Summary
Mitokondrielt åndedrett er avgjørende for organismebiologi overlevelse; oksygen forbruksraten er derfor en god indikator på mitokondrie helse. I denne protokollen, vi beskrive bruken av et kommersielt tilgjengelig respirometer å måle basal og maksimalt oksygen forbruk priser i live, intakt, og fritt-motile Caenorhabditis elegans.
Abstract
Optimal mitokondrie funksjonen er avgjørende for sunn cellulære aktiviteten, spesielt i celler som har høy energi krav som de i nervesystemet og muskel. Samsvar med dette, mitokondrie dysfunksjon har vært forbundet med en myriade av nevrodegenerative sykdommer, og aging generelt. Caenorhabditis elegans har vært en kraftig modellsystem for Klargjørende mange vanskelighetene med mitokondrie funksjon. Mitokondrielt åndedrett er en god indikator på mitokondrie funksjon nylig utviklede respirometers tilbyr en state-of-the-art plattform for å måle åndedrett i celler. I denne protokollen gir vi en teknikk for å analysere live, intakt C. elegans. Denne protokollen gjelder ~ 7 dager og inneholder trinn for (1) økende og synkronisering av C. elegans, (2) av forbindelser skal injiseres og hydrering sonder, (3) stoff lasting og patron balanse, (4) utarbeidelse av ormen analysen plate og analysen kjøres, og (5) post eksperiment dataanalyse.
Introduction
Adenosin trifosfat (ATP), den viktigste kilden til celleenergien, produseres i mitokondrier av enzymer i elektronet transportkjeden (ETC) i indre mitokondrie membranen. Pyruvate, en nøkkel metabolitten benyttes for mitokondrie ATP produksjon, importeres inn i mitokondrie matrix hvor det er dekarboksyleres å produsere acetyl coenzyme A (CoA). Deretter inn acetyl CoA citric acid syklusen medføre generering av nikotinamid adenine dinucleotide (NADH), en nøkkel elektron carrier molekylet. Som elektroner fra NADH sendes til oksygen via osv, bygge protoner i mitokondrie intermembrane rom, som resulterer i genereringen av en elektrokjemisk forløpning over membranen. Disse protoner vil deretter flyte fra intermembrane plass over denne elektrokjemiske gradering tilbake i mitokondrie matrix gjennom proton pore av ATP syntase, roteringen og syntese av ATP1 (figur 1).
Mitokondrielt funksjon er ikke begrenset til energiproduksjon, men er også avgjørende for kalsium homeostase, reaktive oksygen arter (ROS) scavenging og apoptose, kritisk posisjonering deres funksjon i organismebiologi helse2. Mitokondrielt funksjonen kan vurderes ved hjelp av en rekke analyser, inkludert men ikke begrenset til analyser som måler mitokondrie membran potensial, ATP og ROS og mitokondrie kalsium konsentrasjoner. Men disse analyser gi ett bilde mitokondrie funksjon, og derfor kanskje ikke gir en omfattende oversikt over mitokondrie helse. Siden oksygenopptak ved ATP generasjon er avhengig av en rekke sekvensielle reaksjoner, fungerer det som en bedre indikator på mitokondrie funksjon. Interessant, er variasjoner i oksygen forbruk priser observert som følge av mitokondrie dysfunksjon3,4,5.
Oksygen forbruk priser (OCR) av levende prøver kan måles ved hjelp av teknikker som kan grovt inndeles i to grupper: amperometric oksygen sensorer og porphyrin-baserte fosfor som kan bli slukket av oksygen6. Amperometric oksygen sensorer har vært brukt mye å måle OCR i kulturperler celler, vev, og modellsystemer, slik som C. elegans. Men porphyrin-baserte fosfor som inneholder respirometers har følgende fordeler: (1) de tillater for en side ved side sammenligning av to prøvene i tre eksemplarer, (2) de krever mindre utvalgsstørrelsen (f.eks 20 ormer per brønn versus ~ 2, 000−5, 000 ormer i den kammer)7, og (3) i respirometer kan programmeres til å gjøre fire forskjellige sammensatte injeksjoner på ønsket ganger gjennom eksperimentell rensingen, eliminerer behovet for manuell program.
I denne protokollen er trinnene involvert i bruk en porphyrin-baserte oksygen-sensing respirometer å måle OCR i live, intakt C. elegans beskrevet. Mens det er en skriftlig protokoll for bruk av stort format, høy gjennomstrømning respirometer8, er denne protokollen tilpasset for bruk med en mer budsjett vennlig, tilgjengelig og mindre skala instrument. Denne protokollen er spesielt nyttig for å vurdere forskjellen i OCR mellom to stammer, hvor kreves ikke høy gjennomstrømming screening og bruk ville være overdreven.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: Figur 2 gir en skjematisk oversikt over hele protokollen.
1. vekst og synkronisering av Rundormer befolkningen9,10
- Overføre L4 larver av ønsket genetisk bakgrunn (f.eks N2 [wild type] og sel-12 dyr) på Rundormer vekst medier (NGM) plater (se tabell 1 for oppskriften) fersk plantet med en plen Escherichia coli (OP50)11. Bruk minst to 100 mm eller tre 60 mm plater for hver stamme. Inkuber ormer ved passende vekst temperatur (mellom 15-25 ° C) i 3-4 dager eller til platene er konsentrert med stort antall egg og gravid ormer.
- Vask egg og ormer av platene med ca 6 mL av M9 buffer (se tabell 1 for oppskriften) per 100 mm plate av nematoder og overføre dem med glass Pasteur Pipetter i personlige 15 mL sentrifuge rør for hver stamme. Nedspinning disse rør for 3 min på 6,180 x g og leveringstanken ut M9 bufferen, beholder bare de dyr og egg pellet.
- Legge til 3-4 mL bleike løsning (se tabell 1 for oppskriften) hvert rør og midlertidig vortex 6 min. legge M9 bufferen fylle hver rør og spinne på 6,180 x g for 1 min og Sug opp nedbryting. Gjenta denne vask med M9 tre ganger og flytte egg pellets til en frisk 15 mL tube med ca 9 mL av M9 buffer.
- Synkronisere fersk skravert ormer av nutating ved 20 ° C i 16 – 48 h. Spin disse rør ned 6,180 x g for 1,5 min og satte synkronisert L1 dyrene på NGM retter fersk plantet med en plen av OP50 (ca 6000-10.000 dyr per 100 mm plate) og holde på 20 ° C.
- Disse dyrene kommer L4 larvestadiet etter ~ 42 h. På denne tiden, flytte L4 Larvene bruker en platina hakke å OP50 seeded NGM plater som inneholder 0,5 mg / mL 5-fluoro-2'-deoxyuridine (FUdR) for å hindre dem fra å produsere avkom.
Merk: Kontroller at innen et eksperiment alle stammer er synkronisert for en lignende mengde tid. FUdR behandling Steriliserer dyrene og hindrer egg legging og avkom produksjon, som kan påvirke OCR. Disse sterilisert dyr vil bli analysert neste dag (dag 1 voksen dyr på ~ 66 h) for analysen. FUdR har blitt rapportert å påvirke fysiologi og levetid av visse mutant ormer. Derfor bør dette tas i betraktning når stoffet brukes til sterilisering12,13,14. Ormer kan også steriliseres ved hjelp av feminizing mutasjoner som fem-1(hc17) eller fem-3(e2006). Disse mutasjonene kan imidlertid påvirke mitokondrie funksjon.
2. forberedelse av forbindelser skal injiseres og hydrering av sonder
Merk: Under analysen kjøres, både basal og maksimal åndedrett utbredelsen av nematoder måles. Maksimal åndedrett utløses i dyr på tillegg av karbonyl cyanid-4 (trifluormethoxy) phenylhydrazone (FCCP), en uncoupling ionophore som forstyrrer den mitokondrie membranen potensial og dermed ATP syntese av transport protoner gjennom mitokondrie membran, mens proton pumpe, elektronet transport og oksygenforbruk fortsette4,15 uncoupled fra ATP syntese (figur 1). Det siste trinnet i analysen omfatter tillegg av Natriumazid (NaN3), et stoff som hemmer komplekser IV og V i ETC, tillater en å avgjøre ikke-Mitokondrielt åndedrett16 (figur 1). Følgende trinn kan utføres dagen før selve analysen kjøre.
- Forberede 1 mL lager løsninger av FCCP (10 mM dimethyl sulfoxide [DMSO]: 1000 x den endelige analyse konsentrasjonen) og NaN3 (400 mM i dH2O: 10 x endelige analysen konsentrasjon) og butikk på 20 ° C.
Merk: Kjøre en konsentrasjon kurve å optimalisere konsentrasjonen av FCCP kreves for å lokke fram maksimal OCR svar for hvert instrument og laboratoriet innstilling. - Hydrat sensor patronen ved å legge 200 µL av dH2O til hver brønn (og omkringliggende reservoaret) på plate, sikre at sensoren sonder er neddykket i dH2O og lagre over natten i romtemperatur.
Merk: Kassetten sonder kan stå senkes opptil 72 h men i en langvarig fuktighet, platene skal være pakket i parafin film og lagret på 4 ° C. Hvis overnatting hydrering ikke er mulig, bør sensor kassetten være hydrert minst 4 h før analysen. - Slår av varmeelementet respirometer grensesnittet og lagre maskinen inne en inkubator for 15 ° C over natten å lavere kjernetemperatur i instrumentet å forhindre dyr fra overoppheting under analysen kjøres.
Merk: Respirometer er utstyrt med varmekabel men kjøles ikke ned. Innen en 15 ° C inkubator har respirometer en stabil temperatur mellom 18-22 ° C, som er en sunn temperatur for C. elegans vedlikehold.
3. stoff lasting og patron balanse
- Pipetter ut og kast på dH2O brukes til å hydrat sensoren prober og erstatte den med 200 µL av calibrant løsning (pH 7.4) i hver brønn. Fortynn FCCP lager løsningen 100 µM FCCP i dH2O og legge til 20 µL av utvannet løsningen til injeksjon port A i sensor kassetten. Legge til 22 µL av 400 mM Natriumazid port B av senor kassetten.
- Slå på respirometer og på startsiden Velg Start; Maler-siden vises. På malsiden, velg tomt eller en tidligere designet mal; siden gruppene vises. På siden grupper velger brønnene A og H som bakgrunn brønnene og tilordne de resterende 6 brønnene i gruppene i henhold til eksperimentelle planen.
- Trykke på pilen nederst til høyre til å gå til siden protokollen. Kontroller at knappene likevekt, Basal og injeksjoner 1 og 2 er valgt på siden protokollen. På denne siden, justere antallet målinger av basale OCR, samt maksimal OCR (etter injeksjon 1 med FCCP) og ikke-Mitokondrielt OCR (etter injeksjon 2 med Natriumazid).
Merk: Hver måling innledes med en blanding og vent trinn og tidsrammer for disse parameterne er vist i tabell 2. - Velg pilen nederst i høyre hjørne og bedt om å laste sensor patron platen vises. Sikre at sensoren patron platen er lastet inn i riktig retning, følge instruksjonene på det påminnelse skjermbildet. Respirometer vil nå equilibrate kassetten.
Merk: Denne balanse gir god tid til å plassere dyrene til å være assayed i riktige brønner av cellen plate.
4. forberedelse av ormen plate og analysen kjøre
- Legge til 200 µL av M9 buffer i hver av 8 av cellen plate og i reservoarene rundt brønnene.
- Plukke ~ 100 ormer fra hver stamme på unseeded NGM plater og la hvile i 2-3 min. våt slutten av platina plukke med M9 buffer og plukke 20 år-synkroniserte dyr i brønner B-G, forlater bakgrunn brønnene A og H tom.
Merk: Etter lasting hver Vel, vente ca 2 minutter å la dyrene å bosette til bunnen av brønnene. Det er også tilrådelig at en orm nummer kurve kjøres for å optimalisere ormen antall per brønn for hvert instrument og laboratoriet innstilling. - Nå, i respirometer bør kalibreres og klikker OK på skjermen, platen inneholder kalibrering buffer ut og kan fjernes fra respirometer, mens sensor kassetten holder seg inne apparatet. Erstatte calibrant plate med platen inneholder dyr. Laste inn platen og Lukk døren ved å treffe Fortsett og la analysen kjøres.
5. etter eksperiment dataanalyse
- Når Kjør analysen er fullført, følg instruksjonene på skjermen og fjerne celle plate og sensor kassetten og sett inn en flash-stasjon til USB-porten til å lagre sporingsinformasjon i .war format. Fjern sensor kassetten og tillate dyr å bosette til bunnen av brønnene for ca 2 min. plassere celle platene under en stereo dissekere mikroskop og antall dyr per brønn.
- Åpne analyseprogramvare på datamaskinen og åpne kategorien normalisering å normalisere OCR dyr tall. Bruke riktig etiketter for de ulike gruppene under kategorien endre og eksporterer du filen som en prisme fil for videre analyse.
Merk: Gjennomsnittet av fem første målingene, før tillegg av FCCP er det basale OCR, mens gjennomsnittet av fem målene etter FCCP tillegg er maksimal OCR og gjennomsnittet av de siste fem mål (minimum to målinger skal gjøres) etter natrium azide tillegg er ikke-Mitokondrielt åndedrett. Analysen bør gjentas tre ganger for å sikre reproduserbarhet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved hjelp av protokollen beskrevet heri, OCR vill type dyr og tre forskjellige sel-12 mutant stammer var bestemt. sel-12 koder C. elegans ortholog presenilin17. Mutasjoner i menneskelig presenilin er den vanligste genetiske avvik knyttet til utviklingen av familiær Alzheimers18. Våre studier har vist opphøyet mitokondrie kalsium nivåer i sel-12 mutant dyr sammenlignet med wild type dyr3. Siden kalsium feilregulering kan føre til endrede mitokondrie funksjonen3,19,20, OCR i sel-12 mutant og vill type dyr ble målt for å undersøke effekten av sel-12 mutasjoner Mitokondrielt funksjon og helse. Wild type dyr konsekvent viste basale OCR priser under 5 pmol/min/orm, mens alle tre stammer av sel-12 mutanter viste betydelig opphøyet OCR ~ 7 pmol/min/orm (Figur 3 og Figur 4). Etter tillegg av FCCP, som forventet, var det en økning i OCR vill type samt sel-12 mutanter (Figur 3 og figur 5). Wild type dyr viste maksimal OCR ~ 7 pmol/min/orm, mens sel-12 mutanter hadde OCR ~ 10 pmol/min/orm (figur 5).
Figur 1: skjematisk av de store aktørene som er involvert i cellular respirasjon og effekten av FCCP og natrium azide. Overføring av elektroner fra NADH til osv komplekse jeg resulterer i genereringen av en elektrokjemisk forløpning over interne mitokondrie membran som protoner få pumpes over den. Protoner strømmer tilbake inn i mitokondrie matrix fra intermembrane plass via komplekse V resultater i ATP syntese. Tillegg av FCCP resulterer i uncoupling av denne prosessen ved å forstyrre mitokondrie membran potensialet og dermed ATP syntese, mens oksygenforbruk fortsetter, slik at for måling av maksimal OCR. Natriumazid (NaN3) er en inhibitor av komplekser IV og V, og dermed tillater for måling av ikke-Mitokondrielt åndedrett. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Skjematisk av trinnene involvert i måling av OCR i C. elegans. De fem trinnene involvert i analysen oppsettet og kjøre (venstre) og en tidsramme for hvert trinn (høyre). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: karakteristisk OCR profil i C. elegans respirometry. De fem første målingene viser basale åndedrett, etterfulgt av fem målinger av maksimal og fem målinger av ikke-Mitokondrielt åndedrett etter FCCP og natrium azide injeksjoner, henholdsvis. Feilfelt representerer standardfeilen for måling (SEM). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Basal åndedrett i wild type og ulike sel-12 mutanter. Gjennomsnittlig basale åndedrett i dag 1 voksen alder-matchet vill type og sel-12 mutanter. Data utarbeidet fra tre analysen gjentas. Feilfelt representerer SEM og *** betyr p < 0,0001. p -verdier ble beregnet ved hjelp av en tosidig t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: Maksimal åndedrett i wild type og ulike sel-12 mutanter. Gjennomsnittlig maksimal åndedrett i dag 1 voksen alder-matchet vill type og sel-12 mutant dyr etter FCCP injeksjon. Data utarbeidet fra tre analysen gjentas. Feilfelt representerer SEM og *** betyr p < 0,0001. p -verdier ble beregnet ved hjelp av en tosidig t-test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| M9 buffer (1 L) | |||
| dH2O | 1000 mL | ||
| NaCl | 5 g | ||
| KH2PO4 | 3 g | ||
| Na2HPO4 | 6 g | ||
| 1 M MgSO4 | 1 mL * legge etter autoklavering | ||
| Delt mellom 2 flasker: 500 mL. Autoclave på flytende syklus (15 min eksponering) | |||
| Bleike løsning (50 mL) | |||
| dH2O | 36 mL | ||
| Bleach | 14 mL | ||
| 10 N NaOH | 800 ΜL | ||
| Standard Rundormer vekst medier (NGM) plater | |||
| 1 L | 0,5 L | 0,25 L | |
| NaCl | 3 g | 1,5 g | 0,75 g |
| Bacto-agar | 17 g | 8,5 g | 4,25 g |
| Bacto-pepton | 2.5 g | 1,25 g | 0.625 g |
| a. autoclave på flytende syklus (45 min eksponering), la avkjøles til ~ 60 ° C og deretter bruke steril teknikk og legge til følgende: | |||
| 1 L | 0,5 L | 0,25 L | |
| 1 M CaCl2 | 1 mL | 0,5 mL | 0,25 mL |
| 1 M MgSO4 | 1 mL | 0,5 mL | 0,25 mL |
| 1 M KPO4 | 25 mL | 12.5 mL | 6,25 mL |
| 5 mg/mL kolesterol | 1 mL | 0,5 mL | 0,25 mL |
| b. virvel for å blande grundig etter hvert tillegg. Etter at alle filer er gjort, helle plater | |||
Tabell 1: Oppskrifter for NGM plater, M9 buffer og bleike løsning.
| Kalibrering | Basal | FCCP | Natriumazid |
| Port(er): A | Port(er): B | ||
| Balanse: Ja | Mix: 00:02:00 | Mix: 00:02:00 | Mix: 00:02:00 |
| Vent: 00:00:30 | Vent: 00:00:30 | Vent: 00:00:30 | |
| Mål: 00:02:00 | Mål: 00:02:00 | Mål: 00:02:00 | |
| Sykluser: 5 | Går: 5 | Sykluser: 2−5 | |
| Varighet: 00:22:30 | Varighet: 00:22:30 | Varighet: 00:09:00 |
Tabell 2: karakteristisk analysen parametere i C. elegans respirometry.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mitokondrielt åndedrett er en innsiktsfull indikator på mitokondrie funksjon; Derfor er å kunne måle oksygen forbruk priser i et biologisk system, enten i vitro eller i vivo svært verdifull. Respirometers forstand oksygen nivåer ved hjelp av porphyrin-baserte fosfor som får slukket av oksygen eller via amperometric oksygen sensorer som stoler på generering av en elektrisk gjeldende forhold til oksygen press. Clark elektrode faller sistnevnte kategori og har vært brukt mye i litteratur, spesielt mens analysere åndedrett i C. elegans. Men gjør behovet for en stor utvalgsstørrelsen og manglende evne til å vurdere mer enn ett utvalg samtidig amperometric oksygen sensorer ineffektiv.
Denne protokollen gir en enkel guide å måle OCR i live, intakt C. elegans uten isolere mitokondriene, en prosess som potensielt kan påvirke den mitokondrie membranen potensial, og derfor OCR. Gitt at dyr viser forskjellige OCR gjennom ulike stadier, skal dyr som brukes i denne protokollen alder synkronisert. Yngre dyr har lavere OCR sammenlignet med voksen dyr og OCR nivåene kan slippe igjen som dyr alder ytterligere3. C. elegans er også steriliseres ved bruk av FUdR å sikre at OCR ikke er forvirret av tilstedeværelsen av avkom. Likevel, hvis dyr av varierende størrelse undersøkes, strategier for normalisering må tas.
Denne protokollen bruker en platina hakke å overføre dyr til analysen plate. I motsetning til væske overføring av dyr kan dette manipulasjon forskeren til å nøye undersøke og avgjøre helsen til dyrene før og under overføringen. Også det gir bedre kontroll av ormen og hindrer innføring av egg og døde. Siden dyrene er levende og aktiv under analysen kjøre, er variasjon sannsynlig å oppstå fra sonden posisjonering. Analyser bør derfor gjøres i tre eksemplarer og skal gjentas minst tre ganger. Doble kontrollere dyr teller innlegget analyse er også viktig for normalisering dyr tall. En stor ulempe av denne protokollen er det manglende evne å sammenligne mer enn to utvalg, uten at tall av replikat i en singel-analysen. Til tross for denne begrensningen, kan denne protokollen være et meget kraftig søkeverktøy i å analysere OCR når du sammenligner to genotyper eller betingelser. Dessuten, denne protokollen kan lett tilpasses undersøke OCR dyr dyrket på forskjellige mat kilder, kosttilskudd eller medikamentelle behandlinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å erkjenne Dr. Kevin Bittman for hans veiledning i å etablere Seahorse XFp i laboratoriet. National Institutes of Health gir GM088213 støttet dette arbeidet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 mm, 60 mm Petri dishes | Kord-Valmark Labware Products | 2900, 2901 | |
| 1.5 mL centrifuge tubes | Globe Scientific | 6285 | |
| 15 mL conical tubes | Corning | 430791 | |
| 22 × 22 mm coverslip | Globe Scientific | 1404-10 | |
| 50 mL conical tubes | Corning | 430829 | |
| Agar | Fisher Scientific | BP1423-2 | |
| Bacto peptone | BD, Bacto | 211677 | |
| Bacto tryptone | BD, Bacto | 211705 | |
| Bacto yeast extract | BD, Bacto | 212705 | |
| Bleach | Generic | ||
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2·2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 | |
| Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) | Abcam | ab120081 | |
| Cholesterol | Fisher Scientific | C314-500 | |
| Deionized water (dH2O) | |||
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Thomas Scientific | C987Y85 | |
| Glass Pasteur pipettes | Krackeler Scientific | 6-72050-900 | |
| Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4·7H2O) | Fisher Scientific | BP213-1 | |
| Potassium phosphate dibasic (K2HPO4) | Fisher Scientific | BP363-1 | |
| Potassium phosphate monobasic (KH2PO4) | Fisher Scientific | P285-500 | |
| Sodium chloride | Fisher Scientific | BP358-10 | |
| Sodium hydroxide (NaOH) | Fisher Scientific | BP359-500 | |
| Sodium phosphate dibasic anhydrous (Na2HPO4) | Fisher Scientific | BP332-1 | |
| Seahorse XFp Analyzer | Agilent | ||
| Seahorse XFp FluxPak | Agilent | 103022-100 | |
| Sodium Azide | Sigma-Aldrich | S2002 |
References
- Nelson, D. L., Cox, M. M. Ch. 19. Lehninger Principles of Biochemistry. Ahr, K. , W. H. Freeman and Company. 707-772 (2008).
- Marchi, S., et al. Mitochondrial and endoplasmic reticulum calcium homeostasis and cell death. Cell Calcium. 69, 62-72 (2018).
- Sarasija, S., et al. Presenilin mutations deregulate mitochondrial Ca(2+) homeostasis and metabolic activity causing neurodegeneration in Caenorhabditis elegans. eLife. 7, (2018).
- Luz, A. L., et al. Mitochondrial Morphology and Fundamental Parameters of the Mitochondrial Respiratory Chain Are Altered in Caenorhabditis elegans Strains Deficient in Mitochondrial Dynamics and Homeostasis Processes. PLoS One. 10, e0130940 (2015).
- Ryu, D., et al. Urolithin A induces mitophagy and prolongs lifespan in C. elegans and increases muscle function in rodents. Nature Medicine. 22, 879-888 (2016).
- Perry, C. G., Kane, D. A., Lanza, I. R., Neufer, P. D. Methods for assessing mitochondrial function in diabetes. Diabetes. 62, 1041-1053 (2013).
- Schulz, T. J., et al. Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress. Cell Metabolism. 6, 280-293 (2007).
- Koopman, M., et al. A screening-based platform for the assessment of cellular respiration in Caenorhabditis elegans. Nature Protocols. 11, 1798-1816 (2016).
- Sarasija, S., Norman, K. R. Analysis of Mitochondrial Structure in the Body Wall Muscle of Caenorhabditis elegans. Bio-protocol. 8, (2018).
- Sarasija, S., Norman, K. R. Measurement of ROS in Caenorhabditis elegans Using a Reduced Form of Fluorescein. Bio-protocol. 8, (2018).
- Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An introduction to worm lab: from culturing worms to mutagenesis. Journal of Visualized Experiments. 47 (47), (2011).
- Aitlhadj, L., Sturzenbaum, S. R. The use of FUdR can cause prolonged longevity in mutant nematodes. Mechanisms of Ageing and Development. 131, 364-365 (2010).
- Rooney, J. P., et al. Effects of 5'-fluoro-2-deoxyuridine on mitochondrial biology in Caenorhabditis elegans. Experimental Gerontology. 56, 69-76 (2014).
- Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. FUdR causes a twofold increase in the lifespan of the mitochondrial mutant gas-1. Mechanisms of Ageing and Development. 132, 519-521 (2011).
- Heytler, P. G., Prichard, W. W. A new class of uncoupling agents--carbonyl cyanide phenylhydrazones. Biochemical and Biophysical Research Communications. 7, 272-275 (1962).
- Massie, M. R., Lapoczka, E. M., Boggs, K. D., Stine, K. E., White, G. E. Exposure to the metabolic inhibitor sodium azide induces stress protein expression and thermotolerance in the nematode Caenorhabditis elegans. Cell Stress Chaperones. 8, 1-7 (2003).
- Levitan, D., Greenwald, I. Facilitation of lin-12-mediated signalling by sel-12, a Caenorhabditis elegans S182 Alzheimer's disease gene. Nature. 377, 351-354 (1995).
- Sherrington, R., et al. Cloning of a gene bearing missense mutations in early-onset familial Alzheimer's disease. Nature. 375, 754-760 (1995).
- Glancy, B., Balaban, R. S. Role of mitochondrial Ca2+ in the regulation of cellular energetics. Biochemistry. 51, 2959-2973 (2012).
- Sarasija, S., Norman, K. R. A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans. Genetics. 201, 1453-1466 (2015).
