Summary
Ledning myograph teknik bruges til at undersøge vaskulære glatte muskelceller funktioner og skærmen nye lægemidler. Vi rapporterer en detaljeret protokol til måling af de isometriske kontraktilitet af musen mesenterica arterie og til screening af nye afslapning af vaskulær glat muskulatur.
Abstract
Ledning myograph teknik bruges til at vurdere kontraktilitet af vaskulære glatte muskler som svar på depolarization, GPCR agonister/hæmmere og narkotika. Det er almindeligt anvendt i mange undersøgelser af de fysiologiske funktioner af vaskulære glatte muskelceller, patogenesen af Vaskulære sygdomme som forhøjet blodtryk og udviklingen af glatte muskelceller muskelafslappende medicin. Musen er en meget anvendt model dyr med en stor pulje af sygdomsmodeller og genetisk modificerede stammer. Vi introducerede denne metode til at måle isometrisk sammentrækning af musen mesenterica arterie i detaljer. En 1,4-mm segment af musen mesenteriallymfeknuderne modstand arterie blev isoleret og monteret på en myograph afdeling af passerer to stål ledninger gennem sin lumen. Efter ækvilibrering og normalisering foranstaltninger, blev fartøjet segment forstærkede af high-K+ løsning to gange før sammentrækning assay. Som et eksempel på anvendelsen af denne metode i udvikling af lægemidler målte vi den muskelafslappende virkning af en roman naturligt stof, neoliensinine, isoleret fra en kinesisk urt, embryoner af lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) på mus mesenteriallymfeknuderne arterier. Fartøj segmenter monteret på myograph afdeling blev stimuleret med en høj-K+ løsning. Når force spændingen nået en stabil vedvarende fase, blev kumulative doser af neoliensinine føjet til salen. Vi fandt, at neoliensinine havde en dosisafhængig muskelafslappende virkning på glat muskelsammentrækning, hvilket tyder på, at det bærer potentielle aktivitet mod forhøjet blodtryk. Derudover som fartøj segment kan overleve i mindst 4 timer efter montering og vedligehold kontraktilitet induceret af high-K+ løsning for mange gange, vi foreslår, at kan wire myograph system anvendes til den tidskrævende proces med stof screening.
Introduction
Det lille fartøj myograph system bruges her var til måling af isometrisk sammentrækning af lille modstand fartøjer med indre diameter spænder fra 100 til 400 µm. isolerede små fartøjer (omkring 2 mm lang) blev indsat af to 40-µm diameter ledninger og blev derefter monteret på mikrometer-side og transducer kæberne sekventielt. Denne myograph teknik blev først foreslået i 19721 og derefter udviklet primært af Mulvany og hans kolleger2,3,4,5,6. Det er nu en moden teknik med staldudstyr, let ydeevne og en standard normalisering procedure7,8,9. Vi udnyttede denne metode med nogle ændringer til målinger i mus mesenterica arterie.
Vaskulære glatte muskelceller linjer væggene i næsten alle blodkar. Deres grundlæggende funktion er at generere styrker gennem sammentrækning i respons på forskellige stimuli. Den normale kontraktilitet af vaskulære glatte muskulatur er vigtigt for blodtryk forordning og ernæring supplement til10. Unormal regulering af blodtrykket resulterer i en lang række sygdomme, herunder hypertension, hjerteinsufficiens og blandt. Flere undersøgelser har antydet, at unormale blodtryk er altid forbundet med dysfunktionelle vaskulære glatte muskelceller kontraktilitet7,11,12,13. Metoden myograph tillader undersøgelse af isometrisk kontraktilitet af musen fartøjer induceret af forskellige stimuli herunder vasoconstrictors, hæmmere og narkotika. Vellykket målinger af sammentrækning vil hjælpe os med at forstå mekanismerne af blodtryk vedligeholdelse og patogenese af vaskulær glat muskulatur-associerede sygdomme og til at udforske nye terapeutiske tilgange.
Mange kinesiske urter har været udbredt for klinisk behandling af Vaskulære sygdomme; men deres effektive ingredienser normalt forbliver ukendt. Således, isolering og identifikation af de effektive komponenter er meget vigtigt for udviklingen af nye lægemidler. Multi wire myograph teknologi tilbyder en enkel tilgang til screening af aktive komponenter i urter. Vi har rapporteret adskillige undersøgelser ved hjælp af lille skib myograph system til at undersøge mus mesenterica arterie sammentrækning og identificeret naturlige forbindelser med anti-hypertension aktivitet12,13,14. Her beskriver vi de detaljerede protokol for metoden myograph og vurdere den muskelafslappende virkning af neoliensinine isoleret fra embryoner af lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Animalske manipulationer blev godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) af Model Animal Research Center Nanjing Universitet.
1. løsning forberedelse
- Forberede HEPES-Tyrode løsning (H-T) ved hjælp af 137.0 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glucose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7,4.
- Forberede HEPES-Tyrode løsning uden calcium (Ca2 +-gratis H-T) ved hjælp af 140.6 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glucose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7,4.
- Forberede HEPES-Tyrode løsning ved hjælp af 124 mM KCl (høj K+) ved hjælp af 15,7 mM NaCl, 124.0 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glucose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7,4.
2. eksperiment forberedelse
- Forvarm H-T og High-K+ løsninger ved hjælp af et 37 ° C vandbad.
- Tænd myograph system, data erhvervelse hardware og computer.
- Omhyggeligt udfylde alle myograph kamre med 5 mL af H-T løsning.
- Fylde to petriskåle med 20 mL af 4 ° C H-T og Ca2 +-gratis H-T løsninger, henholdsvis, og gemme på is.
- Fyld en 10 cm belagt petriskål med 20 mL af H-T løsning, og bevare det ved stuetemperatur.
3. mus mesenterica arterie dissektion
- Aflive en 8-12 uge gammel C57BL/6J kvindelig eller mandlig mus af cervikal dislokation. PIN musen ned med sin maven opad.
- Fugte maven med 70% ethanol. Derefter skære huden med saks langs den ventrale midterlinjen fra lysken, og gøre indsnit fra starten af den første indsnit nedad til benene på begge sider. Trække huden tilbage på begge sider; gør lignende indsnit at åbne bughinden.
- Brug saks, skåret spiserør, tyktarmen og andre bindevæv at helt isolere mavetarmkanalen med fodring Vaskulaturen fra kroppen.
- Med pincet, flytte den isoleret segment i skålen indeholdende den kolde H-T forberedt i trin 2.4, og forsigtigt skyl vævet i H-T løsning flere gange til at vaske af blodet.
- Overføre den isoleret segment i coated petriskålen forberedt i trin 2,5, og udføre mesenterica arterie dissektion ved stuetemperatur.
- Udjævne mave, jejunum, ileum og caecum i urets retning, og pin mave og caecum på venstre og højre side, henholdsvis.
- Strække mesenteriallymfeknuderne Vaskulaturen seng og lave tarmen med knappenåle til at afsløre de dissekerede mesenteriallymfeknuderne arterier.
Bemærk: Disse betingelser arterierne er på toppen af venerne. - Tænd transmission lyskilde af en stereoskopisk mikroskop, og dissekere arterierne under mikroskop. Sørg for at det hele væv er nedsænket i løsningen.
- Klemme fedtvæv omkring arterier med pincet, og isolere arterierne ved at afskære alle bindevæv med dissektion saks. Undgå at beskadige arterierne.
4. arteriel montering
- Overføre og fordybe mesenterica arterie træet i den kolde Ca2 +-gratis H-T løsning (udarbejdet i trin 2.4) ved fastspænding af overskydende arterier med pincet.
- Afskære en 1,4-mm del af arterien proksimalt for tarmvæggen af en mesenteriallymfeknuderne arkade, og bruge to pincet til at åbne begge sider af denne arterie segment omhyggeligt.
- Forbered to segmenter af rustfri ståltråd 2,5 cm i længden, og placere dem i den samme skål.
- Forsigtigt klemme ene ende af arterie ved hjælp af pincet, og omhyggeligt indsætte to ledninger i lumen af arterie én efter én med hjælp af en anden pincet. Sikre, at ledningerne er holdt lige og ikke røre endotelet.
- Bruger to pincet, klemme de to stål ledninger uden for gevind fartøjet samtidigt, og omhyggeligt overføre fartøjet fra petriskålen til en myograph kammer tidligere fyldt med H-T løsning (trin 2.3).
- Skrue kæberne fra hinanden for at gøre plads til montering. Klemme begge sider af en af de to indsatte ledninger ved hjælp af to pincet, og placere fartøjet i kæben hul (figur 1A).
- Wrap begge sider af fastspændt wiren omkring skruer i kæben tilsluttet mikrometer (figur 1B).
- Fix venstre skruen ved at dreje med uret. Rette ledning ved hjælp af højre pincet, så fix højre skruen ved at dreje med uret (figur 1 c). Sørg for, at fartøjet er altid inde i kæben hullet, men ikke røre kæbe for at undgå skader.
- Lukke de to kæber bruger mikrometer (fig. 1 d). Kontroller, at de to kæber er tæt nok, men at de ikke røre hinanden, og at den ikke optagne ledning er på toppen af den faste wire.
- Bruger den højre pincet, omhyggeligt folde skrues wiren på hjørnet af kæben forbundet for at tvinge transducer, og pak det med uret omkring højre skruen (figur 1E). Derefter, fastgør skruen. Gentag dette trin på venstre side af wiren og lave venstre skruen (figur 1F).
- Flytte kæberne lidt fra hinanden ved nøje roterende mikrometer (figur 1 g). Undgå at strække fartøjet. Bruge pincet til at flytte wiren på mikrometer side til det vandrette plan af wire på transducer side. Forsigtigt dreje mikrometer, så kløften mellem de to kæber kan kun rumme de to ledninger.
- Gentag trin 4.2-4.11 monteres arterier på de andre kamre. Tilsluttes udstyr alle kamre, dækker afdelingerne, vedhæfte 100% ilt levering og en temperatur sonde og starte opvarmning til 37 ° C. Åbn den navigationskortenes software og tryk på knappen Start på Diagramvisning vinduet for at starte optagelsen.
- Blandingen henstår i ca 20 min.
5. normalisering
Bemærk: For at standardisere de eksperimentelle betingelser og indhente pålidelige fysiologiske lydhørhed af fartøjer en normalisering procedure er nødvendige15. Efter forholdet mellem den aktive styrke og indre omkreds af fartøjet har wire myograph system en standard normalisering program til at vurdere den indre omkreds (IC) monteret fartøj5,8, 9. Kort, til at beregne IC (µm), læse mikrometer og inddata værdien som X-værdien og transduceren output kraft, dvs, hvile væg spændinger (mN/mm), som Y-værdi. Programmet vil returnere en monteret kurve (x, Y) og beregne IC svarende til et transmural tryk af 100 mmHg (IC100). Fartøjet er indstillet til den normaliserede indre omkreds (IC1) når den aktive lydhørhed er maksimal.
- Indstil styrker til nul for alle kanaler på enheden, og Blandingen henstår i en anden 1-2 min.
- Vælg normalisering indstillinger fra den "DMT menuen, og sæt parametre som følger:
Okularet kalibrering (mm/div): 0,36; Målrette tryk (kPa): 13,3; IC-1/IC100: 0,9; Online gennemsnit tid (sekunder): 2; Forsinke tid (sekunder): 60. Klik på knappen OK for at lukke vinduet DMT normalisering indstillinger . - Vælg kanalen af interesse fra DMT menu for at åbne en DMT normalisering vindue for den pågældende kanal. Angiv de konstante værdier i vinduet som følger: væv end-point a1: 0,1; Væv end-point a2: 4; Wire diameter (µm): 40. Vinduet viser de beregnede fartøjets længde som 1,40 mm.
- Læs mikrometer af passende væv kammer. Angiv værdien i boksen mikrometer læsning , og klik på Tilføj punkt . Denne værdi er den oprindelige værdi af X (X0). Efter 60 s forsinkelsestid viser vinduet kraften og den effektive pres (ERTP) svarende til denne mikrometer værdi. Samtidig, bliver boksen mikrometer læsning aktiv.
- Strække fartøjet at være normaliseret ved at dreje mikrometer i urets retning. Angiv værdien mikrometer i boksen mikrometer læsning , og klik på Tilføj punkt . Vente på en forsinkelsestid 60 s igen.
- Gentag trin 5.5, fortsætte med at strække fartøjet, og tilføje mikrometer værdier, indtil vinduet viser værdien af "mikrometer X1", som er den beregnede mikrometer indstilling skal strække fartøjet til sin IC1.
- Indstille mikrometer x1 værdi.
Bemærk: Den normaliserede spænding er normalt 1-2 mN.
6. arterie sammentrækning optagelse
Bemærk: Alle de løsninger, herunder High-K+ løsning anvendt i denne afdeling, og H-T blev udarbejdet i trin 2.1.
- Efter normalisering, reagensglasset fartøj i kammer for 15-20 min.
Bemærk: Disse er ikke nødvendigt at udskifte løsningen i dette trin. - Udfordre fartøj med High-K+ løsning to gange.
- For at udfordre fartøjet, skal du erstatte H-T løsning med 5 mL af High-K+ løsning til at fremkalde kontraktion i 10 min, efterfulgt af vask med 5 mL af H-T løsning 3 - 4 gange.
Bemærk: Typisk sammentrækning har en maksimal kraft over 3 mN og en konstant vedvarende kraft omkring 2,5 mN12. Hvis den første udfordring genererer en maksimal kraft under 2,5 mN eller den vedvarende kraft aftager med tiden eller den anden udfordring genererer en langt mindre styrke end første gang dosis, fartøjet er kasseret og vil ikke blive brugt til yderligere undersøgelse.
- For at udfordre fartøjet, skal du erstatte H-T løsning med 5 mL af High-K+ løsning til at fremkalde kontraktion i 10 min, efterfulgt af vask med 5 mL af H-T løsning 3 - 4 gange.
- Udfordre fartøj med 5 mL af High-K+ løsning til at fremkalde kontraktion. Efter 5 min, tilsættes 0,5 µL af neoliensinine stamopløsning (10 mM i DMSO)14 ind i salen til at slappe af fartøjet i en endelig koncentration på 1 µM neoliensinine.
- Når force er stabil (det normalt tager flere minutter), tilføje en anden 0,5 µL af neoliensinine stamopløsning ind i kammeret til at øge koncentration til 2 µM. Add 1 µL af stamopløsningen hver gang for at øge koncentration til 4, 6, 8 og 10 µM til at generere t han dosis-respons kurve.
Bemærk: Lager og arbejder koncentrationer varierer blandt lægemidler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi målte den isometriske kontraktilitet af musen mesenterica arterie ved hjælp af en multi wire myograph system og vurderet den muskelafslappende virkning af neoliensinine renset fra embryoner af lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14. mus mesenteriallymfeknuderne modstand arterie var isoleret, renset af bindevæv og skåret i 1,4-mm segmenter. Arterie segment blev indsat ved to stål ledninger i Ca2 +-gratis H-T løsning i en petriskål, og derefter segmentet var monteret på to kæberne på en myograph afdeling (figur 2A). Efter montering af målgruppen, blev i to ledningerne justeret for at være parallel, lukke men ikke rører hinanden (figur 2B). Inden måling force blev fartøjet segment normaliseret og forstærkede to gange af High-K+ løsning for at stabilisere fartøjet. Under proceduren normalisering fartøjet var strakt flere gange indtil nå værdien af IC100, og hver stretch cyklus omfattede en robust sammentrækning, hurtig afslapning og en kraft vedligeholdelse i 60 s (figur 3). Sammentrækning af det vaskulære glatte muskelceller induceret af High-K+ løsning normalt viste to faser, en robust og en vedvarende fase (figur 3). Fartøj segment kan blive brugt til yderligere eksperimenter kun hvis High-K+-evoked sammentrækning vises normal og reproducerbar. En typisk måling med neoliensinine er repræsenteret i figur 4. Når kraft spændingen induceret af High-K+ nåede et vedvarende fase, tilføjet vi akkumulerede doser af neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 og 10 µM) gennem hullerne i dækslet til salen. Som doserne øges, reduceres kraften i en dosisafhængig måde. Resultatet viste, at neoliensinine er en vaskulær glat muskulatur muskelafslappende stof, der potentielt fungerer som en kandidat anti-hypertension medicin14.
Figur 1: en skematisk af arteriel montering procedure. De blå linjer repræsenterer ledningerne, og den røde rektangel repræsenterer arterie. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: en mus mesenterica arterie segment monteret på myograph afdeling. (A) en mus mesenterica arterie segment monteret på to kæber ved hjælp af to stål ledninger. Den hvide bar = 2 mm. (B) et mikroskopisk billede af monteret mus mesenterica arterie segment i panelet (A). Sort bjælke = 0.5 mm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Repræsentant oprindelige tracings viser normalisering procedure og potensering af High-K+ løsning. Efter den anden High-K+ stimulation, regelmæssig eksperimentet kan udføres. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: repræsentative sporing af musen mesenterica arterie, der er indgået af High-K + løsning og derefter afslappet ved at tilføje akkumulerende doser af neoliensinine. Doserne øges, kraften reduceret i en dosisafhængig måde venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hypertension er en udbredt offentlig sundhedsudfordring på grund af sin alvorlige komplikationer, herunder hjerte-kar- og nyre sygdomme16. Forståelse patogenesen af hypertension og udforske mere anti-hypertensive stoffer er blevet en presserende opgave i dette felt. Blodtryk er genereres og vedligeholdes af perifere modstand af cirkulation. Ifølge Poiseuilles lov, de relativt små arterier genererer en stor del af kredsløbssygdomme modstand og tjene som den dominerende producent af blodtryk3,10. Måling af små-modstand arterier snarere end store arterier er således mere velegnet til studier af blodtrykket. Ledning myograph teknologi er en af de bedste metoder til at studere de fysiologiske funktioner af små-modstand arterier og patogenese af Vaskulære sygdomme.
Lille fartøj wire myograph system har været veldokumenteret i andre betænkninger og blev brugt til at måle sammentrækning af rotte mesenteriallymfeknuderne arterier8 og mus arterier som aorta9. At drage fordel af genmanipulation, en række sygdomsmodeller og stof screening modeller, musen er blevet en meget anvendt model dyr på mange områder. Derfor, her, vi givet en modificeret protokol af denne metode til måling af musen mesenterica arterie sammentrækning. I denne betænkning målt vi med succes kontraktilitet af musen mesenteriallymfeknuderne arterier med ændringer af den grundlæggende buffere og montering trin. Mange undersøgelser af ex vivo vasocontractility måling anvendes opløsninger indeholdende NaHCO3, såsom Krebs løsninger, for at efterligne fysiologiske saltopløsning. Dog skal sådanne buffere CO2 til at justere pH-værdien i hele målingen, hvilket resulterer i produktionen af CaCO3. Vi valgte H-T løsning som buffersystem og fandt det fungerede godt. Da temperaturen har ringe effekt på pKen værdi af HEPES, pH værdien af løsningen er bekvemt justeret ved stuetemperatur og er uændret på 37 ° C 17. Derudover bruger vi Ca2 +-gratis H-T løsning når vejlede ledninger gennem fartøj lumen for at forhindre fartøj konstriktion af Ca2 +. En anden ændring i denne protokol er proceduren, montering. Nogle rapporter8,9 og enhed manuel5 anbefaler vejlede den anden ledning efter fastsættelse af første ledning på kæben. Vi finde det virker bedre, når to ledninger er ført gennem fartøj lumen før montering fartøjet, fordi denne metode kan reducere eventuelle skader af transducer på grund af den begrænsede kammer plads.
Trods en høj reproducerbarhed af denne metode, skal vi betale mere opmærksom på nogle vigtige skridt. Det vigtigste er at undgå skader på skibe forårsaget af saks og pincet. Under fartøjet dissektion, bør operatøren bruge pincet forsigtigt når stretching fedtvæv og bruge saksen omhyggeligt, når du skærer bindevævet. Derudover fastspænding skib til fiksering skal ske forsigtigt, og skader på endotelet bør undgås, når vejlede ledningerne, fordi den endotel-beskadigede fartøj vil give anledning til unormale reaktioner, fx. , det beskadigede fartøj viser tilsyneladende kraft spændinger efter stimulation med acetylcholin, mens den normale fartøj viser en muskelafslappende effekt. Forklaring på dette fænomen er, at det beskadigede endotelet ikke kan producere nitrogenoxid korrekt. Bemærk, at i eksperimentet involverer endotel-relaterede sammentrækning, endotel status skal testes før kraft måling. Derudover skal vi også nøje mount fartøjet på kæberne, fordi transduceren er let beskadiget, hvis anvendes med en hård kraft. Endelig, vi normalt bruger ikke en konstant intervalværdi på mikrometer når du udfører normalisering. Værdien af tilvæksten er 30 eller 20 µm i første omgang og 10 µm efter den effektive pres når 11-12 kPa. Denne metode kan reducere normalisering tid og kan undgå overstretching, således formildende fartøj skade.
Selv om vores undersøgelse fokuserede på musen mesenteriallymfeknuderne arterier, kan denne metode også bruges til aorta, bronkier, og andre små fartøjer, herunder nyre, hjerne og pulmonale arterier. Da dette system indeholder fire kanaler, er det praktisk til måling af fire parallelle prøver samtidigt. Derudover en hel mesenteriallymfeknuderne vaskulære seng kan give mindst fire arterie segmenter, det er således meget nemt at designe forskellige eksperimentelle grupper. Ifølge vores erfaring, hver arterie segment overlever mindst 4 timer og fastholder gode svar til High-K+ løsning over mindst 6 gentagelser. Denne egenskab er mageløs nyttig nemlig målinger af effekten af flere tilføjelser af forskellige kandidat narkotika. Men der er også begrænsninger i wire myograph systemet. Ex vivo wire myograph eksperiment er kun i stand til at måle isometrisk vasocontractility, men det bør normalt kombineres med andre mål for komplekse analyse af fartøjet.
I sammendrag beskrevet vi en metode til måling af isomere kontraktilitet i mus mesenterica arterie ved hjælp af en multi wire myograph system. Denne metode kan bruges til at vurdere funktioner af vaskulære glatte muskelceller og til skærmen afslapning af glatte muskelceller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Vi takker Dr. Wei Qi He (Soochow Universitet, Suzhou, Kina) og Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi'an, Kina) for den tekniske bistand. Dette arbejde blev støttet af den National Natural Science Foundation of China (Grant 31272311, 81373295 og 81473420) og projektet finansieret af de prioriterede akademiske Program udvikling af Jiangsu højere læreanstalter (Grant nr. ysxk-2016).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats. Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).
- Mulvany, M. J., Nyborg, N. An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats. British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).
- Mulvany, M. J. Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).
- Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).
- Michael, S. K., et al. High blood pressure arising from a defect in vascular function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).
- Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).
- del Campo, L., Ferrer, M. Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , Springer. New York. (2015).
- Fisher, S. A. Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function. Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).
- Crowley, S. D., et al. Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system. The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).
- Qiao, Y. N., et al. Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure. The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).
- He, W. Q., et al. Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).
- Yang, G. M., et al. Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant. Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).
- Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery. Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).
- Kearney, P. M., et al. Global burden of hypertension: analysis of worldwide data. The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).
- Good, N. E., et al. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).
