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Behavior

공간 분석 및 쥐 상자 테스트 매달려의 저가 프로토콜 적용 구속 만성 스트레스

Published: January 23, 2019 doi: 10.3791/59027
Automatic Translation
1, 1
1Division of Biology, Center for Molecular Medicine, Jichi Medical University

Summary

저가 프로토콜 발자국 분석의 구성 및 구속 스트레스 마우스 모델의 운동 장애를 평가 하는 데 유용 후 상자 테스트를 거

Abstract

걸음 걸이 장애 운동 장애를 가진 환자에서 자주 관찰 됩니다. 운동 장애에 대 한 사용 되는 마우스 모델, 걸음 걸이 분석에서는 쥐 환자의 증상을 모방 여부를 결정 하는 중요 한 행동 테스트입니다. 아무 자발적인 모터 형 마우스 모델에서 관찰 하는 때 모터 적자는 자주 스트레스에 의해 유발 됩니다. 따라서, 걸음 걸이 분석 스트레스 로드 다음 마우스 모델에서 모터 형을 평가 하기 위한 중요 한 방법 것입니다. 그러나, 연구원은 걸음 걸이 분석에서 정량 결과 자동으로 받도록 비싼 기구 필요가 얼굴. 스트레스, 스트레스 비싼 기구 전기 충격에 대 한 필요 및 실행 없이 간단한 방법으로 로드 바람직합니다. 따라서, 우리는 상자 테스트 모터 기능을 평가 하 거 종이와 잉크, 공간 분석의 구성 된 간단 하 고 저가 프로토콜 소개 하 고 스트레스 로드 원뿔 튜브와 구속에 의해 정의 된. 쥐의 모터 적자가이 프로토콜에 의해 성공적으로 감지 했다.

Introduction

운동 장애는 초과 또는 자발적 또는 자동 운동1의 소수를 보여주는 신 경계의 소요로 정의 됩니다. 특히, 걸음 걸이 장애 운동 장애2,,34환자 중 자주 설명 되어 있습니다. 따라서, 걸음 걸이 분석 운동 질환의 동물 모델의 유효성 검사에 대 한 적합 한 행동 테스트입니다. 쥐, 자동화 된 걸음 걸이 분석 디딜 방 아6,7에 의해 자연 속도5 및 조정 가능한 속도에서 걷기를 위해 수행 되었습니다. 이러한 분석은 자동으로 걸음 걸이의 정량 결과 제공합니다. 걸음 걸이 장애를 감지 하는 다른 방법은 발자국 분석을 이라고 합니다. 잉크와 피트의 바닥 라벨, 후 쥐 종이에 고 발자국 분석. 처음에, 바 셀 린 그리고 가루 숯8발자국 시각화 하는 데 사용 했다 다음 거짓말 탐지기 종이9 에 잉크 및 인화지10사진 개발자에 의해 대체 되었다. 잉크를 사용 하 여 종이 다른 방법 보다 저렴 하 고 덜 독성 방법11현재까지 남아 있다. 발자국 분석과 자동된 분석5,,67 에 비해 덜 비싼은 풍부한 연구 자금 없이 연구원에 대 한 마우스 모델에 운동 장애를 평가 하기 위해 유용할 것 이다 .

교수형 상자 테스트 와이어 케이지 뚜껑12 를 사용 하 여 4 개의 다리 걸려 테스트의 일종 이며 와이어 메쉬 스크린13. 상자는 상자 센터 바에 따라 정상 회전 메쉬 뚜껑 기구 이다. 걸음 걸이 분석 뿐만 아니라 테스트 수 있습니다 저렴 하 고 쉽게 수행. 따라서, 우리는 교수형을 실시 평가 그립 강도와 균형, 또한이 프로토콜에 발자국 분석 하기 상자 테스트.

스트레스는 운동 장애14,15의 증상을 유도합니다. 아무 자발적인 모터 형 운동 장애16,,1718의 마우스 모델에서 관찰 하는 경우에 모터 적자는 종종 여러 가지 만성 스트레스에 의해 유발 됩니다. 구속은 스트레스 때문에 동물 육체적으로 무사 히19 이며 비용 덜 전용된 기구와 전기 충격 같은 다른 방법에 비해 쥐, 로드에 대 한 일반적으로 사용 되는 방법의 하나 이며 디딜 방 아의 사용과 실행 강제. 구속 수감 숨어 50 mL 원뿔 튜브에 마우스에 의해 수행 되는 관으로 와이어 같은 다른 방법을 메쉬 스 트레이너, 녹화 사지, 거 즈 (검토20)와 동물의 포장 보다 쉽습니다. 이 문서에 요약 하는 면적의 프로토콜 분석 및 교수형 상자 튜브에 의해 구속 후 테스트. 이 프로토콜 자발적인 모터 형 없이 운동 장애의 마우스 모델을 사용 하 여 우리를 도울 것입니다.

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Protocol

모든 동물 실험은 인간적 인 방식으로 실시 했다. 기관 동물 실험 위원회의: Jichi 의료 대학 연구 승인. 연구 기관 규정에 따라 동물 실험 및 기본 지침에 대 한 동물 실험의 적절 한 수행과 학술 연구 기관에서 관련 활동에 대 한 일본의 문 부 과학성의. 이 프로토콜에서 사용 하는 마우스 되었습니다21위에서 설명한.

1. 교수형 상자 테스트

  1. 각 마우스의 무게를 기록 합니다. 개별 차별에 대 한 표시 펜으로 꼬리를 표시 (예:., 는, 더블 라인, 라인과 트리플 라인).
    참고: 성장 곡선의 일반적인 건강22인덱스에 사용 됩니다.
  2. 행동 테스트 하기 전에 실험 실 적어도 30 분에는 마우스를 놓습니다. (그림 1) 위에 회전 메쉬 뚜껑 분명 상자 (25 x 25 x 40 c m3)로 구성 되어 교수형 상자 설정. 메쉬 뚜껑 상단 180도 뒤집혀 있도록 중앙 막대를 따라 회전할 수 있습니다.
  3. 메쉬 뚜껑의 중앙에 마우스를 넣어. 조심 스럽게 측면을 메쉬 뚜껑 거절.
  4. 가 대기 시간 (시간 걸려) 메쉬 뚜껑에서 마우스를 측정 합니다.
    참고: 마우스 5 분 이내가 하지 않는 경우 5 분으로 대기 시간을 기록 합니다.
  5. 홈 케이지를 마우스를 반환 합니다. 모든 테스트 후 70% 에탄올과 교수형 상자를 청소 합니다.

2. 공간 분석

참고: 교수형 상자 다음 테스트, 공간 분석을 수행.

  1. 설정 는 활주로 (그림 2A)입니다.
    1. 흰 종이의 한 조각 잘라 (29.7 cm x 42 cm x 0.09 m m) 동등한 폭의 3 개의 길이에 경도. 테이블에 흰 종이 (9.9 c m x 42 cm)를 설정 합니다.
    2. 종이의 원심 끝에 어두운 목표 상자를 넣어. 넣어 다른 쥐의 탈출 방지 활주로의 양쪽에 벽 (약 그는 종이의 동일한 길이) 상자.
    3. 별도 접시 (지름 35 m m)에 검정 잉크와 빨간 잉크를 넣어.
  2. 교육 세션입니다.
    참고: 나이의 4 주에만 훈련을 수행 합니다.
    1. 종이 (얼굴 목표 상자 쪽으로 머리)의 근 위 끝에 마우스를 넣어. 목표 상자를 근 위 끝에서 도보 마우스를 하자. 목표 상자에서 마우스를 제거 합니다. 마우스는 종이에 중지, 가볍게 눌러 마우스 목표 상자를 손가락.
    2. 앞 발 움직임을 제한 하는 엄지와 집게 손가락 사이 아저씨를 파악 하 여 마우스를 잡아. 다음, 뒤 및 꼬리는 엄지손가락의 공과 hindlimbs의 움직임을 제한 하는 다른 손가락 사이 파악.
      참고: 옷에 잉크도 말에서 마우스 결과의 부족 들고.
    3. 앞 발에 빨간 잉크의 바닥 및 검정 잉크에 hindlimbs의 바닥을 담가. 바로 종이 (얼굴 목표 상자 쪽으로 머리)의 근 위 끝에 마우스를 넣어. 목표 상자를 근 위 끝에서 도보 마우스를 하자. 마우스는 종이에 중지, 가볍게 눌러 마우스 목표 상자를 손가락.
    4. 목표 상자에서 마우스를 제거 합니다. 테스트 세션으로 이동 합니다.
  3. 세션을 테스트 합니다.
    1. 훈련 세션을 다음 흰 종이의 새로운 커트 조각으로 발자국에 대 한 활주로를 설정 합니다.
    2. 앞 발 움직임을 제한 하는 엄지와 집게 손가락 사이 아저씨를 파악 하 여 마우스를 잡아. 다음, 뒤 및 꼬리는 엄지손가락의 공과 hindlimbs의 움직임을 제한 하는 다른 손가락 사이 파악.
    3. 앞 발에 빨간 잉크의 바닥 및 검정 잉크에 hindlimbs의 바닥을 담가. 바로 종이의 근 위 끝에 마우스를 넣어. 목표 상자를 근 위 끝에서 도보 마우스를 하자.
      참고: 어둠을 선호 하는 쥐, 때문에 꾸준한 마우스 접근 어두운 목표 상자 됩니다 산책. 마우스는 종이에 중지, 가볍게 눌러 마우스 목표 상자를 손가락. 다음, 분석에 대 한 신뢰할 수 있는 발자국 얻지 (단계 2.4을 참조 하십시오. 대 한 발자국의 분석 내용을) 마우스 중지 때문에 다시 테스트 세션을 시도 합니다.
    4. 홈 케이지를 목표 상자에서 마우스를 반환 합니다. 각 테스트 세션 후 70% 에탄올과 목표 상자를 청소 합니다. 발 인쇄 종이 건조
  4. 발자국의 분석
    1. 각 매개 변수의 3 측정을 얻기 (앞 발과 hindlimbs, 전면 및 뒷 다리 기본 너비의 길이 보 폭, forelimb hindlimb, 그림 2B사이 오버랩) 발 인쇄 종이에서 통치자와.
      참고: 때문에 인접 하 고 원심 끝의 발자국 자주 중지 때문에 큰 변화를 표시 또는 발자국의 꾸준한 걸음 걸이 패턴 부분을 선택, 실행. 발 인쇄 종이의 가운데 부분 일반적으로 분석에 적합 것입니다.
      1. 보 폭 길이 대 한 발 (예를들면, 발 패드 또는 발가락)의 동일한 부분 사이의 거리를 측정 합니다.
      2. 전면 기본 너비에 대 한 연속 오른쪽 (또는 왼쪽) 앞 발자국 사이 선을 그립니다. 그런 다음에 오른쪽 (또는 왼쪽) 발자국 사이 그린 선 왼쪽 (또는 오른쪽)의 앞 면적의 패드에서 수직 라인의 길이 측정 합니다.
      3. 뒷 기본 너비에 대 한 연속 오른쪽 (또는 왼쪽) 뒷 발자국 사이 선을 그립니다. 그런 다음에 오른쪽 (또는 왼쪽) 발자국 사이 그린 선 왼쪽 (또는 오른쪽) 뒷 발자국의 패드에서 수직 라인의 길이 측정 합니다.
      4. 오버랩, 패드 왼쪽 (또는 오른쪽)의 앞과 뒷 발자국 사이의 거리를 측정 합니다.
    2. 각 개인에 대 한 세 가지 측정 평균. 개별 평균 각 매개 변수를 사용 하 여 통계 분석을 위해.
      1. 보 폭 길이 대 한 왼쪽 및 오른쪽 진보의 개별 평균 평균을 사용 합니다.
      2. 다리 길이의 비대칭에 대 한 개별 평균 왼쪽된 다리와 오른쪽 다리 보 폭 길이 차이의 절대 값을 사용 합니다.
      3. 다른 매개 변수 (앞 기본 너비, 뒷 기본 너비 및 중복)의 통계 분석에 대 한 직접 개별 평균을 사용 합니다.

3. 구속 스트레스 로드

  1. 감 관의 준비입니다.
    1. 눈금 표시를 따라 16 구멍 (직경 약 2 m m) 50 ml 원뿔 튜브 (지름 x 115 mm 길이 30 m m)에 게 (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mL)와 평방 드릴 (그림 3)에 의해 표시 하는 각 규모의 뒷면. 팁을 절단 하 여 호흡에 대 한 50 mL 원뿔 튜브 (지름 약 5 m m)의 끝에 구멍을 확인 합니다. 쥐의 꼬리를 통과 관 뚜껑에 구멍 (직경 약 4 m m)를 확인 합니다.
  2. 스트레스 로드
    1. 실험 실에서 쥐를 놓습니다.
    2. 엄지와 집게 손가락 사이 아저씨를 파악 하 여 마우스를 잡아. 머리에서 구속 튜브에 마우스를 입력 합니다. 뚜껑에 구멍을 통해 꼬리를 전달 합니다. 뚜껑을 닫습니다.
      참고: Forelimb 운동 제한 마우스 앞 발에 의해 튜브를 입력 거부 때문에.
    3. 실 온에서 책상에 2 h에 대 한 동봉 하는 마우스를 유지. 감 관에서 마우스를 제거 하 고 홈 케이지 돌아갑니다.
      참고: 세척 후, 건조 감 튜브를 다시 수 있습니다.

4. 실험 일정 (그림 4).

  1. 교수형을 수행 테스트 및 공간 분석의 4 주에 같은 날에 상자 (1 단계 참조 하십시오. 매달려 상자 테스트 및 2 단계. 자세한 내용은 발자국 분석) '스트레스 그룹'과 '비 스트레스 그룹'으로 그룹화 하기 전에 모든 쥐에 기준선 측정으로.
    참고: 약 8-10에 2-3 새끼 쥐 실험에서 사용에 적합 있을 수 있습니다. 학습 및 테스트 세션 4 주 나이의 공간 분석에 의하여 이루어져 있다.
  2. 임의로 나눌 쥐 '스트레스 그룹'과 '비 스트레스 그룹'.
    참고: 쥐를 사용 하는 구성 된 여러 새끼 때 두 그룹으로 littermates 균일 하 게 나눕니다. 각 그룹에 번호 구성에 대해 4-5 쥐.
  3. 그룹에 적용할 구속 스트레스는 ' 스트레스 ' 6 번 (3 단계 참조 2 주에 걸쳐. 구속 스트레스 자세한 내용은 로드)입니다.
    참고: 6 번 구속의 적용 됩니다 매 2 주 뒤에 매달려 나이의 6-12 주에서 테스트 및 공간 분석을 상자. 교수형의 시험 당일에 구속 스트레스를 적용 하지 마십시오 테스트 및 공간 분석.
  4. 교수형을 수행 테스트 및 6, 8, 10, 같은 날에 발자국 분석 테스트 세션 및 나이의 12 주.

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Representative Results

Atp1a3 의 heterozygous 남성 쥐 (Atp1a3+ / −)는 마우스 모델 빠른 발병 dystonia 위한 parkinsonism 및 야생-타입 littermates이이 프로토콜에 사용 되었다. Atp1a3+ / − 나이 (그림 5A 와 그림 5B, 원을 열고 광장)의 4 주 보다 야생 타입의 forelimb와 hindlimb 상당히 짧은 보 폭 길이 보였다. '스트레스' Atp1a3+ / − ' 비 스트레스 ' 보다 두 사지의 상당히 짧은 보 폭 길이 보여 Atp1a3+ / − (그림 5A와 5B 그림, 폐쇄 및 오픈 원) 나이의 8 주에. 두 팔 다리의 스트라이드 길이의 asymmetries 아니었다 크게 마우스의 모든 그룹에서 다른 모든 연령대 (그림 5C 및 그림 5D). 전면 기지 및 두 사지의 중복 또한 유사 했다 모든 그룹에서 모든 연령대 (그림 5EG, H). 뒷 기지는 크게 넓은 '스트레스' Atp1a3+ / − (5 층 그림, 닫힌된 원형 및 사각형) 시대의 10 주에 '스트레스' 야생-타입 마우스에서 보다. 따라서, 구속 스트레스 발생의 모터 적자 (짧은 보 폭과 넓은 베이스) Atp1a3+ / −.

교수형 상자 테스트 발자국 분석의 시험 당일에 그립 강도와 균형을 평가 하기 위해 수행 되었다. 시간에 상당한 차이가 오래 된 마우스 (그림 6) 4 ~ 10 주에 관찰 되었다. 나이의 12 주, '스트레스' 야생-타입 마우스의 교수형 시간 크게 다른 그룹 (그림 6, 사각형 폐쇄)의 이상 이었다. 구속 스트레스 하지 하지만 야생-타입 쥐만,에 매달려 시간을 연장 Atp1a3+ / −. 따라서, 모터 적자의 Atp1a3+ / − 야생-타입 마우스 구속 스트레스에 의해 구별 되었다.

몸 무게는 일반적인 건강22의 인덱스입니다. 우리는 교수형의 테스트 날에 생쥐의 몸 무게를 측정 상자 테스트 및 공간 분석, 및 중요 한 차이가 모든 연령대 (그림 7)에서 마우스의 모든 그룹에서 관찰 됐다. 따라서, 구속 스트레스 쥐의 일반적인 건강을 미치지 않았다.

Figure 1
그림 1: 회전 메쉬 뚜껑과 상자 기구 거. 다음 메쉬 뚜껑 바뀌었고 쪽와 마우스 메쉬 뚜껑의 중앙에 배치 되었다. 메쉬 뚜껑에서 마우스의가 대기 시간 측정 될 것 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2: 공간 분석. 공간 분석에 대 한의 (A) 활주로 발-그린 마우스 (앞 발: 레드 잉크; hindlimbs: 잉크 검정) 목표 상자를 근 위 끝에서 도보를 허용 했다. (B)와 매개 변수 측정의 대표 이미지. 각 매개 변수 (forelimb hindlimb 보 폭 길이, 전면 및 뒷 다리 기본의 폭, forelimb hindlimb 사이 오버랩)의 세 가지 측정 발 인쇄 종이에서 입수 했다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 3
그림 3: 숨어 50 mL 원뿔 튜브에 의해 구속 스트레스. 구속 튜브 호흡 구멍, 꼬리, 전달 하기 위한 구멍 및 공기 순환 위한 16 구멍 있다. 마우스는 실 온에서 2 h에 대 한 튜브에 보관 했다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 4
그림 4: 교수형의 실험 일정 상자 테스트 및 만성 감 스트레스 로드 발자국 분석. 공간 분석 및 테스트 교수형 상자 나이의 4 주에서 수행 했다. 다음, 쥐 '스트레스'와 ' 비 압박 ' 그룹으로 분할 했다. '스트레스' 그룹에 대 한 구속 스트레스 나이의 12 주까지 2 주에 6 번 적용 되었다. 그룹, 공간 분석 및 교수형 상자 둘 다에 대 한 테스트는 나이의 12 주까지 2 주에 한 번씩 수행 했다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 5
그림 5: 공간 분석의 대표적인 결과. 4 주 오래 된 발자국 분석 수행 했다 Atp1a3+ / − (a3)와 야생-타입 (wt) 마우스 (N = 19, 17, 각각). 그런 다음 Atp1a3+ / − 및 야생-타입 마우스 '스트레스'와 ' 비 압박 ' 그룹으로 분할 되었다. 발자국 분석 ' 비 스트레스 '에 대 한 실시 했다 Atp1a3+ / −' 비 스트레스 ', 야생-타입, '스트레스' Atp1a3+ −, ' 스트레스 ' 나이의 6-12 주에서 야생-타입 마우스 (서클, N 열 = 9; 사각형, N 열 = 8; 솔리드 원 N = 10; 단색 사각형, N = 9, 각각). (A) 보 폭 forelimb의 길이. (B) 길이 hindlimb의 보 폭. (C) 비대칭의 forelimb 진보 길이. (D) hindlimb 진보 길이의 비대칭. (E) 앞 발 사이의 너비입니다. Hindlimbs 사이 (F) 너비입니다. (G) 왼쪽된 forelimb hindlimb 사이 오버랩. (H) 오른쪽 forelimb hindlimb 사이 오버랩. 데이터는 평균 ± sd. 통계 분석 (4 주 오래 된 마우스에 대 한t-검정) 및 6-12 주 된 마우스 Holm 조정 방법으로 없음을 t-테스트 R23에 의해 수행 되었다. # p <.05, ' 비-스트레스 '에 대 한 Atp1a3+ / − 및 야생-타입 마우스 ' 비 스트레스 '. '스트레스'에 대 한 p <.05, Atp1a3+ / − ' 야생-타입 마우스 '를 강조 했다. + p <.05, ' 비-스트레스 '와 '스트레스' Atp1a3+ / − 쥐. 그림 5A -F Elsevier의 허가 기준18 에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 6
그림 6: 매달려 상자 테스트의 대표적인 결과. 교수형 상자 테스트로 수행 했다 Atp1a3+ / − (a3)와 야생-타입 (wt) 쥐 나이의 4 주. 그런 다음 Atp1a3+ / − 및 야생-타입 마우스 '스트레스'와 ' 비 압박 ' 그룹으로 분할 되었다. 4 주 오래 된의 시간을 걸려 Atp1a3+ − (서클, N 열 = 19)와 야생-타입 (사각형, N 열 = 17) 마우스 및 6-12 주 된의 시간을 걸려 ' 비-스트레스 ' Atp1a3+ − (서클, N 열 = 9), ' 비-스트레스 ' 야생-타입 (오픈 사각형 N = 8), '스트레스' Atp1a3+ / − (고체 서클, N = 10), ' 스트레스 ' 야생-타입 (단색 사각형, N = 9) 마우스 눈금에 표시 했다. 데이터는 평균 ± sd. 통계 분석 (4 주 오래 된 마우스에 대 한t-검정) 및 6-12 주 된 마우스 Holm 조정 방법으로 없음을 t-테스트 R23에 의해 수행 되었다. '스트레스' Atp1a3에 대 한 p <.05,+ / − ' 야생-타입 마우스 '를 강조 했다. $ p <.05, ' 비-스트레스 '와 '스트레스' 야생-타입 마우스. + p <.05, ' 비-스트레스 '에 대 한 Atp1a3+ / − ' 야생-타입 마우스 '를 강조 했다. 데이터는 Elsevier의 허가 기준18 에서 재 인 쇄 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 7
그림 7: 성장 곡선의 대표적인 결과. 몸 무게의 측정 되었다 Atp1a3+ / − (a3) 및 나이의 4 주에 야생-타입 (wt) 마우스 (서클, N 열 = 19, 사각형, N 열 = 17, 각각). 그런 다음 Atp1a3+ / − 및 야생-타입 마우스 '스트레스'와 ' 비 압박 ' 그룹으로 분할 되었다. 몸 무게 ' 비 압박 '의 나이의 6과 12 주 사이 Atp1a3+ / − (서클, N 열 = 9), ' 비 압박 ' 야생-타입 (사각형, N 열 = 8), '스트레스' Atp1a3+ − (고체 서클, N = 10), ' 스트레스 ' 야생-타입 (솔리드 사각형, N = 9) 마우스 측정 되었다. 데이터는 평균 ± sd. 통계 분석 (4 주 오래 된 마우스에 대 한t-검정) 및 6-12 주 된 마우스 Holm 조정 방법으로 없음을 t-테스트 R23에 의해 수행 되었다. 그림 7 참조18 Elsevier의 허가 함께 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

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Discussion

공간 분석 및 테스트 교수형 상자는 마우스의 모터 기능에 대 한 간단 하 고 저렴 한 행동 테스트. 여러 마우스 모델에서 neurobehavioral 고기가이 테스트에 의해 성공적으로 발견 되었습니다. 예를 들어 루 경화 증24, 증 telangiectasia25, Huntington의 질병26 및 dystonia27, 중복의 증가 길이에 비대칭 보 폭의 증가 길이 보 폭 길이 단축 하 고 넓히고 기지 증28,29, Angelman 증후군30 dystonia31 발자국 분석에 의해 설명 되었다. 또한, 컨트롤 마우스의 그것 보다 짧은 거 시간 듀 켄 씨 근이 영양 증32의 마우스 모델에서 관찰 되었다. 따라서,이 문서에서 설명 하는 두 테스트는 쥐의 운동 기능 장애를 평가 하는 데 유용할 것 이다.

날카로운 발자국을 얻기 위해이 프로토콜의 중요 한 단계가입니다. 종이에 잉크를 건조 하지 않도록 팔 다리의 바닥을 immersing 후 즉시 마우스를 넣어 매우 중요 하다. 그것은 짧은 시간에 immersing 단계 (단계 2.2.3 2.3.3)를 완료 해야 합니다. 공간 분석의이 프로토콜의 단점은 얻은 매개 변수는 시간 정보를 포함 하지 않는 간단한 것 제한 (예를 들어, 걸음 걸이의 기간 주기 및 각 발 순서를 단계) 및 물리적 정보 (예, 압력의 풋프린트 터치 LED 패널에 따라). 시간적, 물리적 정보 필요한 경우 자동화 된 걸음 걸이 분석 장치를 사용 해야 합니다. 또는, 고속 카메라33으로 걸음 걸이 패턴의 시간적 정보를 얻을 수 있습니다. 또 다른 단점은 발 인쇄 종이에 파라미터 측정 자동화 된 걸음 걸이 분석 보다 더 힘 드는입니다. 미래의 응용 프로그램에 대 한 발 인쇄 종이에서 반자동 또는 자동 데이터 수집에 대 한 프로그램의 개발 노력 소비 측정 매개 변수를 감소 해야 합니다.

스트레스 로드에 대 한 총 수 및 세션당 기간이이 프로토콜에 변화 수 있습니다. 구속 스트레스는 다양 한 기간 및 응용 프로그램의 수와 실시 되었습니다 (예:., 참고 20에서 5 분에 대 한 단일34,3524 h, 12 h x 5의 세션36, 및 6 h x 31 세션37, 단일 검토). 우리의 지식을 하려면, 아무 체계적인 연구 생쥐의 모터 기능에 세션 당 기간 및 총 수의 효과 우려. 열기 필드에 쥐의 활동은 단일 스트레스 1 h38 또는 2 h의 로드에 의해 아니지만 15 분19의 영향을. 스트레스 로드의 장시간된 기간 심한 모터 적자 이어질 수 있습니다. 스트레스 선적의 수에 대 한 생쥐의 입장이 된다 비 강조 쥐 후 스트레스 (1 시간 매주 두 번), 로드의 36 시간만 30 번39후 보다 넓은. 만성 억제 스트레스 (31 연속 한 일 당 6 h) 파 킨 슨 병의37의 마우스 모델에서 rotarod 성능을 aggravates. 우리의 결과 보여 '강조'의 거 시간 Atp1a3+ / − 마우스 스트레스 로드 (12의 주에 나이), 하지만 하지 후 18 시간 24 시간 후 '스트레스' 야생-타입 마우스의 보다 짧은 지 또는 (나이의 4, 6, 8, 및 10 주)에서 덜 되었다. 따라서, 반복적된으로 스트레스 로드는 단일 또는 여러 번 로드 하는 스트레스의 시작에서 오랜 기간 후 모터 적자의 유도 제외할 수 없습니다 비록 쥐, 특정 모터 적자의 유도 필요 합니다. 쥐가이 프로토콜에 neurobehavioral 표현 형을 표시 하지 않습니다, 세션 당 로드 스트레스의 기간 및 총 수를 증가 하는 추천이입니다. 대조적으로, 쥐 걸음 걸이 이상 단일에서 또는 여러 번 로드 하는 스트레스의 표시, 기간 및 수 수 감소.

마지막으로, 산책 하 고 매달려의 성능 이외의 모터 장애의 정서적 행동 문자 (예를 들어, 불안 및 활동)에 의해 달라질 수 있습니다. 마우스 과다와 높은 불안은 종종 목표 상자 (도보) 대신 실행합니다. 자주 중지 마우스 우울증 같은 행동을 보여주는 걸 수 있습니다. 따라서, 탈 선 발자국 패턴 모터 적자 때문에 않을 수 있습니다. 따라서, 걸음 걸이 이상 모터 적자에서 결과 확인 하려면 추가 수행 테스트 하는 감정적인 특성 평가 (활동: 오픈 필드 테스트, 불안: 오픈 필드와 높은 플러스 미로 테스트, 우울증 같은 동작: 강제 수영 테스트) 후 앞에서 설명한18 이 프로토콜은 좋습니다.

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Disclosures

저자는 공개 없다.

Acknowledgments

이 작품은 JSP (과학의 승진을 위한 일본 사회) KAKENHI (선진적인 과학 연구 c)에 의해 지원 되었다 번호 18 K 07373 (호 성)와 사립 대학에 대 한 보조금.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hanging box O’hara & Co. http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/
Marking pen ZEBRA MO-120-MC-BK
Goal box O’hara & Co. http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/ Accessory for apparatus of balanced beam test
Boxes O’hara & Co. - Side wall of runway
Black ink Shin-asahi -
Red ink Maruyamakogyo BC-6
Disposable Petri Dish Corning 351008 Petri dishes (35 mm in diameter)
Askul Multipaper Super White J Monochrome A3 Askul 701-712 White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm)
50 mL Conical tube Corning 430829
Square drill KAKURI Corporation DIY FACTORY (K32-0313)

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References

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동작 문제점 143 공간 분석 상자 테스트 스트레스 억제 행동 테스트 마우스 모터 기능 매달려
공간 분석 및 쥐 상자 테스트 매달려의 저가 프로토콜 적용 구속 만성 스트레스
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Sugimoto, H., Kawakami, K. Low-cost… More

Sugimoto, H., Kawakami, K. Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress. J. Vis. Exp. (143), e59027, doi:10.3791/59027 (2019).

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