Summary
Ledningen myograph teknikken brukes til å undersøke vaskulær glatt muskel funksjoner og skjermen nye stoffer. Vi rapporterer en detaljert protokoll for å måle den isometrisk contractility av musen hvem arterien og screening nye lempelse av vaskulær glatt muskel.
Abstract
Ledningen myograph teknikken brukes til å vurdere contractility av vaskulær glatte musklene i respons til depolarization, GPCR agonister/hemmere og narkotika. Det er mye brukt i mange studier på fysiologiske funksjoner vaskulær glatt muskel, patogenesen av vascular sykdommer som hypertensjon og utviklingen av glatt muskelavslappende medikamenter. Musen er en mye brukt modell dyr med et stort utvalg av sykdom modeller og genetisk endret stammer. Vi innført denne metoden for å måle isometrisk sammentrekning av musen hvem arterien i detalj. Et 1.4 mm segment av musen hvem motstand arterien ble isolert og montert på en myograph kammer ved å sende to stål ledninger gjennom sin lumen. Etter balanse og normalisering skritt, fartøy segmentet var kraftig av en høy-K+ løsning to ganger før sammentrekning analysen. Eksempel av anvendelsen av denne metoden i utviklingen målt vi muskelavslappende effekten av en roman naturlig stoff, neoliensinine, isolert fra en kinesisk urt, embryo av lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) på musen hvem arteriene. Fartøyet segmentene montert på myograph kammeret ble stimulert med en høy-K+ løsning. Da force spenningen nådde en stabil vedvarende fase, ble kumulative doser av neoliensinine lagt til kammeret. Vi fant at neoliensinine hadde en doseavhengig muskelavslappende effekt på glatt muskel sammentrekning, dermed antyder at det bærer potensielle aktivitet mot hypertensjon. Fartøyet segmentet kan overleve minst 4 timer etter montering og opprettholde contractility indusert av høy-K+ løsningen for mange ganger, vi foreslå som kan i tillegg wire myograph systemet brukes til den tidkrevende prosessen med narkotikarelaterte screening.
Introduction
Små fartøy myograph systemet brukes her var for å måle den isometrisk kontraksjon av liten motstand med interne diameter spenner 100-400 µm. isolert små båter (ca 2 mm lang) er satt inn ved to 40-µm diameter ledninger og ble deretter montert på mikrometer-side og svinger-side kjever sekvensielt. Denne myograph teknikken ble først foreslått i 19721 og deretter utviklet av Mulvany og hans kolleger2,3,4,5,6. Det er nå en moden teknikk med stabil utstyr, lett ytelse og en standard normalisering prosedyre7,8,9. Vi utnyttet denne metoden med noen modifikasjoner for målene på musen hvem arterien.
Vaskulær glatt muskel linjer veggene i nesten alle blodkar. Deres grunnleggende funksjon er å generere styrker gjennom sammentrekning i respons på ulike stimuli. Den normale contractility av vaskulær glatt muskel er viktig for blodtrykk regulering og ernæring supplere10. Unormal regulering av blodtrykk resulterer i en rekke sykdommer, som høyt blodtrykk, hjertesvikt og Ischemi. Flere studier har antydet at unormal blodtrykk er alltid forbundet med dysfunksjonelle vaskulær glatt muskel, contractility,7,,11,,12,,13. Metoden myograph gjør det mulig for undersøkelse av isometrisk contractility av musen fartøy av ulike stimuli inkludert vasoconstrictors, hemmere og narkotika. Vellykket målinger av sammentrekning vil hjelpe oss å forstå mekanismene blodtrykk vedlikehold og patogenesen av vaskulær glatt muskel-assosiert sykdommer og å utforske romanen terapeutiske metoder.
Mange kinesiske urter har vært mye brukt i klinisk behandling av vascular sykdommer; men forbli deres effektive ingredienser vanligvis ukjent. Dermed er isolasjon og identifikasjon av effektive komponenter svært viktig for utviklingen av romanen narkotika. Flere wire myograph-teknologien gir en enkel tilnærming for screening aktive komponentene i urter. Vi har rapportert flere studier ved hjelp av små fartøy myograph systemet for å undersøke musen hvem arterien sammentrekning og identifisert naturlige forbindelser med anti-hypertensjon aktivitet12,13,14. Her beskriver vi den detaljerte protokoll for metoden myograph og vurdere muskelavslappende effekten av neoliensinine isolert fra embryo av lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyr manipulasjoner ble godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) av modellen dyr Research Center Nanjing University.
1. løsning forberedelse
- Forberede HEPES-Tyrode løsning (H-T) 137.0 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7.4.
- Forberede HEPES-Tyrode løsning uten kalsium (Ca2 +-gratis H-T) 140.6 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7.4.
- Forberede HEPES-Tyrode løsning ved hjelp av 124 mM KCl (høy K+) bruke 15.7 mM NaCl, 124.0 mM KCl, 1,8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5,6 mM D-glukose og 10 mM HEPES, pH 7.3-7.4.
2. eksperiment forberedelse
- Forvarm H-T og høy-K+ løsninger ved hjelp av en 37 ° C vannbad.
- Slå på myograph system, data oppkjøpet maskinvare og datamaskinen.
- Omhyggelig fylle alle myograph kamre med 5 mL H-T hver.
- Fylle to Petri retter med 20 mL 4 ° C H-T og Ca2 +-gratis H-T løsninger, henholdsvis, og lagre på is.
- Fyll en 10 cm belagt Petriskål med 20 mL H-T, og holde det ved romtemperatur.
3. musen hvem arterien disseksjon
- Euthanize en 8-12 uke gamle C57BL/6J kvinne eller mann mus av cervical forvridning. PIN musen med buken grossist.
- Fukt magen med 70% etanol. Deretter kuttet huden med saks langs ventrale midtlinjen fra lysken og gjøre incisions fra starten av den første snittet nedover til bena på begge sider. Rykk huden tilbake på begge sider; gjøre lignende incisions åpne peritoneum.
- Med saks, spiserøret, kolon og andre bindevev å fullstendig isolere mage-tarmkanalen med fôring blodkar fra kroppen.
- Med tang, flytte det isolert segmentet til parabolen med kulden H-T forberedt i trinn 2.4 og forsiktig rense vevet i H-T løsning flere ganger å vaske av blod.
- Overføre isolert segment til belagt Petriskål forberedt i trinn 2.5 og utføre hvem arterien disseksjon ved romtemperatur.
- Jevne ut mage, jejunum, ileum og caecum med klokken, og feste mage og caecum på venstre og høyre side, henholdsvis.
- Strekke hvem blodkar sengen og fikse tarmen med pinner å avsløre dissekert hvem arteriene.
Merk: Under disse forholdene, arteries er på årer. - Slå på lyskilden overføring av stereoskopisk mikroskop, og dissekere arterier under mikroskopet. Kontroller at hele vevet er nedsenket i løsningen.
- Klemme liggende under adipose vev rundt arteriene med tang og isolere arteries ved å kutte av alle bindevev med disseksjon saks. Unngå skader blodårene.
4. arteriell montering
- Overføre og dyppe hvem arterien treet i den kalde Ca2 +-ledig H-T løsning (forberedt i trinn 2.4) av clamping overflødig arteriene med tang.
- Avskåret en 1.4 mm del av arteria proksimale intestinal veggen av en hvem arcade, og bruker to tang til å åpne begge sider av dette arterien segmentet nøye.
- Forberede to deler av rustfritt stål wire 2,5 cm i lengde, og plassere dem i samme parabolen.
- Forsiktig klemme en ende av arteria ved hjelp av pinsett, og nøye inn to ledninger lumen av arterien ettall med hjelp av en annen tang. Kontroller at ledninger holdes rett og ikke berør endotelet.
- Bruker to tang, klemme to stål ledninger utenfor gjengede fartøyet samtidig, og nøye overføre fartøyet fra Petriskål til en myograph kammer tidligere fylt med H-T stoppløsningen (trinn 2.3).
- Skru jaws fra hverandre for å gjøre plass for montering. Klemme begge sider av en av to innsatte ledninger med to tang, og plasser fartøyet i kjeven gap (figur 1A).
- Pakk begge sider av festet kabelen rundt skruene i kjeven koblet til mikrometer (figur 1B).
- Fastsette venstre skruen ved å vri med klokken. Rett ut ledningen med høyre tang og fikse høyre skruen ved å vri med klokken (figur 1 c). Kontroller at fartøyet er alltid i kjeven gapet, men ikke røre kjeven for å unngå skade.
- Lukk to kjever bruker mikrometer (figur 1 d). Kontroller at to jaws er nær nok, men at de ikke berører hverandre og at unfixed ledningen er på fast ledningen.
- Bruke høyre tang, nøye brett skrudde ledningen på hjørnet av kjeven koblet tvinge svinger, og bryte den klokken rundt høyre skruen (figur 1E). Deretter fest skruen. Gjenta dette trinnet til venstre på ledningen og fastsette venstre skruen (figur 1F).
- Flytte kjever litt fra hverandre ved nøye roterende mikrometer (figur 1G). Unngå å strekke fartøyet. Bruk tang til å flytte ledningen på mikrometer side mot horisontalplanet av ledningen på svinger siden. Nøye rotere mikrometer slik at gapet mellom to kjever rommer bare to ledninger.
- Gjenta 4.2-4.11 for å montere arterier på andre kamrene. Koble alle avdelingene på utstyret, dekke chambers, knytte 100% oksygentilførsel og en temperatur probe og begynner å varmes til 37 ° C. Åpne den kartlegging programvaren og trykk Start -knappen i vinduet Diagramvisningen å starte innspillingen.
- Equilibrate i ca 20 min.
5. normalisering
Merk: For å standardisere eksperimentelle forhold og hente pålitelig fysiologiske respons av fartøy, en normalisering prosedyre er nødvendig15. Ifølge relasjonen mellom den aktive kraft og indre omkretsen av fartøyet har wire myograph systemet et standard normalisering program å vurdere de monterte fartøyet5,8, interne omkrets (IC) 9. Kort, beregne IC (µm), lese mikrometer og inndataverdi som X-verdien og svingeren utgang kraft, dvs. hviler vegg spenning (mN/mm), som Y-verdien. Programmet vil returnere en montert kurve av (X, Y) og beregne IC tilsvarer et transmuralt Trykk på 100 mmHg (IC100). Fartøyet er satt til normalisert indre omkretsen (IC1) når den aktive responsen er maksimal.
- Angi styrker til null for alle kanaler på enheten, og equilibrate for en annen 1-2 min.
- Normalisering innstillingene fra den "DMT-menyenog sett opp parameterne som følger:
Okularet kalibrering (mm/div): 0.36; Målrette Press (kPa): 13,3; KI1/IC100: 0,9; Online gjennomsnittlig tid (sekunder): 2; Forsinke tid (sekunder): 60. Klikk OK for å lukke vinduet DMT normalisering innstillinger . - Velg kanalen rundt DMT-menyen for å åpne et DMT normalisering vindu for tilsvarende kanalen. Angi de konstante verdiene i vinduet som følger: vev end-meningene a1: 0.1; Vev end-meningene a2: 4; Tråddiameter (µm): 40. Vinduet viser den beregnede fartøy lengden som 1,40 mm.
- Les mikrometer av aktuelle vev chamber. Skrive inn verdien i boksen mikrometer lesing , og klikk Legg til poenget . Denne verdien er den opprinnelige verdien av X (X0). Etter 60 s tidsforsinkelse viser vinduet kraften og effektiv Press (ERTP) tilsvarer mikrometer verdien. Samtidig, blir boksen mikrometer lesing aktiv.
- Strekke fartøyet blir normalisert ved å dreie mikrometer moturs. Angi mikrometer verdien i boksen mikrometer lesing , og klikk Legg til poenget . Venter tidsforsinkelse 60 s igjen.
- Gjenta trinn 5.5, fortsette å strekke fartøyet, og legge mikrometer verdier til vinduet viser verdien av "mikrometer X1", som er innstillingen beregnet mikrometer pålagt å strekke fartøyet sin IC1.
- Angi mikrometer å X1 verdi.
Merk: Normalisert spenningen er vanligvis 1-2 mN.
6. arterien sammentrekning opptak
Merk: Alle løsningene, inkludert T-T og høy-K+ løsning brukes i denne delen, ble utarbeidet i trinn 2.1.
- Etter normalisering, equilibrate fartøyet i kammeret i 15-20 min.
Merk: Dette er ikke nødvendig å endre løsningen i dette trinnet. - Utfordre fartøyet med høy-K+ løsning to ganger.
- For å utfordre fartøyet, erstatte H-T løsning med 5 mL High-K+ å indusere sammentrekning i 10 min, etterfulgt av vask med 5 mL H-T 3 - 4 ganger.
Merk: Typisk sammentrekning har en maksimal kraft over 3 mN og en konstant vedvarende kraft rundt 2,5 mN12. Hvis den første utfordringen genererer en maksimal styrke under 2,5 mN, vedvarende kraft avtar med tid, eller den andre utfordringen genererer en mye lavere styrke enn første gang dosen, båten forkastes og vil ikke bli brukt for videre etterforskning.
- For å utfordre fartøyet, erstatte H-T løsning med 5 mL High-K+ å indusere sammentrekning i 10 min, etterfulgt av vask med 5 mL H-T 3 - 4 ganger.
- Utfordre fartøyet med 5 mL High-K+ å indusere sammentrekning. Etter 5 min, legger du til 0,5 µL neoliensinine lagerløsning (10 mM i DMSO)14 i kammeret slappe av fartøyet i en siste konsentrasjon av 1 µM neoliensinine.
- Når den er stabil (dette tar vanligvis flere minutter), legge til en annen 0,5 µL neoliensinine lager løsning i kammeret å øke konsentrasjonen til 2 µM. Legg 1 µL av lager løsningen hver gang for å øke konsentrasjonen til 4, 6, 8 og 10 µM generere t Han dose-respons kurve.
Merk: Den lager og jobbe-konsentrasjonene varierer mellom narkotika.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi målt i isometrisk contractility av musen hvem subclavia bruker flere wire myograph system og vurdert muskelavslappende effekten av neoliensinine renset fra embryo av lotus frø (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14. musen hvem motstand arterien ble isolert, renset bindevev og skåret i 1.4 mm segmenter. Arterie segmentet ble satt inn av to stål ledninger i Ca2 +-gratis H-T løsningen i en Petriskål, og deretter segmentet var montert på to kjevene av en myograph kammer (figur 2A). Etter montering segmentet, var det to telegrammer justert for å være parallell, nær men ikke berøre hverandre (figur 2B). Før kraft måling, fartøy segmentet var normalisert og kraftig to ganger av høy-K+ løsning for å stabilisere fartøyet. Under normalisering prosedyren, fartøyet var strukket flere ganger fram verdien av IC100, og hver strekk syklus med en robust sammentrekning, rask avslapning og en force vedlikehold i 60 s (Figur 3). Sammentrekning av vaskulær glatt muskel indusert av høy-K+ løsning vanligvis viste to faser, en robust fase og en vedvarende fase (Figur 3). Fartøyet segmentet kan brukes for ytterligere eksperimenter hvis høy-K+-vakte sammentrekning vises normalt og reproduserbar. En typisk måling med neoliensinine er representert i Figur 4. Når force spenningen indusert av høy-K+ nådd en vedvarende fase, lagt vi kumulative doser av neoliensinine (1, 2, 4, 6, 8 og 10 µM) gjennom hullene i kammeret dekselet. Som doser økt, redusert kraften i en doseavhengig måte. Resultatet viser at neoliensinine er et vaskulær glatt muskel muskelavslappende stoff som potensielt fungerer som en kandidat anti-hypertensjon narkotika14.
Figur 1: en skjematisk av arteriell montering prosedyren. De blå linjene representerer ledningene, og den røde rektangelet representerer arterien. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: en mus hvem arterien segmentet montert på myograph kammeret. (A) en mus hvem arterien segmentet montert på to jaws bruker to stål ledninger. Den hvite linjalen = 2 mm. (B) A mikroskopiske bilde av montert musen hvem arterien segmentet i panelet (A). Svart linje = 0,5 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: Representant opprinnelige tracings viser normalisering prosedyre og potensiering av høy-K+ løsning. Etter andre høy-K+ stimulering, vanlig eksperimentet kan utføres. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: representant sporing av musen hvem arterien som er kontrahert ved høy-K + løsning og så avslappet ved å legge akkumulative doser neoliensinine. Som doser økt, kraften redusert i en doseavhengig måte Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hypertensjon er en utbredt folkehelsen utfordring pga alvorlige komplikasjoner, inkludert hjerte og nyre sykdommer16. Forstå patogenesen av hypertensjon og utforske mer Skjelettmuskel narkotika har blitt en presserende oppgave i dette feltet. Blodtrykk genereres og vedlikeholdes av eksterne motstand av sirkulasjon. Ifølge Poiseuilles lov, relativt liten arteriene generere en stor andel av sirkulasjons motstand og tjene som den dominerende produsenten av blodtrykk3,10. Dermed er måling av små-motstand arterier i stedet for store arterier mer egnet for studier av blodtrykket. Ledningen myograph teknologien er en av de beste modalitetene å studere den fysiologiske funksjoner av liten motstand arterier og patogenesen ved vascular sykdommer.
Små fartøy wire myograph systemet har blitt godt dokumentert i andre rapporter og ble brukt til å måle sammentrekning av rotte hvem arterier8 og mus arteriene som aorta9. Dra nytte av genetisk manipulasjon, en rekke sykdom modeller og narkotika screening modeller, musen har blitt en utbredt modell dyr på mange felt. Derfor her, gitt vi en endret protokoll til denne metoden for måling av musen hvem arterien sammentrekning. I denne rapporten målt vi har contractility av musen hvem arterier modifikasjoner av grunnleggende buffere og montering trinn. Mange studier på ex vivo vasocontractility måler brukt løsninger som inneholder NaHCO3, for eksempel Krebs løsninger, for å etterligne fysiologisk saltløsning. Men må slike buffere CO2 justere pH-verdi i målingen, resulterer i produksjon av CaCO3. Vi valgte H-T løsning som buffer system og fant det fungerte bra. Siden temperatur har liten effekt påde pKverdien HEPES , pH verdien av løsningen justeres beleilig ved romtemperatur og er uendret på 37 ° C- 17. I tillegg bruker vi Ca2 +-gratis H-T løsning når guiding ledningene gjennom fartøyet lumen for å unngå fartøyet innsnevring av Ca2 +. En annen endring i denne protokollen er montering prosedyren. Noen rapporter8,9 og enheten manuell5 anbefaler guiding andre ledningen etter bestemmer første ledningen på kjeven. Vi finner det fungerer bedre når to ledninger blir veiledet gjennom fartøyet lumen før montering fartøyet fordi denne metoden kan redusere mulig skade svingeren på grunn av begrenset kammer plassen.
Til tross for den høye reproduserbarhet av denne metoden, bør vi betaler mer oppmerksomhet til noen viktige trinn. Det viktigste er å unngå skader fartøy forårsaket av tang og saks. Under fartøyet disseksjon, bør operatøren bruke pinsett forsiktig når strekker fettvev og bruke saksen nøye når du bindevev. I tillegg clamping fartøyet for fiksering bør gjøres forsiktig og skade endotelet bør unngås når guiding ledningene fordi endotelet-skadet fartøyet vil gi opphav til unormal svar, f.eks. , skadet fartøyet viser tydelig force spenning etter stimulering med acetylkolin, mens normale fartøyet viser en muskelavslappende effekt. Forklaring på dette fenomenet er at skadet endotelet ikke kan produsere nitrogenoksid riktig. Merk at i forsøket med endotelet-relaterte sammentrekning, bør statusen endotelet testes før kraft måling. I tillegg bør vi også nøye montere fartøyet på jaws fordi svingeren lett skades hvis brukt med en vanskelig kraft. Til slutt, vi vanligvis ikke bruker en konstant økningsverdien på mikrometer når normalisering. Verdien intervallet er 30 eller 20 µm først og 10 µm etter effektive trykket når 11-12 kPa. Denne metoden kan kan redusere normalisering tid og overstrekking, og dermed demping fartøyet skade.
Selv om våre undersøkelser fokusert på musen hvem arterier, kan denne metoden også brukes for aorta, bronchi, og andre små båter inkludert nyre, hjernen og pulmonary arterier. Siden dette systemet har fire kanaler, er det praktisk for måling av fire parallelle prøver samtidig. I tillegg en hel hvem vaskulær seng kan gi minst fire arterien segmenter, det er derfor veldig lett å designe ulike eksperimentelle grupper. Vår erfaring hvert arterien segment overlever minst 4 timer og vedlikeholder gode Svar å høy-K+ løsningen over minst 6 repetisjoner. Denne egenskapen er svært nyttig for målinger av effekten av flere tillegg av ulike kandidat stoffer. Men er det også begrensninger på ledningen myograph systemet. Ex vivo wire myograph eksperimentet er bare kjøpedyktig mål isometrisk vasocontractility, men det bør vanligvis kombineres med andre mål for analyse av fartøyet.
I sammendraget beskrev vi en metode for måling av isomere contractility i musen hvem arterien bruker flere wire myograph system. Denne metoden kan brukes til å vurdere funksjonene vaskulær glatt muskel og skjermen lempelse av den glatte muskulaturen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi takker Dr. Wei Qi He (Soochow University, Suzhou, Kina) og Dr. Yan Ning Qiao (Shaanxi Normal University, Xi'an, Kina) for teknisk assistanse. Dette arbeidet ble støttet av den nasjonale Natural Science Foundation i Kina (Grant 31272311, 81373295 og 81473420) og prosjektet finansiert av den prioritet faglig Program utvikling av Jiangsu høgskolerådet (Grant nr. ysxk-2016).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats. Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).
- Mulvany, M. J., Nyborg, N. An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats. British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).
- Mulvany, M. J. Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).
- Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).
- Michael, S. K., et al. High blood pressure arising from a defect in vascular function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).
- Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).
- del Campo, L., Ferrer, M. Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , Springer. New York. (2015).
- Fisher, S. A. Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function. Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).
- Crowley, S. D., et al. Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system. The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).
- Qiao, Y. N., et al. Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure. The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).
- He, W. Q., et al. Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).
- Yang, G. M., et al. Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant. Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).
- Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery. Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).
- Kearney, P. M., et al. Global burden of hypertension: analysis of worldwide data. The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).
- Good, N. E., et al. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).
