Summary
Wire myograph tekniken används för att undersöka vaskulär glatt muskulatur funktioner och skärmen nya droger. Vi rapporterar en detaljerade protokoll för mätning av isometrisk kontraktilitet av mus mesenterica artär och för screening nya muskelavslappnande medel i vaskulär glatt muskulatur.
Abstract
Wire myograph tekniken används för att bedöma kontraktiliteten i vaskulära glatta muskulaturen i svar till depolarisering, GPCR agonister/hämmare och droger. Det är allmänt används i många studier på de fysiologiska funktionerna i vaskulär glatt muskulatur, patogenesen av vaskulära sjukdomar som hypertoni och utvecklingen av glatt muskulatur muskelavslappnande läkemedel. Musen är en allmänt använd modell djur med en stor pool av sjukdomsmodeller och genetiskt modifierade stammar. Vi introducerade denna metod för att mäta isometrisk sammandragning av mus mesenterica artär i detalj. En 1,4-mm segment av mus mesenterica motstånd artär isolerades och monterad på en myograph kammare genom att passera två ståltråd genom dess lumen. Efter Jämviktstiden och normalisering steg, var fartyget segmentet förstärkte av en hög-K+ lösningen två gånger före sammandragning analysen. Som ett exempel på tillämpning av denna metod i läkemedelsutveckling mätte vi den relaxerande effekten av en roman naturlig substans, neoliensinine, isolerade från en kinesisk ört, embryon av lotus utsäde (Nelumbo nucifera Gaertn.) på mus mesenterica artärer. De fartygssegment som är monterad på myograph kammaren stimuleras med en hög-K+ lösning. När kraft spänningen nått en stabil varaktig fas, har kumulativa doser av neoliensinine lagts till i kammaren. Vi fann att neoliensinine hade en dosberoende relaxerande effekt på glatt muskulatur kontraktion, vilket tyder på att det bär potentiella aktivitet mot hypertoni. Dessutom segmentet fartyg kan överleva minst 4 timmar efter montering och underhåll kontraktilitet som induceras av hög-K+ lösningen för många gånger, vi föreslår att kan tråd myograph systemet användas för tidskrävande processen för drogkontroll.
Introduction
Små fartyg myograph systemet används här var för att mäta isometrisk sammandragning av litet motstånd fartyg med interna diametrar, från 100 till 400 µm. isolerade små fartyg (ca 2 mm lång) infördes genom två 40 µm diameter sladdar och var sedan monterad på mikrometer-sida och givare-sida käftarna sekventiellt. Denna myograph teknik först föreslogs i 19721 och sedan utvecklas främst genom Mulvany och hans kollegor2,3,4,5,6. Det är nu en mogen teknik med stabil utrustning, lätt prestanda och en standard normalisering förfarande7,8,9. Vi utnyttjade denna metod med några ändringar för mätningar i den mus mesenterica artären.
Vaskulär glatt muskulatur linjer väggarna i nästan alla blodkärl. Deras grundläggande funktion är att generera styrkor genom kontraktion som svar på olika stimuli. Den normala kontraktiliteten av vaskulär glatt muskulatur är viktigt för blodtrycket förordning och nutrition kompletterar10. Onormal reglering av blodtryck resulterar i en mängd olika sjukdomar, inklusive högt blodtryck, hjärtsvikt och ischemi. Flera studier har föreslagit att onormalt blodtryck alltid är associerade med dysfunktionella vaskulär glatt muskulatur kontraktilitet7,11,12,13. Den myograph metoden tillåter utredning av isometrisk kontraktilitet av mus fartyg inducerad av olika stimuli inklusive vasoconstrictors, -hämmare och läkemedel. Lyckade mätningar av kontraktion hjälper oss att förstå mekanismerna bakom blodtryck underhåll och patogenesen av vaskulär glatt muskulatur-associerade sjukdomar och att utforska nya terapeutiska metoder.
Många kinesiska örter har använts i stor utsträckning för klinisk behandling av vaskulära sjukdomar; deras effektiva ingredienser dock brukar okänd. Således, isolering och identifiering av effektiva komponenterna är mycket viktig för utvecklingen av nya läkemedel. Multi wire myograph teknik erbjuder en enkel metod för screening aktiva komponenter i örter. Vi har rapporterats flera studier med hjälp av små fartyg myograph systemet för att undersöka mus mesenterica artär kontraktion och identifierat naturliga föreningar med anti hypertoni aktivitet12,13,14. Här beskriver vi de detaljerade protokoll för metoden myograph och bedöma den relaxerande effekten av neoliensinine isolerade från embryon av lotus utsäde (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djur manipulationer godkändes av institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC) av modell Animal Research Center i Nanjing universitetar.
1. lösningen förberedelse
- Förbereda HEPES-Tyrode lösning (H-T) med 137,0 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukos och 10 mM HEPES, pH 7,3-7.4.
- Förbereda HEPES-Tyrode lösning utan kalcium (Ca2 +-gratis H-T) använder 140.6 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukos och 10 mM HEPES, pH 7,3-7.4.
- Förbereda HEPES-Tyrode lösning med 124 mM KCl (hög K+) med 15,7 mM NaCl, 124,0 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukos och 10 mM HEPES, pH 7,3-7.4.
2. experiment förberedelse
- Förvärma H-T- och hög-K+ lösningar med hjälp av en 37 ° C vattenbad.
- Slå på myograph systemet, data förvärv hårdvara och dator.
- Noggrant fylla alla myograph kammare med 5 mL H-T lösning varje.
- Fyll två petriskålar med 20 mL 4 ° C H-T och Ca2 +-gratis H-T lösningar, respektive, och lagra på is.
- Fyll en 10-cm belagd petriskål med 20 mL H-T och bibehålla den vid rumstemperatur.
3. mus mesenterica artär dissektion
- Avliva en 8-12-vecka-gammal C57BL/6J kvinnliga eller manliga mus av cervikal dislokation. Fästa musen med dess buken uppåt.
- Fukta buken med 70% etanol. Sedan skära huden med sax längs ventrala mittlinjen från ljumsken och göra snitt från början av första snittet nedåt med benen på båda sidor. Dra ut huden tillbaka på båda sidor. göra liknande snitt öppna bukhinnan.
- Med sax, klippa matstrupen, tjocktarmen och andra bindväv att helt isolera magtarmkanalen med utfodring kärlsystemet från kroppen.
- Med pincett, flytta segmentet isolerade i skålen som innehåller kylan H-T bereddes i steg 2,4 och skölj försiktigt vävnaden i H-T lösning flera gånger att tvätta bort blodet.
- Överföra segmentet isolerade i den belagda petriskål som bereddes i steg 2.5 och utföra mesenterica artär dissektion vid rumstemperatur.
- Släta ut magen, jejunum, ileum och blindtarmen i medurs riktning, och fästa magen och blindtarmen på vänster och höger sida, respektive.
- Stretch mesenterica vaskulatur sängen och fixa tarmen med stift att exponera dissekerade mesenterica artärerna.
Obs: Under dessa förhållanden är artärerna ovanpå venerna. - Slå på ljuskällan överföring av en stereoskopisk Mikroskop och dissekera artärerna under mikroskopet. Kontrollera att hela vävnaden är nedsänkt i lösningen.
- Klämma erhållsgenom runt artärerna med pincett och isolera artärerna genom att skära av alla bindväv med dissektion sax. Undvik skadade artärerna.
4. arteriell montering
- Överföra och doppa trädet mesenterica artär i den kallt Ca2 +-fri H-T lösning (beredd enligt steg 2,4) genom fastspänning överskott artärerna med pincett.
- Skär av en 1,4 mm del av artär proximala tarmväggen av ett mesenterica arkadspel, och använder två pincett för att öppna båda sidor av denna artär segmentet noggrant.
- Förbered två segment av rostfritt stål wire 2,5 cm i längd och placera dem i samma skålen.
- Försiktigt klämma ena änden av artären med hjälp av pincetten och för försiktigt in två kablar i lumen av artär taget med hjälp av en annan pincett. Se till att kablarna hålls rakt och inte röra endotelet.
- Använda två pincett, klämma de två ståltråd utanför gängade fartyget samtidigt och noga föra fartyget från petriskål till en myograph kammare tidigare fylld med H-T stopplösningen (steg 2.3).
- Skruva isär käkarna för att göra plats för montering. Klämma båda sidor av en av två infogade kablarna med två pincett och placera kärlet i käken mellanrummet (figur 1A).
- Wrap båda sidor av Klamma kabeln runt skruvarna i käken ansluten till Mikrometern (figur 1B).
- Fixa vänstra skruven genom att vrida medsols. Räta ut tråden med högra pincett, sedan fixa högra skruven genom att vrida medurs (figur 1 c). Se till att fartyget är alltid inuti käken klyftan, men inte röra käken för att undvika skador.
- Stäng de två jaws använder Mikrometern (figur 1 d). Kontrollera två käftarna är tillräckligt nära men att de inte vidrör varandra och att ofixerade tråd är på toppen av den fasta kabeln.
- Använda höger tången, noggrant vik skruvas ur tråden i hörnet av käken anslutna för att tvinga givaren, och vira den medsols runt högra skruven (figur 1E). Sedan fixa skruven. Upprepa detta steg på vänster sida av tråd och fixa vänstra skruven (figur 1F).
- Flytta något isär käkarna genom att försiktigt rotera Mikrometern (figur 1 g). Undvika stretching fartyget. Använd pincett för att flytta tråden på Mikrometern sida till horisontalplanet av tråd på givarens sida. Försiktigt rotera Mikrometern så att klyftan mellan de två käkarna rymmer bara två kablar.
- Upprepa steg 4,2 – 4.11 montera artärer på andra avdelningar. Ansluta alla kamrarna till utrustningen, täcka kamrarna, bifoga 100% syretillförseln och en temperatursond och starta uppvärmning till 37 ° C. Öppna den sjökorten mjukvaran och tryck på knappen Starta på fönstret Diagram Visa att starta inspelningen.
- Låt jämvikta i ca 20 min.
5. normalisering
Obs: För att standardisera de experimentella villkor och för att erhålla tillförlitliga fysiologiska lyhördhet av fartyg, en normalisering förfarandet är nödvändigt15. Enligt förhållandet mellan aktiv kraft och inre omkrets av fartyget har tråd myograph systemet ett standard normalisering-program för att bedöma den monterade fartyg5,8, inre omkrets (IC) 9. Kortfattat, att beräkna IC (µm), läsa Mikrometern och insatsen värdet som X-värde och givaren ut kraft, dvs vila vägg spänningen (mN/mm), som Y-värde. Programmet kommer att returnera en monterad kurva av (X, Y) och beräkna IC motsvarar en transmural tryck på 100 mmHg (IC100). Fartyget är inställd till normaliserade inre omkrets (IC1) när den aktiva lyhördheten är maximal.
- Ange styrkor till noll för alla kanaler på enheten och låt jämvikta i en annan 1-2 min.
- Välj normalisering inställningar från den ”DMT-menynoch Ställ in parametrar enligt följande:
Okularet kalibrering (mm/div): 0,36; Rikta tryck (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; Online integrationstid (sekunder): 2; Fördröja tid (sekunder): 60. Klicka på knappen OK för att stänga fönstret Inställningar för DMT normalisering . - Välj kanal av intresse från DMT-menyn för att öppna ett DMT normalisering fönster för motsvarande kanal. Ange de konstanta värdena i fönstret enligt följande: vävnad slutpunkter a1: 0.1; Vävnaden slutpunkter a2: 4; Tråddiameter (µm): 40. Fönstret visar beräknade båtens längd som 1,40 mm.
- Läs Mikrometern på lämplig vävnad avdelningen. Ange värdet i rutan mikrometer läsning och klicka Lägg till punkt . Detta värde är det initiala värdet av X (X0). Efter 60 s fördröjningstid visar fönstret kraften och den effektiva påtryckningar (ERTP) motsvarar detta mikrometer värde. Samtidigt blir rutan mikrometer läsning aktiv.
- Sträcka fartyget att normaliseras genom att vrida Mikrometern i en moturs riktning. Ange värdet mikrometer i rutan mikrometer läsning och klicka på Lägg till punkt . Vänta på en fördröjningstid på 60 s igen.
- Upprepa steg 5,5, fortsätta att sträcka fartyget, och lägga till mikrometer värden tills fönstret visar värdet av ”mikrometer X1”, vilket är den beräkna mikrometer inställning krävs att sträcka fartyget till dess IC1.
- Ange Mikrometern x1 värde.
Obs: Normaliserat spänningen är vanligtvis 1-2 mN.
6. artär kontraktion inspelning
Obs: Alla de lösningar, inklusive H-T- och hög-K+ -lösning som används i det här avsnittet var förberedda i steg 2.1.
- Efter normalisering, temperera fartyget i kammaren för 15-20 min.
Obs: Dessa är ingen anledning att ändra lösningen i det här steget. - Utmana fartyget med hög-K+ lösning två gånger.
- För att utmana fartyget, ersätta H-T lösning med 5 mL hög-K+ att framkalla sammandragning i 10 min, följt av tvättning med H-T 5 mL 3 - 4 gånger.
Obs: Typiska kontraktion har en maximal kraft över 3 mN och en konstant ihållande kraft runt 2,5 mN12. Om den första utmaningen genererar en maximal kraft under 2,5 mN eller ihållande kraft minskar med tiden eller den andra utmaningen genererar en mycket lägre styrka än den första gång dosen, fartyget kasseras och kommer inte att användas för vidare utredning.
- För att utmana fartyget, ersätta H-T lösning med 5 mL hög-K+ att framkalla sammandragning i 10 min, följt av tvättning med H-T 5 mL 3 - 4 gånger.
- Utmana fartyget med 5 mL hög-K+ att framkalla sammandragning. Efter 5 min, tillsätt 0,5 µL av neoliensinine stamlösning (10 mM i DMSO)14 in i kammaren att slappna av fartyget med en slutlig koncentration på 1 µM neoliensinine.
- När kraften är stabil (det brukar ta flera minuter), tillsätt en annan 0,5 µL av neoliensinine stamlösning i kammaren att öka koncentrationen till 2 µM. Add 1 µL av stamlösning varje gång för att öka koncentrationen till 4, 6, 8 och 10 µM till generera t Han dos-responskurva.
Obs: De lager och arbeta koncentrationer varierar bland droger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi mätte den isometriska kontraktiliteten av mus mesenterica artär multi wire myograph system med och bedömde den relaxerande effekten av neoliensinine renas från embryon av lotus utsäde (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14. mus mesenterica motstånd artären isolerades, rengöras av bindväv och skuren i 1,4-mm segment. Segmentet artär infördes genom två ståltråd i Ca2 +-gratis H-T lösning i en petriskål och sedan segmentet var monterad på två käkar en myograph avdelning (figur 2A). Efter montering av segmentet, justerades de två kablarna för att vara parallella, nära men inte vidrör varandra (figur 2B). Innan kraft mätning, var segmentet fartyg normaliserade och förstärkte två gånger av hög-K+ lösning för att stabilisera fartyget. Under förfarandet för normalisering, fartyget var sträckt flera gånger tills de når värdet av IC100, och varje stretch cykel ingår en robust sammandragning, snabb avkoppling och en kraft underhåll i 60 s (figur 3). Sammandragning av den vaskulära glatta muskulaturen induceras av hög-K+ lösning oftast visade två faser, en robust och en ihållande fas (figur 3). Segmentet fartyg kan vara används för ytterligare experiment endast om den hög-K+-evoked kontraktion visas normal och reproducerbara. En typisk mätning med neoliensinine representeras i figur 4. När den kraft spänningen induceras av hög-K+ nådde en ihållande fas, vi lagt till kumulativa doser av neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 och 10 µM) genom hålen i locket till kammaren. Eftersom doserna ökade, minskade styrkan på ett dosberoende sätt. Resultatet visade att neoliensinine är en vaskulär glatt muskulatur muskelavslappnande ämne som potentiellt fungerar som en kandidat mot hypertoni drog14.
Figur 1: en schematisk av arteriell montering förfarande. De blå linjerna representerar trådarna och den röda rektangeln representerar artären. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: en mus mesenterica artär segmentet monterad på myograph kammaren. (A) en mus mesenterica artär segmentet monterad på två jaws använder två ståltråd. Den vita stapeln = 2 mm. (B) en mikroskopisk bild av segmentet monterade mus mesenterica artär i panelen (A). Svart streck = 0,5 mm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 3: Representativa ursprungliga tracings visar normalisering förfarandet och potentiering av hög-K+ lösning. Efter den andra hög-K+ stimuleringen, regelbundna experimentet kan utföras. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: representativa spårning av mus mesenterica artär som är kontrakterade av hög-K + lösning och sedan avslappnad genom att lägga till ackumulerande doser av neoliensinine. Eftersom doserna ökade, kraften reduceras på ett dosberoende sätt vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hypertoni är en utbredd folkhälsa utmaning på grund av dess allvarliga komplikationer, inklusive hjärt- och njur sjukdomar16. Förstå patogenesen vid hypertoni och utforska mer blodtryckssänkande läkemedel har blivit en brådskande uppgift i det här fältet. Blodtryck skapas och underhålls av perifer resistens av cirkulationen. Enligt Poiseuilles lag, relativt små artärerna genererar en stor del av cirkulatorisk motstånd och fungera som den dominerande tillverkaren av blodtryck3,10. Således, mätning av små-motstånd artärer i stället för stora artärer är mer lämplig för studier av blodtryck. Den tråd myograph tekniken är en av de bästa formerna att studera fysiologiska funktioner små-motstånd artärer och patogenes för vaskulära sjukdomar.
Små fartyg tråd myograph systemet är väl dokumenterat i andra rapporter och användes för att mäta sammandragning av råtta mesenterica artärer8 och mus artärer såsom aorta9. Dra nytta av genetisk manipulation, en mängd sjukdomar och drug screening modeller, musen har blivit en allmänt använd modell djur inom många områden. Därför, här, vi gav ett modifierat protokoll av denna metod för mätning av mus mesenterica artär kontraktion. I detta betänkande mätte vi framgångsrikt kontraktiliteten av mus mesenterica artärer med ändringar av grundläggande buffertar och montering steg. Många studier på ex vivo vasocontractility mätning används lösningar innehållande NaHCO3, såsom Krebs lösningar, för att efterlikna fysiologisk saltlösning. Dock behöver sådana buffertar CO2 att justera pH-värdet i hela mätningen, vilket resulterar i produktionen av CaCO3. Vi valde H-T lösning som buffert systemet och fann det fungerat bra. Eftersom temperaturen har liten effekt pådet pKvärdet HEPES , pH av lösningen justeras bekvämt vid rumstemperatur och är oförändrade vid 37 ° C 17. Dessutom använder vi Ca2 +-gratis H-T lösning när vägledande trådarna genom fartyget lumen för att förhindra att fartyget sammandragning av Ca2 +. En annan ändring i detta protokoll är förfarandet för montering. Vissa rapporter8,9 och enheten manuell5 rekommenderar vägleda andra tråden efter fastställande första tråden på käken. Vi tycker att det fungerar bättre när två ledningar leds genom fartyget lumen innan montering fartyget eftersom denna metod kan minska skador av givaren på grund av det begränsa kammare utrymmet.
Trots hög reproducerbarhet av denna metod, bör vi ägna mer uppmärksamhet åt några viktiga steg. Det viktigaste är att undvika skador på fartyg som orsakas av pincett och sax. Under kärldissektion, bör verksamhetsutövaren använda tången försiktigt när stretching fettvävnaden och använder saxen noga när du skär bindväv. Dessutom fastspänning fartyget för fixering bör göras försiktigt, och skador på endotelet bör undvikas när vägledande trådarna eftersom endotel-skadade fartyget kommer att ge upphov till onormala reaktioner, t.ex. , skadade fartyget visar uppenbar kraft spänning efter stimulering med acetylkolin, medan normala fartyget visar en relaxerande effekt. Förklaringen till detta fenomen är att skadat endotel inte kan producera kväveoxid ordentligt. Observera att i experimentet som involverar endotel-relaterade kontraktion, endotel status bör testas före kraft mätning. Dessutom bör vi också noggrant montera fartyget på käkarna eftersom givaren är lätt skadas om det med en hård kraft. Slutligen, vi vanligtvis använder inte en konstant ökningsvärdet på Mikrometern när du utför normalisering. Värdet av ökningen är 30 eller 20 µm initialt och 10 µm efter effektiva trycket når 11-12 kPa. Denna metod kan minska normalisering tid och kan förhindra översträckning, därmed förmildrande kärlskada.
Även om vår undersökning fokuserat på mus mesenterica artärer, användas också denna metod för aorta, bronkerna, och andra små fartyg inklusive nedsatt, hjärnan och pulmonell artärer. Eftersom detta system omfattar fyra kanaler, är det bekvämt för mätning av fyra parallella prover samtidigt. Dessutom en hela mesenterica vaskulär säng kan ge minst fyra blodkärlet segment, det är därför mycket lätt att utforma olika experimentella grupper. Enligt vår erfarenhet, varje artär segment överlever minst 4 timmar och upprätthåller god Svaren till hög-K+ lösningen över minst 6 repetitioner. Detta boende är mycket användbart för mätningar av effekterna av flera tillägg av olika läkemedelskandidater. Men finns det också begränsningar i tråd myograph systemet. Ex vivo tråd myograph experimentet är bara kunna mäta isometrisk vasocontractility, men det bör oftast kombineras med andra mätningar för komplex analys av fartyget.
Sammanfattningsvis beskrivit vi en metod för mätning av isomera kontraktilitet i mus mesenteriala artären med hjälp av ett multi wire myograph system. Denna metod kan användas för att bedöma funktionerna i vaskulär glatt muskulatur och att skärmen muskelavslappnande medel av glatt muskulatur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Vi tackar Dr. Wei Qi He (Soochow universitet, Suzhou, Kina) och Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi'an, Kina) för tekniskt bistånd. Detta arbete fick stöd av den nationella naturvetenskap Foundation i Kina (Grant 31272311, 81373295 och 81473420) och de projekt finansierat av prioriterade akademiska Program utveckling av Jiangsu högskolorna (Grant nr. ysxk-2016).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats. Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).
- Mulvany, M. J., Nyborg, N. An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats. British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).
- Mulvany, M. J. Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).
- Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).
- Michael, S. K., et al. High blood pressure arising from a defect in vascular function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).
- Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).
- del Campo, L., Ferrer, M. Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , Springer. New York. (2015).
- Fisher, S. A. Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function. Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).
- Crowley, S. D., et al. Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system. The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).
- Qiao, Y. N., et al. Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure. The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).
- He, W. Q., et al. Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).
- Yang, G. M., et al. Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant. Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).
- Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery. Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).
- Kearney, P. M., et al. Global burden of hypertension: analysis of worldwide data. The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).
- Good, N. E., et al. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).
