Summary
Le protocole de bas prix consistant en analyse de l’empreinte et la pendaison boîte test après que retenue pour le stress est utile pour évaluer les troubles du mouvement du modèle murin.
Abstract
Trouble de la démarche est fréquemment observée chez les patients atteints de troubles de la motricité. Dans les modèles de souris utilisées pour les troubles du mouvement, analyse de la démarche est un test comportemental important pour déterminer si les souris imitent les symptômes des patients. Déficits moteurs sont souvent induites par le stress, quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins. Par conséquent, analyse de démarche suivie par le stress de chargement serait une méthode sensible pour évaluer le phénotype moteur dans des modèles murins. Toutefois, les chercheurs font face à l’exigence d’un appareil coûteux pour obtenir automatiquement les résultats quantitatifs de l’analyse de la démarche. Pour le stress, stress par des méthodes simples de chargement sans appareils coûteux requis pour un choc électrique et forcé en cours d’exécution est souhaitable. Par conséquent, nous introduisons un protocole simple et peu coûteux consistant en analyse d’empreinte avec du papier et d’encre, pendaison boîte test pour évaluer la fonction motrice, et chargement de stress défini par retenue avec un tube conique. Les déficits moteurs de souris ont été détectés avec succès par le présent protocole.
Introduction
Troubles de la motricité sont définies comme les perturbations du système nerveux montrant un excès ou un manque de mouvements volontaires ou automatique1. En particulier, trouble de la démarche est souvent documenté chez les patients atteints de troubles de circulation pour2,3,4. Analyse de la démarche est donc un test comportemental adapté pour la validation des modèles animaux de dyskinésies. Chez les souris, les allures automatisé analyses ont été réalisées pour la marche à vitesse naturelle5 et à une vitesse réglable par tapis roulant6,7. Ces analyses fournissent automatiquement les résultats quantitatifs de la démarche. Une autre méthode pour détecter le trouble de la démarche est appelée analyse de l’empreinte. Après marquage le fond des pieds avec de l’encre, souris marchent sur papier, et les empreintes sont analysés. Au départ, Vaseline et en poudre de charbon de bois ont été utilisées pour visualiser l' empreinte8et puis ont été remplacés par l’encre le polygraphe papier9 et révélateurs photographiques sur papier photographique10. Une méthode moins coûteuse et moins toxique à l’aide d’encre et papier que les autres méthodes reste à ce jour11. Analyse de l’empreinte est moins cher par rapport à l’analyse automatisée5,6,7 et serait utile pour évaluer les troubles du mouvement chez les modèles murins pour les chercheurs sans fonds de recherche abondante .
La pendaison épreuve de boîte est une sorte de quatre tests de pendaison de branche à l’aide de fil cage couvercle12 et wire mesh écran13. La boîte est un appareil avec couvercle pivotant treillis sur le dessus de la boîte le long d’une barre centrale. En plus de l’analyse de la démarche, le test est peu coûteuse et facilement possible. Par conséquent, nous avons effectué la pendaison boîte test pour évaluer la force de préhension et l’équilibre, de plus à l’analyse d’empreinte de pas dans le présent protocole.
Stress induit des symptômes de troubles de circulation14,15. Déficits moteurs sont souvent induites par plusieurs stress chroniques, même quand aucun phénotype moteur spontanée n’est observée dans les modèles murins d’un mouvement trouble16,17,18. Retenue est l’une des méthodes couramment utilisées pour le chargement chez la souris, parce que l’animal n’est pas physiquement endommagé19 et le coût est inférieur comparé avec d’autres méthodes telles que l’électrocution avec des appareils dédiés de stress et forcé en cours d’exécution avec l’utilisation d’un tapis roulant. Retenue par un tube, qui est effectué par une souris dans un tube conique troués 50 mL de confinement, est plus facile que d’autres méthodes telles que fil mesh passoire, branche enregistrée et habillage d’animaux avec de la gaze (révisé20). Dans cet article, nous résumons les protocoles de l’empreinte de l’analyse et la boîte de la pendaison d’essai après retenue par un tube. Ce protocole permettrait d’utiliser des modèles de souris de dyskinésies sans phénotype moteur spontané.
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Protocol
Toutes les expériences sur des animaux ont été menées de manière humaine. Les institutionnels Animal Experiment Comité de Jichi Medical University a approuvé l’étude. L’étude a été menée conformément au règlement institutionnel pour l’expérimentation animale et les fondamentaux de la directive pour bonne conduite of Animal Experiment et des activités connexes dans les établissements de recherche universitaires sous la juridiction du MEXT japonais. Les souris utilisées dans le présent protocole ont été décrites précédemment21.
1. accrocher la boîte Test
- Noter le poids de chaque souris. Marquer la queue par marquage stylo pour discrimination individuel (p. ex.., une ligne double lignes et lignes triples).
Remarque : Courbes de croissance sont utilisés pour un indice de l’état de santé général22. - Placez les souris dans la salle d’expérience au moins 30 min avant le test comportemental. Définir la zone de la pendaison, qui se compose d’une caisse claire (25 x 25 x., 40 cm3) avec un couvercle rotatif maille sur la partie supérieure (Figure 1). Le couvercle du treillis peut être tourné le long d’une barre centrale de sorte que le dessus soit inversée de 180 degrés.
- Mettre une souris dans le centre du couvercle du treillis. Tourner délicatement le couvercle du treillis côté vers le bas.
- Mesurer la chute de latence (temps de suspension) de la souris du couvercle du treillis.
Remarque : Si la souris n’est pas moins de 5 min, enregistrer le temps de latence que 5 min. - Retourner la souris à la cage. Nettoyez la boîte accrochante avec l’éthanol à 70 % après chaque test.
2. analyse de l’empreinte
Remarque : Après la boîte accrochante test, effectuer l’analyse de l’empreinte.
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Mettre en place le Piste (Figure 2 a).
- Couper un morceau de papier blanc (29,7 cm x 42 cm x 0,09 mm) longitudinalement en trois longueurs d’égale largeur. Posez un morceau de papier blanc (9,9 cm x 42 cm) sur la table.
- Mettre les boîtes de but sombre à l’extrémité distale du papier. Autres boîtes (à peu près la même longueur que celle du papier) avec les murs des deux côtés de la piste, empêchant la sortie des souris.
- Mis d’encre noire et encre rouge en pétri distinct (35 mm de diamètre).
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Session de formation.
Remarque : Effectuez la séance d’entraînement qu’à l’âge de 4 semaines.- Mettre une souris sur l’extrémité proximale du papier (Face la tête vers la zone de but). Laissez la souris à pied de l’extrémité proximale à la zone de but. Supprimer la souris de la zone de but. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris pour les boîtes de but par doigt.
- Maintenez le pointeur de la souris en agrippant la peau entre le pouce et l’index afin de limiter le mouvement des membres antérieurs. Ensuite, saisissez le dos et la queue entre la sphère du pouce et les autres doigts afin de limiter la circulation des membres postérieurs.
Remarque : Tenue insuffisante d’une souris se traduit par des taches d’encre sur les vêtements. - Plongez au fond des pattes antérieures à l’encre rouge et la partie inférieure des membres postérieurs à l’encre noire. Immédiatement, placez la souris sur l’extrémité proximale du papier (Face la tête vers la zone de but). Laissez la souris à pied de l’extrémité proximale à la zone de but. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris pour les boîtes de but par doigt.
- Supprimer la souris de la zone de but. Aller à la séance d’examen.
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Séance d’essais.
- Issue de la session de formation, mis en place la piste d’empreintes avec un nouveau morceau coupé du livre blanc.
- Maintenez le pointeur de la souris en agrippant la peau entre le pouce et l’index afin de limiter le mouvement des membres antérieurs. Ensuite, saisissez le dos et la queue entre la sphère du pouce et les autres doigts afin de limiter la circulation des membres postérieurs.
- Plongez au fond des pattes antérieures à l’encre rouge et la partie inférieure des membres postérieurs à l’encre noire. Immédiatement, placez la souris sur l’extrémité proximale du papier. Laissez la souris à pied de l’extrémité proximale à la zone de but.
Remarque : Parce que les souris préfèrent l’obscurité, marcher devient plus stable que la souris s’approche la zone sombre objectif. Si la souris s’arrête sur le papier, poussez doucement la souris pour les boîtes de but par doigt. Alors, si les empreintes fiables ne sont pas obtenus pour l’analyse (voir étape 2,4. Analyse des empreintes pour les détails) comme la souris s’est arrêté, réessaie la séance d’examen. - Retourner la souris à la cage dans la zone de but. Nettoyer la zone de but avec l’éthanol à 70 % après chaque séance d’essais. Sécher le papier imprimé à pied.
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Analyse des empreintes
- Trois mesures de chaque paramètre ("Stridez" de longueur des membres antérieurs et postérieurs, avant et arrière largeurs de base, se chevauchent entre les membres antérieurs et postérieurs, Figure 2 b) avec une règle de papier imprimés à pied.
Remarque : Parce que les empreintes des extrémités proximales et distales souvent montrent des variations importantes en raison de l’arrêt ou en cours d’exécution, choisissent la partie avec un modèle de démarche constante d’empreintes. La partie médiane du pied-imprimé papier sera généralement appropriée pour l’analyse.- Pour la longueur des foulées, mesurer les distances entre les mêmes parties de la patte (paw pad ou orteil).
- Pour la largeur de base avant, tracer une ligne entre consécutives empreintes avant droit (ou gauche). Ensuite, mesurez la longueur de la ligne verticale de l’héliplate-forme de l’empreinte avant gauche (ou droite) jusqu'à la ligne tracée entre les empreintes de pas droit (ou gauche).
- Pour la largeur de la base arrière, tracer une ligne entre consécutives empreintes postérieurs droit (ou gauche). Ensuite, mesurez la longueur de la ligne verticale de l’héliplate-forme de l’empreinte postérieur gauche (ou droite) jusqu'à la ligne tracée entre les empreintes de pas droit (ou gauche).
- De chevauchement, mesurez la distance entre l’avant plaquettes de gauche (ou droit) et empreintes de pattes.
- Moyenne des trois mesures pour chaque individu. Utiliser la moyenne individuelle de chaque paramètre pour l’analyse statistique.
- Pour la longueur des foulées, utiliser la moyenne des moyennes individuelles des progrès gauche et droite.
- Pour l’asymétrie de longueur des enjambées, utiliser la valeur absolue de la différence entre les moyennes individuelles du flanc gauche et la longueur de la branche droite.
- Pour l’analyse statistique des autres paramètres (largeur de base avant, la largeur de base arrière et chevauchement), utilisez directement la moyenne individuelle.
- Trois mesures de chaque paramètre ("Stridez" de longueur des membres antérieurs et postérieurs, avant et arrière largeurs de base, se chevauchent entre les membres antérieurs et postérieurs, Figure 2 b) avec une règle de papier imprimés à pied.
3. restraint Stress chargement
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Préparation des Tubes de retenue.
- Faire 16 trous (environ 2 mm de diamètre) dans un tube conique de 50 ml (30 mm de diamètre x 115 mm de longueur) le long des repères de l’échelle (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mL) et l’arrière de chaque échelle marquer en foret carré (Figure 3). Faire un trou à l’extrémité du tube conique 50 mL (environ 5 mm de diamètre) pour la respiration en coupant l’extrémité. Faire un trou (environ 4 mm de diamètre) dans le capuchon du tube pour passer la queue de souris.
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Chargement de stress
- Placer les souris dans la chambre expérimentale.
- Tenir une souris en agrippant la peau entre le pouce et l’index. Entrez la souris dans le tube de retenue de la tête. Passer la queue à travers le trou du bouchon. Fermer le bouchon.
Remarque : Limiter les mouvements des membres antérieurs, car les souris rejettent entrant dans le tube par les membres antérieurs. - Gardez la souris enfermée pendant 2 h sur un bureau à température ambiante. Retirer le tube de retenue de la souris et le retour à la cage.
Remarque : Les tubes de retenue peuvent être réutilisés après un lavage et sec.
4. l’annexe expérimental (Figure 4) :
- Effectuer la pendaison boîte de test et l’analyse de l’empreinte sur le même jour à l’âge de 4 semaines (voir l’étape 1. Test boîte suspendus et l’étape 2. Analyse de l’empreinte pour plus de détails) comme une mesure de base sur toutes les souris avant le regroupement en « groupe de stress » et un « groupe de stress non ».
Remarque : Environ 8-10 souris 2-3 litières peuvent convenir d’utiliser dans une expérience. Analyse de l’empreinte à l’âge de 4 semaines consiste en des séances de formation et de test. - Au hasard de diviser les souris dans un « groupe de stress » et un « groupe de stress non ».
Remarque : Lorsque les souris sont utilisées consistant en plusieurs portées, répartir uniformément même portée dans les deux groupes. Nombre dans chaque groupe est constitué d’environ 4-5 souris. - Appliquer l’effort de retenue au groupe « stress » 6 fois au cours des deux semaines (voir l’étape 3. Stress de contrainte de chargement pour plus de détails).
NOTE : 6 fois de retenue sont appliquées toutes les deux semaines, suivie d’un accrochage case analyse test et empreinte de 6 à 12 semaines d’âge. Ne s’appliquent pas le stress de retenue le jour de l’essai de la pendaison du coffret test et l’analyse de l’empreinte. - Effectuer la pendaison boîte de test et d’analyse de l’empreinte, la séance d’examen le jour même à 6, 8, 10 et 12 semaines d’âge.
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Representative Results
Les souris mâles hétérozygotes de Atp1a3 (Atp1a3+ / −) qui sont le modèle murin pour l’apparition rapide de dystonie parkinsonisme et type sauvage ont été utilisés dans le présent protocole. Atp1a3+ / − a montré nettement plus courtes longueurs de foulée des membres antérieurs et postérieurs que ceux du type sauvage à 4 semaines d’âge (Figure 5 a et 5 b Figure, ouvrir le cercle et carré). « A souligné » Atp1a3+ / − a montré significativement plus courte foulée longueurs des deux membres que ceux des « non sollicités » Atp1a3+ / − à 8 semaines d’âge (Figure 5 a et 5 b de la Figure, un cercle fermé et ouvert). Asymétries de longueurs de foulée de ces deux branches ne différait pas dans tous les groupes de souris à tous les âges (Figure 5 et Figure 5). La base avant et le chevauchement des deux membres était également semblables dans tous les groupes à tous les âges (Figure 5EG, H). La base arrière a été significativement plus large dans le « souligné » Atp1a3+ / − que chez les souris de type sauvage « stressés » à 10 semaines d’âge (Figure 5F, cercle fermé et place). Ainsi, stress de contrainte causé des déficits moteurs (pas court et large base) de Atp1a3+ / −.
La pendaison zone test a été effectué pour évaluer la force de préhension et le solde le jour de l’épreuve d’analyse de l’empreinte. Aucune différence significative dans la pendaison de temps ont été observés dans les 4 à 10 semaines des souris âgées (Figure 6). À l’âge de 12 semaines, le temps suspendu de « a insisté sur » les souris de type sauvage a été significativement plus long que celle des autres groupes (Figure 6, fermé carré). Stress de contrainte prolongée suspendus temps chez les souris de type sauvage uniquement, mais pas dans Atp1a3+ / −. Ainsi, le déficit moteur de Atp1a3+ / − pouvaient être distingués de souris de type sauvage par le stress de contrainte.
Poids corporel est un indice de l’état de santé général22. Nous avons mesuré le poids du corps de la souris sur le jour de l’essai de la pendaison boîte test et analyse de l’empreinte et pas de différences significatives ont été observées dans tous les groupes de souris à tous les âges (Figure 7). Ainsi, contrainte de retenue n’a pas affecté la santé générale des souris.
Figure 1 : Hanging appareil de boîte avec un couvercle rotatif maille. Une souris a été placée au centre du couvercle du treillis, et ensuite le couvercle du treillis a été rejeté côté. La chute de latence de la souris du couvercle du treillis doit être mesurée. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : analyse de l’empreinte. Piste (A) pour l’analyse de l’empreinte. Une souris peinte à pied (membres antérieurs : l’encre rouge ; les membres postérieurs : encre noire) a été accueilli au pied de l’extrémité proximale de la zone de but. (B) l’image représentative de l’empreinte et la mesure des paramètres. Trois mesures de chaque paramètre (membres antérieurs et postérieurs "Stridez" longueurs, largeurs de front et hind base, chevauchement entre des membres antérieurs et postérieurs) proviennent de papiers imprimés à pied. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : stress retenue par tube à fond conique troués 50 mL. Le tube de retenue possède un trou pour respirer, un trou pour le passage de la queue et 16 trous pour une circulation d’air. La souris a été conservée dans le tube pendant 2 h à température ambiante. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 4 : annexe expérimentale de la pendaison boîte test et l’analyse de l’empreinte avec le chargement de stress chronique retenue. Analyse de l’empreinte et la boîte de pendaison d’essai ont été effectués à l’âge de 4 semaines. Ensuite, les souris étaient divisés en « souligné » et de groupes « non sollicités ». Pour le groupe « stressé », la contrainte de retenue a été appliquée 6 fois en 2 semaines jusqu'à 12 semaines d’âge. Pour les groupes, analyse de l’empreinte et la boîte accrochante test ont été réalisées une fois par 2 semaines jusqu'à 12 semaines d’âge. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 5 : résultats représentatifs des analyses empreinte. Analyse de l’empreinte a été réalisée avec 4 semaines Atp1a3+ / − (a3) et les souris de type sauvage (wt) (N = 19 et 17, respectivement). Puis, Atp1a3+ / − et les souris de type sauvage étaient divisés en groupes de « stress » et « non sollicités ». Analyse de l’empreinte a été menée pour « non sollicités » Atp1a3+ / −, « non sollicités » sauvage, « stressés » Atp1a3+ / −et « a insisté sur » les souris de type sauvage de 6 à 12 semaines d’âge (ouvrir les cercles, N = 9 ; ouvrir places, N = 8 ; cercles pleins , N = 10 ; carrés de solides, N = 9, respectivement). (A) "Stridez" de longueur du membre antérieur. (B) "Stridez" de longueur du membre postérieur. (C) l’asymétrie de longueur des enjambées des membres antérieurs. (D) l’asymétrie de longueur des enjambées du membre postérieur. Largeur (E) entre ses pattes avant. (F) largeur entre les membres postérieurs. (G) se chevauchent gauche des membres antérieurs et postérieurs. (H) chevauchement entre la patte avant droite et des membres postérieurs. Les données sont la moyenne ± SD. Statistical analyses (t -test pour les souris de 4 semaines) et par paires t -test avec la méthode d’ajustement de Holm pour souris 6-12-week-old ont été réalisées par R23. # p <.05, pour « non sollicités » Atp1a3+ / − et « non sollicités » les souris de type sauvage. p <.05, de « souligné » Atp1a3+ / − et « souligné » souris de type sauvage. + p <.05, pour « non sollicités » et « a souligné » Atp1a3+ / − souris. Figure 5 a -F a été modifié par référence18 avec la permission d’Elsevier. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 6 : résultats représentatifs de la pendaison des tests boîte. La pendaison zone test a été effectué avec Atp1a3+ / − (a3) et les souris de type sauvage (wt) à l’âge de 4 semaines. Puis, Atp1a3+ / − et les souris de type sauvage étaient divisés en groupes de « stress » et « non sollicités ». Suspendu le temps de 4 semaines Atp1a3+ / − (ouvrir les cercles, N = 19) et sauvage (ouvrir les places, N = 17) souris et suspendu le temps des 6-12-week-old « non sollicités » Atp1a3+ / − (ouvrir les cercles, N = 9), type sauvage « non sollicités » (carrés vides N = 8), « a souligné » Atp1a3+ / − (cercles pleins, N = 10) et « souligné » sauvage (solides places, N = 9) souris ont été tracées sur une échelle logarithmique. Les données sont la moyenne ± SD. Statistical analyses (t -test pour les souris de 4 semaines) et par paires t -test avec la méthode d’ajustement de Holm pour souris 6-12-week-old ont été réalisées par R23. p <.05, pour « stressés » Atp1a3+ / − et « souligné » souris de type sauvage. $ p <.05, pour « non sollicités » et « stressés » souris de type sauvage. + p <.05, pour « non sollicités » Atp1a3+ / − et « souligné » souris de type sauvage. Données a été tirées à référence18 avec la permission d’Elsevier. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 7 : résultats représentatifs des courbes de croissance. Poids corporel ont été mesurées de Atp1a3+ / − (a3) et les souris de type sauvage (wt) à l’âge de 4 semaines (ouvrir les cercles, N = 19 ; ouvrir places, N = 17, respectivement). Puis, Atp1a3+ / − et les souris de type sauvage étaient divisés en groupes de « stress » et « non sollicités ». Corps poids entre 6 et 12 semaines d’âge de « non sollicités » Atp1a3+ / − (ouvrir les cercles, N = 9), sauvage « non sollicités » (ouvrir les places, N = 8), « stressés » Atp1a3+ / − (cercles pleins, N = 10) et « souligné » sauvage (solide carrés, N = 9) souris ont été mesurés. Les données sont la moyenne ± SD. Statistical analyses (t -test pour les souris de 4 semaines) et par paires t -test avec la méthode d’ajustement de Holm pour souris 6-12-week-old ont été réalisées par R23. Figure 7 a été modifié par référence18 avec la permission d’Elsevier. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
L’analyse de l’empreinte et la boîte de pendaison d’essai sont simples et peu coûteux des tests comportementaux pour la fonction motrice des souris. Les phénotypes neurocomportementales dans plusieurs modèles de souris ont été correctement détectés par ces tests. Par exemple, raccourcir la longueur de foulée dans la sclérose latérale amyotrophique24, augmentation de la longueur de foulée asymétrique à l’ataxie-télangiectasie25, accroissement de la durée de chevauchement dans la maladie de Huntington26 et dystonie27, et base élargie à l’ataxie28,29, Angelman syndrome30 et dystonie31 ont été démontrés par l’analyse de l’empreinte. En outre, suspension plus courte que celle des souris de contrôle a été observée dans le modèle murin de la dystrophie musculaire de Duchenne32. Ainsi, les deux essais décrits dans le présent document serait utiles pour l’évaluation des troubles moteurs des souris.
Il y a une étape essentielle du présent protocole pour obtenir l’empreinte forte. Il est très important de mettre une souris sur papier immédiatement après en plongeant le fond des branches à l’encre pour éviter le séchage. Il est nécessaire de terminer les étapes d’immersion (étapes 2.2.3 et 2.3.3) en peu de temps. Un désavantage de ce protocole d’analyse de l’empreinte, c’est que les paramètres obtenus sont limités aux plus simples qui ne contiennent pas de données temporelles (par exemple, durée de la marche du cycle et l’étape de séquence de chaque pied) et des informations physiques (p. ex., la pression de empreinte basée sur panneau LED tactile). Quand des informations temporelles et physique sont exigées, un appareil d’analyse automatisée de démarche doit être utilisé. Alternativement, on trouvera des informations temporelles de la démarche par caméra haute vitesse33. Un autre inconvénient est que les paramètres sur papier imprimé pied de mesure est plus laborieuse que l’analyse de la démarche automatisée. Pour l’application future, le développement d’un programme de collecte de données semi-automatique ou automatique de papier imprimé pied devra diminuer les paramètres de mesure effort déployé.
Pour le chargement de stress, nombre total et la durée par session peuvent varier dans le présent protocole. Contrainte de retenue a été effectuée avec différentes durées et nombre de demandes (p. ex.., seul pendant 5 min34, unique pour 24 h35et 12 h x 5 séances36séances de 6 h x 3137, revu en réf. 20). À notre connaissance, aucune étude systématique ne concerne les effets du nombre total et la durée par session sur la fonction motrice des souris. L’activité des souris dans le champ ouvrir est affectée par le stress unique de chargement de 1 h38 ou 2 h, mais pas par celui de 15 min19. Durée prolongée de la charge de stress peut entraîner de graves déficits moteurs. Pour le nombre de charges de contrainte, la position de la souris devient plus large que celui des souris non sollicités après 36 fois de stress chargement (1 h deux fois par semaine), mais pas après 30 fois39. Stress chronique retenue (6 h par jour pendant 31 jours consécutifs) aggrave rotarod performance dans le modèle murin de la maladie de Parkinson,37. Nos résultats ont montré le temps suspendu de « souligné » Atp1a3+ / − souris sont plus courte que celle des souris sauvage « stressés » après 24 heures de stress temps de chargement (à 12 semaines d’âge), mais pas après 18 ou moins (à 4, 6, 8 et 10 semaines d’âge). Chargement des stress répétés est donc requise pour l’induction de certains déficits moteurs chez les souris, bien que l’induction des déficits moteurs après une longue période depuis le début d’une seule ou plusieurs fois des contraintes de chargement ne peut être exclue. Lorsque la souris ne montrent pas un phénotype neurocomportementales au présent protocole, la recommandation est d’augmenter le nombre total et la durée du stress chargement par session. En revanche, quand les souris montrent anomalie de démarche d’une seule ou plusieurs fois de stress chargement, durée et nombre peuvent être diminués.
Enfin, les performances de la marche et suspendus peuvent être affectées par des caractères comportements émotionnelles (p. ex., anxiété et activité) autres que ceux de dysfonctionnement moteur. Souris avec grande anxiété et d’hyperactivité souvent courir (au lieu de marche) à la zone de but. Souris, montrant un comportement semblable dépression peuvent marcher avec arrêts fréquents. Par conséquent, un motif empreinte aberrante peut-être pas en raison de déficits moteurs. Ainsi, pour confirmer l’anomalie de démarche résultant uniquement de déficits moteurs, effectuant des tests qui évaluer les caractéristiques émotionnelles (activité : test de terrain dégagé ; anxiété : open field et élevée, plus le test du labyrinthe ; comportement semblable à dépression : contraint de nager test) après que ce protocole comme décrit plus haut18 est conseillé.
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Disclosures
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Acknowledgments
Ce travail a été soutenu par KAKENHI JSPS (société japonaise pour la Promotion des sciences) (subvention pour la recherche scientifique C), accorder le numéro 18K 07373 (H.S.) et des subventions pour les universités privées.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hanging box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/ | |
| Marking pen | ZEBRA | MO-120-MC-BK | |
| Goal box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/ | Accessory for apparatus of balanced beam test |
| Boxes | O’hara & Co. | - | Side wall of runway |
| Black ink | Shin-asahi | - | |
| Red ink | Maruyamakogyo | BC-6 | |
| Disposable Petri Dish | Corning | 351008 | Petri dishes (35 mm in diameter) |
| Askul Multipaper Super White J Monochrome A3 | Askul | 701-712 | White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm) |
| 50 mL Conical tube | Corning | 430829 | |
| Square drill | KAKURI Corporation | DIY FACTORY (K32-0313) |
References
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