Summary
El protocolo de bajo costo que consiste en análisis de la huella y colgante caja de prueba después de sistema de seguridad para el estrés es útil para evaluar los trastornos de movimiento del modelo del ratón.
Abstract
Disturbio del paso se observa con frecuencia en pacientes con trastornos del movimiento. En modelos de ratón utilizados para trastornos del movimiento, análisis de la marcha es prueba de comportamiento importante para determinar si los ratones imitan los síntomas de los pacientes. Déficit motor es a menudo inducida por el estrés cuando no fenotipo motor espontáneo se observa en los modelos de ratón. Por lo tanto, el análisis de la marcha siguió por la tensión de carga sería un método sensible para evaluar el fenotipo motor en modelos de ratón. Sin embargo, los investigadores enfrentan la exigencia de un aparato costoso para obtener automáticamente resultados cuantitativos de análisis de la marcha. Para estrés, tensión carga por métodos simples sin aparatos costosos necesarios para la descarga eléctrica y forzado a correr es deseable. Por lo tanto, presentamos un protocolo simple y de bajo costo que consiste en análisis de la huella con tinta y papel colgante caja de prueba para evaluar la función motora, y carga de estrés por restricción con un tubo cónico. El déficit motor de los ratones con éxito fueron detectado por este protocolo.
Introduction
Trastornos del movimiento se definen como alteraciones del sistema nervioso, mostrando un exceso o falta de movimientos voluntarios o automáticos1. En particular, disturbio del paso se documenta con frecuencia entre los pacientes con trastornos de movimiento2,3,4. Por lo tanto, análisis de la marcha es una prueba de comportamiento adecuada para la validación de modelos animales de trastornos del movimiento. En ratones, análisis de la marcha automática se han realizado para caminar a velocidad natural5 y a las velocidades ajustables por cinta de correr6,7. Estos análisis ofrecen resultados cuantitativos de la marcha automáticamente. Un método alternativo para detectar la alteración de la marcha se llama análisis de huella. Después de etiquetar los fondos de los pies con tinta, ratones caminando sobre el papel, y se analizan las huellas. Inicialmente, vaselina y carbón en polvo se utilizaron para visualizar la huella8y luego fueron reemplazados por tinta sobre papel de polígrafo9 y revelador fotográfico papel fotográfico10. Un método más barato y menos tóxico con tinta y el papel que los otros métodos sigue siendo hasta la fecha11. Análisis de la huella es menos costoso en comparación con análisis automatizado5,6,7 y serían útil para evaluar los trastornos del movimiento en modelos de ratón para los investigadores sin fondos de abundante investigación .
El colgante caja de prueba es una clase de cuatro extremidades colgantes pruebas con alambre jaula tapa12 y13de la pantalla de malla de alambre. La caja es un aparato con la tapa de la malla rotativa en la tapa de la caja a lo largo de una barra central. Además de análisis de la marcha, puede se realizar el examen fácilmente y económicamente. Por lo tanto, llevamos a cabo el colgante caja de prueba para evaluar la fuerza de agarre y el equilibrio, además para el análisis de la huella en el presente Protocolo.
El estrés induce los síntomas de trastornos de movimiento14,15. Déficit motor es inducido a menudo por varias tensiones crónicas aun cuando ningún fenotipo motor espontáneo se observa en los modelos de ratón de un desorden de movimiento16,17,18. Moderación es uno de los métodos comúnmente usados para tensión de carga en los ratones, porque el animal no está físicamente dañado19 y costo menos comparado con otros métodos como descargas eléctricas con aparato dedicado y forzado con el uso de una caminadora. Restricción por un tubo, que se realiza en confinamiento de un ratón en un tubo cónico de 50 mL agujereado, es más fácil que otros métodos tales como alambre de malla de tamiz, extremidades con cinta y envoltura de animal con una gasa (ha comentado20). En este artículo, resumimos los protocolos de la huella de análisis y el cuadro del colgante de prueba después de moderación por un tubo. Este protocolo nos ayudaría a utilizar modelos de ratón de trastornos del movimiento sin fenotipo motor espontáneo.
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Protocol
Todos los experimentos con animales se realizaron en forma humana. La institucional Animal experimento Comité de Jichi Universidad médica aprobó el estudio. El estudio se realizó conforme a la regulación institucional experimento Animal y pautas fundamentales para la correcta conducta de Animal experimento y actividades afines en instituciones académicas de investigación bajo la jurisdicción del MEXT de Japón. Ratones en este protocolo han sido descrito previamente21.
1. colgar la caja de prueba
- Registrar el peso de cada ratón. Marque la cola Pen de la marca para la discriminación individual (por ejemplo., una línea, doble líneas y líneas triples).
Nota: Se utilizan las curvas de crecimiento de un índice de salud general22. - Coloque el ratón en la sala experimental por lo menos 30 min antes de la prueba de comportamiento. Establecer el cuadro de la suspensión, que consiste en una caja transparente (25 x 25 x 40 cm3) con una tapa de malla giratorio en la parte superior (figura 1). La tapa de la malla puede ser rotada a lo largo de una barra central para que la tapa se gira 180 grados.
- Poner un ratón en el centro de la tapa de malla. Baje la tapa de la malla lado cuidadosamente.
- Medir la latencia de la caída (tiempo de la suspensión) del ratón de la tapa de malla.
Nota: Si el ratón no se dentro de 5 min, registrar la latencia como 5 minutos. - Volver el ratón a la jaula del hogar. Limpie la caja colgante con etanol al 70% después de cada prueba.
2. huella análisis
Nota: Tras la caja colgante prueba, realizar el análisis de huella.
-
Configurar el Pista de aterrizaje (Figura 2A).
- Cortar un trozo de papel blanco (29,7 cm x 42 cm x 0.09 mm) longitudinalmente en tres tiras de igual ancho. Fijar un trozo del libro blanco (9,9 cm x 42 cm) sobre la mesa.
- Poner la caja de gol oscuro en el extremo distal del papel. Poner otras cajas (aproximadamente la misma longitud que el del papel) con las paredes a ambos lados de la pista, evitando el escape de los ratones.
- Poner tinta negra y tinta roja en platos de Petri separadas (35 mm de diámetro).
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Sesión de entrenamiento.
Nota: Llevar a cabo la sesión de entrenamiento sólo a 4 semanas de edad.- Poner un ratón en el extremo proximal del papel (cara de la cabeza hacia la caja de gol). Deja el ratón a pie desde el extremo proximal a la caja de gol. Quitar el ratón de la caja de gol. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia la caja de gol por el dedo.
- Sujete el mouse agarrando el pescuezo entre los dedos pulgar e índice para limitar el movimiento de las extremidades anteriores. Luego, sostenga la espalda y la cola entre la bola del pulgar y los otros dedos para limitar el movimiento de miembros posteriores.
Nota: Insuficiente explotación del ratón resulta en manchas blancas /negras de la tinta en la ropa. - Sumergir la parte inferior de extremidades anteriores en tinta roja y la parte inferior de miembros posteriores en tinta negra. Inmediatamente ponga el ratón en el extremo proximal del papel (cara de la cabeza hacia la caja de gol). Deja el ratón a pie desde el extremo proximal a la caja de gol. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia la caja de gol por el dedo.
- Quitar el ratón de la caja de gol. Ir a la sesión de prueba.
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Sesión de prueba.
- Tras la sesión de entrenamiento, establecer el cauce para huellas con una nueva pieza de corte de papel blanco.
- Sujete el mouse agarrando el pescuezo entre los dedos pulgar e índice para limitar el movimiento de las extremidades anteriores. Luego, sostenga la espalda y la cola entre la bola del pulgar y los otros dedos para limitar el movimiento de miembros posteriores.
- Sumergir la parte inferior de extremidades anteriores en tinta roja y la parte inferior de miembros posteriores en tinta negra. Inmediatamente ponga el ratón en el extremo proximal del papel. Deja el ratón a pie desde el extremo proximal a la caja de gol.
Nota: Porque los ratones prefieren la oscuridad, caminar se convierte en más estable como el ratón acerca a la caja de gol oscuro. Si el ratón se detiene en el papel, empuje suavemente el ratón hacia la caja de gol por el dedo. Entonces, si no se obtienen huellas confiables para el análisis (véase el paso 2.4. Análisis de huellas para detalles) porque el ratón se detiene, vuelva a intentar la sesión de prueba. - Volver el ratón a la estructura de la casa de la caja de gol. Limpie la caja de gol con etanol al 70% después de cada sesión de prueba. Seque el papel impreso de pie.
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Análisis de huellas
- Obtener tres mediciones de cada parámetro (paso longitud de miembros anteriores y posteriores, delantero y trasero anchos de base, se superponen entre la extremidad delantera y trasera, figura 2B) con una regla de papel impreso de pie.
Nota: Porque huellas de extremos proximales y distales con frecuencia muestran grandes variaciones debido a la parada o funcionamiento, elegir la parte con un patrón del paso constante de huellas. La parte media del pie impreso papel generalmente es adecuada para el análisis.- Para la longitud de zancada, medir las distancias entre las mismas partes de la pata (por ejemplo, almohadilla de la pata o del dedo del pie).
- Para el delantero ancho base, trazar una línea entre huellas delanteras derecha (o izquierdas) consecutivos. Luego, mida la longitud de la línea vertical de la almohadilla de la huella delantera izquierda (o derecha) a la línea trazada entre las huellas de la derecha (o izquierdas).
- Para la anchura base trasera, trace una línea entre huellas traseras (izquierdas o derecha) consecutivos. Luego, mida la longitud de la línea vertical de la almohadilla de la huella trasera izquierda (o derecha) a la línea trazada entre las huellas de la derecha (o izquierdas).
- Superposición, mida la distancia entre teclas de la izquierda (o derecha) frente y huellas traseras.
- Promedio de las tres medidas para cada individuo. Utilice la media individual de cada parámetro para el análisis estadístico.
- Para la longitud de zancada, use el promedio de los promedios individuales de los avances de la izquierda y derecho.
- Asimetría de longitud de zancada, utilizar el valor absoluto de la diferencia entre promedios individuales del miembro izquierdo y longitud de zancada de la extremidad derecha.
- Para el análisis estadístico de los otros parámetros (ancho base delantero, ancho base trasera y superposición), utilizar la media individual directamente.
- Obtener tres mediciones de cada parámetro (paso longitud de miembros anteriores y posteriores, delantero y trasero anchos de base, se superponen entre la extremidad delantera y trasera, figura 2B) con una regla de papel impreso de pie.
3. sistema de seguridad para carga de estrés
-
Preparación de tubos de sujeción.
- Hacer 16 hoyos (aproximadamente 2 mm de diámetro) en un tubo cónico de 50 ml (30 mm de diámetro x 115 mm de longitud) a lo largo de las marcas de la escala (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 mL) y la parte trasera de cada escala marca con un taladro cuadrado (figura 3). Hacer un agujero en la punta del tubo cónico de 50 mL (aproximadamente 5 mm de diámetro) para respirar por el corte la punta. Hacer un hueco (aproximadamente 4 mm de diámetro) en la tapa del tubo para pasar la cola de los ratones.
-
Carga de estrés
- Colocar los ratones en la habitación experimental.
- Sostenga un ratón agarrando el pescuezo entre el pulgar y el dedo índice. Introduzca el ratón en el tubo de retención de la cabeza. Pasar la cola por el orificio de la tapa. Cierre la tapa.
Nota: Limitar el movimiento del miembro anterior, ya que ratones rechazan entrar en el tubo por los miembros anteriores. - Mantenga el ratón incluido por 2 h en una mesa a temperatura ambiente. Retire el ratón desde el tubo de retención y vuelva a la jaula casera.
Nota: Los tubos de retención pueden ser reutilizados después de un lavado y seco.
4. experimental horario (Figura 4):
- Realizar el colgante caja de prueba y el análisis de la huella en el mismo día a las 4 semanas de edad (consulte el paso 1. Colgante caja de prueba y paso 2. Análisis de la huella para obtener más información) como una medida de línea de base en todos los ratones antes de la agrupación en 'estrés grupo' y ' sin estrés '.
Nota: Sobre 8-10 ratones en camadas de 2-3 pueden ser convenientes utilizar en un experimento. Análisis de la huella a las 4 semanas de edad consiste en sesiones de entrenamiento y prueba. - Dividir los ratones, al azar, un 'estrés grupo' y ' sin estrés '.
Nota: Cuando los ratones se utilizan consisten en varias camadas, dividir hermanos de camada en ambos grupos. Número en cada grupo se compone de unos 4-5 ratones. - Aplicar la tensión de restricción al grupo de estrés 6 veces en el transcurso de dos semanas (vea el paso 3. Tensión de seguridad carga para más detalles).
Nota: 6 veces de retención se aplican cada dos semanas, seguido de un colgante caja análisis de prueba y huella de 6-12 semanas de edad. No aplique la tensión del sistema de seguridad para el día de la prueba de colgar la caja de prueba y el análisis de huella. - Realizar el colgante caja de prueba y la sesión de la prueba de análisis de la huella en el mismo día en 6, 8, 10 y 12 semanas de edad.
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Representative Results
Los ratones machos heterocigotos de Atp1a3 (Atp1a3+ / −) que son el modelo de ratón para inicio rápido distonía parkinsonismo y hermanos de camada de tipo salvaje fueron utilizados en este protocolo. Atp1a3+ / − mostraron significativamente más cortos longitudes de zancada de la extremidad delantera y trasera que las del tipo salvaje en 4 semanas de edad (figura 5A y figura 5B, abre el círculo y cuadrado). 'Destaca' Atp1a3+ / − mostraron significativamente más cortos longitudes de zancada de ambas extremidades que 'no tensionado' Atp1a3+ / − a las 8 semanas de edad (figura 5A y figura 5B, círculo cerrado y abierto). Las asimetrías en la longitud de zancada de ambos miembros no fueron significativamente diferentes en todos los grupos de ratones en todas las edades (figura 5 y figura 5). La base frontal y superposiciones de ambos miembros eran también similares en todos los grupos de edades (figura 5EG, H). La base de posteriores fue significativamente mayor en el 'destaca' Atp1a3+ / − que en los ratones de tipo salvaje 'estresados' en 10 semanas de edad (figura 5F, círculo cerrado y cuadrado). Así, sistema de seguridad para estrés causado déficit motor (tranco corto y base ancha) de Atp1a3+ / −.
El colgante caja de prueba fue realizada para evaluar la fuerza de agarre y el equilibrio en el día de la prueba de análisis de huella. No hubo diferencias significativas en tiempo de colgar se observaron en 4 a 10 semanas ratones viejos (figura 6). A las 12 semanas de edad, colgante 'destaca' ratones de tipo salvaje estaba significativamente más largo que el de los otros grupos (figura 6, cerrado cuadrado). Tensión de restricción prolongada tiempo de colgar en los ratones de tipo salvaje, pero no en Atp1a3+ / −. Así, el déficit motor de Atp1a3+ / − era distinguible de los ratones de tipo salvaje por la tensión de retención.
El peso corporal es un índice de salud general22. Medimos el peso corporal de ratones en el día de la prueba de colgar caja de prueba y análisis de la huella y no hubo diferencias significativas se observaron en todos los grupos de ratones en todas las edades (figura 7). Por lo tanto, tensión de restricción no afectó la salud de los ratones.
Figura 1: colgar el aparato de la caja con una tapa de malla rotativa. Un ratón fue colocado en el centro de la tapa de la malla, y luego la tapa de la malla fue rechazada por lado. La latencia de la caída del ratón de la tapa de la malla debe medirse. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Análisis de la huella. Pista (A) para el análisis de la huella. Un ratón de pie pintado (miembros anteriores: tinta roja; posteriores: tinta negro) fue permitido a pie desde el extremo proximal a la caja de gol. (B) imagen representativa de la huella y la medición de parámetros. Tres mediciones de cada parámetro (extremidad delantera y trasera paso longitudes, anchos de frente y trasero base, traslapo entre la extremidad delantera y trasera) se obtuvieron de papel impreso de pie. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: tensión de retención por tubo cónico agujereado 50 mL. El tubo de retención tiene un agujero para respirar, un agujero para pasar la cola y 16 orificios para la circulación de aire. Ratón se mantuvo en el tubo durante 2 h a temperatura ambiente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: programa Experimental de colgar la caja de prueba y el análisis de la huella con la carga de tensión de retención crónica. Análisis de la huella y la caja de colgante de prueba se realizaron en 4 semanas de edad. Entonces, los ratones se dividieron en 'destaca' y 'no-tensionado' grupos. Para el grupo 'estresado', la tensión de restricción se aplicó 6 veces en 2 semanas hasta 12 semanas de edad. Para ambos grupos, análisis de la huella y la caja colgante prueba se realizaron una vez por 2 semanas hasta 12 semanas de edad. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: resultados representativos de los análisis de huella. Análisis de la huella se realizó con 4 semanas de edad Atp1a3+ / − (a3) y los ratones de tipo salvaje (wt) (N = 19 y 17, respectivamente). Entonces, Atp1a3+ / − y tipo salvaje ratones fueron divididos en grupos de 'estrés' y 'no-tensionado'. Se realizaron análisis de la huella para 'no-tensionado' Atp1a3+ / −, 'no tensionado' tipo salvaje, 'estresado' Atp1a3+ / −y '' tipo salvaje ratones de 6 a 12 semanas de edad (abrir círculos, N = 9; abrir plazas, N = 8; círculos sólidos , N = 10; sólidos cuadrados, N = 9, respectivamente). (A) longitud de la extremidad delantera del paso. (B) longitud de la trasera del paso. (C) asimetría de longitud de pasos del miembro anterior. (D) asimetría de longitud de pasos del miembro posterior. (E) ancho entre patas delanteras. Anchura (F) entre los miembros posteriores. (G) traslapo entre la extremidad delantera izquierda y trasera. (H) superposición entre la extremidad delantera derecha y trasera. Los datos son la media ± SD. estadística (t -test para ratones de 4 semanas de edad) y pares t -test con el método de ajuste de Holm para ratones de 6-12 semanas de edad se analizó por R23. # p <.05, para 'no-tensionado' Atp1a3+ / − y 'no-tensionado' ratones de tipo salvaje. p <.05, para 'destaca' Atp1a3+ / − y '' ratones de tipo salvaje. + p <.05, para 'no-tensionado' y 'destacaron' Atp1a3+ / − ratones. Figura 5A -F se ha modificado de la referencia18 con autorización de Elsevier. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6: resultados representativos de colgar pruebas caja. El colgante caja de prueba se realizó con Atp1a3+ / − (a3) y los ratones de tipo salvaje (wt) en 4 semanas de edad. Entonces, Atp1a3+ / − y tipo salvaje ratones fueron divididos en grupos de 'estrés' y 'no-tensionado'. Colgante de tiempo de 4 semanas de edad Atp1a3+ / − (abrir círculos, N = 19) y tipo salvaje (abrir plazas, N = 17) ratones y colgante de tiempo de 6-12 semanas de edad 'no-tensionado' Atp1a3+ − (abrir círculos, N = 9), 'no tensionado' wild type (plazas abiertas N = 8), 'destaca' Atp1a3+ / − (círculos sólidos, N = 10) y '' wild-type (sólidos cuadrados, N = 9) ratones se trazaron sobre una escala logarítmica. Los datos son la media ± SD. estadística (t -test para ratones de 4 semanas de edad) y pares t -test con el método de ajuste de Holm para ratones de 6-12 semanas de edad se analizó por R23. p <.05, para 'estresado' Atp1a3+ / − y '' ratones de tipo salvaje. $ p <.05, para los ratones de tipo salvaje 'no tensionado' y 'estresados'. + p <.05, para 'no-tensionado' Atp1a3+ / − y '' ratones de tipo salvaje. Datos ha sido reimpreso de referencia18 con autorización de Elsevier. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 7: resultados representativos de las curvas de crecimiento. Peso corporal se midió de Atp1a3+ / − (a3) y los ratones de tipo salvaje (wt) en 4 semanas de edad (abrir círculos, N = 19; abrir plazas, N = 17, respectivamente). Entonces, Atp1a3+ / − y tipo salvaje ratones fueron divididos en grupos de 'estrés' y 'no-tensionado'. Pesos entre 6 y 12 semanas de edad de 'no tensionado' del cuerpo Atp1a3+ / − (Abra círculos, N = 9), "no destaca" salvaje-tipo (abrir plazas, N = 8), 'estresado' Atp1a3+ / − (círculos sólidos, N = 10) y '' wild-type (sólido cuadrados, N = 9) se midieron los ratones. Los datos son la media ± SD. estadística (t -test para ratones de 4 semanas de edad) y pares t -test con el método de ajuste de Holm para ratones de 6-12 semanas de edad se analizó por R23. Figura 7 se ha modificado de la referencia18 con autorización de Elsevier. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
El análisis de la huella y la caja colgante prueba Test conductual simple y barato para la función motora de los ratones. Los fenotipos de neurobehavioral en varios modelos de ratón han sido correctamente detectados por estas pruebas. Por ejemplo, acortar la longitud de zancada en esclerosis lateral amiotrófica24, mayor longitud de zancada asimétrica en la ataxia-telangiectasia25, mayor longitud de la superposición de la enfermedad de Huntington26 y distonía27, y base ensanchada de ataxia28,29, Angelman Síndrome30 y distonía31 fueron demostrados mediante el análisis de huella. Además, colgar un tiempo más corto que el de los ratones de control fue observado en modelo de ratón de distrofia muscular de Duchenne32. Así, ambas pruebas que se describe en este documento podría ser útiles para evaluar la disfunción del motor de los ratones.
Hay un paso fundamental de este protocolo para obtener las huellas de sharp. Es muy importante poner un ratón en el papel inmediatamente después de sumergir la parte inferior de extremidades en tinta para evitar que se sequen. Es necesario acabar los inmersión pasos (pasos 2.2.3 y 2.3.3) en poco tiempo. Una desventaja de este protocolo de análisis de la huella es que los parámetros obtenidos se limitan a los simples que no incluyen información temporal (p. ej., duración de la marcha ciclo y paso la secuencia de cada pie) y la información física (p. ej., presión de espacio basado en el panel del LED sensible al tacto). Cuando se requiere información temporal y física, debe utilizarse un aparato de análisis de la marcha automática. Alternativamente, puede obtenerse información temporal del patrón del paso por la cámara de alta velocidad33. Otra desventaja es que la medición de los parámetros en el papel impreso de pie es más laborioso que el análisis de la marcha automática. Para la aplicación en el futuro, se requerirá el desarrollo de un programa de recolección de datos automatizado o semiautomatizado de papel impreso de pie para disminuir los parámetros de medición del esfuerzo realizado.
Para la carga de estrés, número total y la duración por sesión pueden variar en este protocolo. Tensión de restricción se ha realizado con diferentes duraciones y número de aplicaciones (por ejemplo., solo por 5 min34, solo para 24 h35, h 12 x 5 sesiones36y 6 h x 31 sesiones37, revisado en Ref. 20). A nuestro conocimiento, ningún estudio sistemático refiere a los efectos del número total y la duración por sesión en la función motora de los ratones. La actividad de los ratones en el campo abierto es afectada por la sola tensión carga de38 de 1 h o 2 h pero no por la de 15 min19. Duración prolongada de la carga de estrés puede conducir a déficit motor severo. El número de cargas de estrés, la postura de los ratones se convierte en más amplia que el de los ratones no tensionado después de 36 veces de la tensión de carga (1 hora dos veces por semana), pero no después de 30 veces39. Tensión de restricción crónica (6 h al día durante 31 días consecutivos) agrava rotarod rendimiento en el modelo murino de la enfermedad de Parkinson37. Nuestros resultados mostraron el momento de la suspensión de 'destaca' Atp1a3+ / − ratones se convirtió en el más corto que el de los ratones de tipo salvaje 'estresados' después 24 veces de la tensión de carga (a las 12 semanas de edad), pero no después 18 veces o menos (4, 6, 8 y 10 semanas de edad). Por lo tanto, carga de estrés repetido es necesario para la inducción de cierto déficit motor en ratones, aunque la inducción de déficit motor después de un largo período desde el inicio de una sola o varias veces de la tensión de carga no puede ser excluida. Cuando ratones no muestran un fenotipo neurológico en este protocolo, la recomendación es aumentar el número total y la duración de la tensión de carga por sesión. Por el contrario, cuando los ratones demuestran anormalidad de la marcha de una sola o varias veces de la tensión de carga, duración y el número pueden disminuir.
Finalmente, rendimiento de a pie y colgante puede ser afectado por caracteres de comportamiento emocionales (p. ej., ansiedad y actividad) distintos a los de disfunción del motor. Ratones con gran ansiedad y con hiperactividad funcionan a menudo (en vez de a pie) a la caja de gol. Ratones que muestra comportamiento de depresión pueden caminar con paradas frecuentes. Por lo tanto, un patrón aberrante de la huella no puede deberse a déficit motor. Por lo tanto, para confirmar la anormalidad de la marcha sólo debidos a déficit motor, realizar más pruebas de que evaluar características emocionales (actividad: prueba de campo abierto; ansiedad: abrir campo y elevada plus prueba de laberinto; depresión-como comportamiento: forzado baño prueba) después de este protocolo como se describe anteriormente18 es aconsejable.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue apoyado por KAKENHI de JSPS (sociedad japonesa para la promoción de la ciencia) (subvenciones para investigación científica), conceder subsidios de universidades privadas y número 18K 07373 (H.S.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hanging box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/ | |
| Marking pen | ZEBRA | MO-120-MC-BK | |
| Goal box | O’hara & Co. | http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/ | Accessory for apparatus of balanced beam test |
| Boxes | O’hara & Co. | - | Side wall of runway |
| Black ink | Shin-asahi | - | |
| Red ink | Maruyamakogyo | BC-6 | |
| Disposable Petri Dish | Corning | 351008 | Petri dishes (35 mm in diameter) |
| Askul Multipaper Super White J Monochrome A3 | Askul | 701-712 | White paper (29.7 cm x 42 cm x 0.09mm) |
| 50 mL Conical tube | Corning | 430829 | |
| Square drill | KAKURI Corporation | DIY FACTORY (K32-0313) |
References
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