हूं । मैं अपने उत्कृष्ट माउस पशुपालन के लिए लाइ थांग (एसएआईसी) का आभारी हूँ । यह काम स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों, राष्ट्रीय कैंसर संस्थान और कैंसर अनुसंधान के लिए केंद्र द्वारा समर्थित किया गया ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Methylene blue Sigma-Aldrich M9140
Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML Fisherscientific 50-983-204
3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip BD 309657
Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane Pall corporation 4614
Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12"  EXELINT 26709
Delicate Operating Scissors Roboz Surgical Instrument Co. RS-6702
Micro Dissecting Forceps Roboz Surgical Instrument Co. RS-5135
Dumont Tweezers; Pattern #5 Roboz Surgical Instrument Co. RS-5045
BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" BD 305106

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Methylene ब्लू डाई इंजेक्शन द्वारा मूत्र पथ जंक्शन रुकावट दोषों का आकलन
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Yun, K. Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection. J. Vis. Exp. (128), e56247, doi:10.3791/56247 (2017).More

Yun, K. Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection. J. Vis. Exp. (128), e56247, doi:10.3791/56247 (2017).

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