Komplement komponenten C1q är en Pro-inflammatorisk molekyl som uttrycks högt i den vävnads mikromiljö som kan interagera med den extracellulära matrisen. Här beskriver vi en metod för att testa hur C1q bunden till hyaluronsyra påverkar cellernas vidhäftning.
Det har blivit alltmer visat att tumören mikromiljö spelar en aktiv roll i neoplasi tillväxt och metastaser. Genom olika vägar, kan tumör celler effektivt rekrytera stromal, immun och endotelceller genom att utsöndra stimulatoriska faktorer, chemokiner och cytokiner. I sin tur kan dessa celler ändra signaleringsegenskaper för mikromiljön genom att frigöra tillväxt främjande signaler, metaboliter och extracellulära matrix komponenter för att upprätthålla hög spridning och metastaserande kompetens. I detta sammanhang, vi identifierar att komplement komponenten C1q, högt uttryckt lokalt av en rad mänskliga maligna tumörer, på interagerar med extracellulär matrix hyaluronsyra, påverkar starkt beteendet hos primära celler isolerade från mänsklig tumör Exemplar. Här beskriver vi en metod för att testa hur C1q bunden till hyaluronsyra (HA) påverkar tumör cellernas vidhäftning, underliggande det faktum att de biologiska egenskaperna hos viktiga komponenter i den extracellulära matrisen (i detta fall HA) kan formas av bioaktiva signaler mot tumör Progression.
Tumören mikromiljö (TME) påverkar cancer utveckling och progression eftersom det kan ge en tillåtande nisch för cell överlevnad, tillväxt och invasion. Identifieringen av nya nyckel aktörer i TME kan vara till nytta för upptäckten av nya molekyl ära verktyg för mål terapi. TME innehåller ett komplext och dynamiskt nätverk av icke-maligna celler, såsom endotelceller, fibroblaster och celler i immun systemet, inbäddade i den omgivande extracellulära matrix (ECM) komponenter inklusive kollagener, lamininer, fibronectiner, proteoglykaner och hyaluronans. Både tumör och icke-tumör celler syntetisera och utsöndra ECM komponenter tillsammans med cytokiner, chemokines, tillväxtfaktorer och inflammatoriska och Matrix remodeling enzymer som totalt förändrar den fysiska, kemiska och signalering egenskaper TME. Bland dessa bestånds delar, hyaluronsyra (HA) har vuxit fram för att utöva en avgörande roll i tumör bio Logi. Trots sin enkla kemiska sammansättning, HA, tillsammans med dess HA-bindande molekyler (hyaladherins), kan modulera angiogenes, immun systemet lyhördhet och ECM remodeling i en storlek och koncentrations beroende sätt1.
Komplement (C) systemet är också en del av den lokala TME, som nyligen har fått ökad uppmärksamhet. C-systemet omfattar en uppsättning lösliga och membran-bundna proteiner som deltar i den första försvars linjen mot icke-Self-celler, oönskade värd element och patogener. Funktionellt, förbinder C de två effektor armarna av medfödda och adaptiva system för att främja antingen direkt cell dödande eller montering av en inflammatorisk reaktion2. C aktivering kan undertrycka tumör tillväxt, genom att förstöra cancer celler eller hämma deras utväxt, men det har blivit allt tydligare att det kan ha en tumör-främjande verksamhet genom att upprätthålla kronisk inflammation, främja inrättandet av en immunosuppressiv miljö, inducera angiogenes och aktivera cancerrelaterade signal vägar3. I detta sammanhang, C1q, den första erkännande molekylen av den klassiska vägen av C-systemet har uppstått för att utöva viktiga funktioner i tumören mikromiljö oberoende av C aktivering4. C1q har visat sig uttryckas lokalt av en rad mänskliga maligna tumörer, där det kan gynna cancer cell adhesion, migration och proliferation utöver angiogenes och metastaser5. Intressant C1q interagerar med en viktig bestånds del i ECM som HA.
Vi utvecklade en teknik för att isolera de primära cancer cellerna från tumör massan. Dessutom skapade vi matrisen, som kan stimulera tumör mikromiljö, särskilt samspelet mellan C1q och hög molekyl vikt hyaluronsyra. C1q bunden till HA kunde inducera vidhäftning av tumör cellerna.
Vi beskriver en enkel metod för att undersöka hur komplement komponenten C1q, som interagerar med hyaluronsyra, kan modulera beteendet hos primära celler isolerade från mänskliga tumör vävnader. Både HA och C1q är rikligt närvarande i vävnaden mikromiljö både under fysiologiska och sjukdoms tillstånd, deltar i flera cell biologiska processer. Till exempel, C1q har visat sig vara närvarande i mikromiljön av moderkakan där det gynnar extravillous trofoblaster invasion av moderns decidua under placentation<…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar Ivan Donati för att ge av HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (Institutionen för gynekologi av IRCCS “Burlo Garofolo”, Trieste, Italien) och Andrea Romano (operativa kliniska enheten för anatomi och patologisk histologi, Cattinara Hospital, Trieste, Italien ) för insamling av vävnads prov. Vi tackar också Nicolò Morosini för hjälp i video förberedelse och Alex Coppola, rösten. Detta arbete stöddes av bidrag från Institutet för mödra-och Barna vård, IRCCS “Burlo Garofolo”, Trieste, Italien (RC20/16) och Fondazione Cassa di Risparmio Trieste till R. bulla.
100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
Flask for cell culture | Corning | 430639 | Sterile, vented |
Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone |
High molecular weight hyaluronic acid | Kind gift by Prof. Ivan Donati | ||
Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplemented with EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), and 1% penicillin–streptomycin (Sigma-Aldrich) |
Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |