胃癌患者由来異種移植片モデルおよび原発細胞株の確立
Summary
現在のプロトコルは、外科的胃癌サンプルから患者由来異種移植片(PDX)モデルおよび原発癌細胞株を確立する方法を説明する。この方法は、創薬やがん生物学の研究に役立つツールです。
Abstract
腫瘍生物学の理解を深め、治療薬の有効性を調べる前臨床モデルの使用は、がん研究の鍵です。前臨床研究のための多くの確立された胃癌細胞株および多くの従来のトランスジェニックマウスモデルがあるが、インビトロおよびインビボモデルの欠点は、その適用を制限する。これらのモデルの特性は培養において変化したため、腫瘍の不均一性をモデル化することはなくなり、その応答はヒトの応答を予測することができませんでした。したがって、腫瘍の不均一性をよりよく表す代替モデルが開発されている。患者由来異種移植片(PDX)モデルは、癌細胞の組織学的外観を維持し、腫瘍内不均一性を保持し、腫瘍微小環境の関連するヒト成分をよりよく反映する。しかし、通常、多くの胃患者の予想生存期間よりも長いPDXモデルの開発には4~8ヶ月かかります。このため、原発性癌細胞株の確立は、薬物応答研究のための効果的な補完的な方法である可能性がある。現在のプロトコルは、外科的胃癌サンプルからPDXモデルおよび原発癌細胞株を確立する方法を説明する。これらの方法は、創薬やがん生物学の研究に有用なツールを提供します。
Introduction
胃癌は、世界で5番目に一般的な癌であり、癌死の第3の主要な原因である。2018年には、世界的に100万人以上の新しい胃癌症例が診断され、推定783,000人がこの疾患1によって死亡した。胃癌の発生率と死亡率は、北東アジア諸国2、3で非常に高いままです。がん治療の分野で大きな進歩を遂げたにもかかわらず、進行性胃癌患者の予後は依然として乏しく、5年生存率は約25%4,5,6, 7,.したがって、胃癌に対する新たな治療戦略の開発が急務である。
胃癌の治療は、その高い不均一性8、9のために困難です。このように、精密医療を実現するために腫瘍の不均一性の課題にどう取り組むかという問題は、がん研究の中心です。インビトロおよびインビボモデルは、胃癌の異種メカニズムおよび生物学を解明する上で重要な役割を果たす。しかし、前臨床研究のための多数の胃癌細胞株および多くの従来のトランスジェニックマウスモデルがあるが、これらのモデルの欠点は、その用途を制限する10.これらのモデルの特性は培養において変化したため、腫瘍の不均一性をモデル化することはなくなり、その応答はヒト11における応答を予測できなかった。これらの問題は、標的薬に反応するがん患者のサブグループを特定する可能性を著しく制限する。原発性腫瘍の短期的な培養は、抗癌薬理学的特性を調査するための比較的迅速かつパーソナライズされた方法を提供し、これはおそらくパーソナライズされた癌治療の特徴となるでしょう。
患者由来異種移植片(PDX)は、薬物応答プロファイリング12の代替前臨床モデルとして好ましい。さらに、PDXモデルは癌13、14の開始および進行を研究するための強力な用具を提供する。PDXモデルは、癌細胞の組織学的外観を維持し、腫瘍内不均一性を保持し、腫瘍微小環境15、16の関連するヒト成分をよりよく反映する。しかし、広く使用されているPDXモデルの限界は、ヒト固形腫瘍を確立し、連続的に伝播するための低い成功率である。本研究では、PDXモデルおよび一次細胞株を確立するためのまともに成功した方法について述べる。
Protocol
Representative Results
Discussion
胃癌は、限られた治療選択肢を持つ積極的な疾患です。したがって、胃癌のモデルは、クリニック4、8、17への直接翻訳で機能的研究を可能にする重要なリソースとなっています。ここでは、胃癌PDXモデル及び一次細胞株を確立する方法及びプロトコルについて述べた。重要なことに、胃癌標本の形態学的および生物学的?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この研究は、中国国立自然科学財団(81572392)によって支援されました。中国国家主要研究開発プログラム(2016YFC1201704);広東特別支援プログラムの先端科学と技術革新的な若者の才能(2016TQ03R614)。
我々は、特に数字の準備に役立つ広州サジェンバイオテック株式会社に感謝します。
Materials
| 40 μm Cell Strainer | Biologix, Shandong, China | 15-1040 | |
| Biological Microscope | OLYMPUS, Tokyo, Japan | OLYMPUS CKX41 | |
| Centrifuge | Eppendorf, Mittelsachsen, Germany. | 5427R | |
| CO2 Incubator | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology, Shanghai, China | L40601 | |
| Electro-Thermostatic Water Cabinet | Yiheng, Shanghai, China | DK-8AXX | |
| Fetal bovine serum | Wisent Biotechnology, Vancouver, Canada | 86150040 | |
| Isoflurane | Baxter, China | CN2L9100 | |
| Live Tissue Kit Cryo Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2601 | |
| Live Tissue Thaw Kit | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen, Beijing, China | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilin&streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 15140122 | |
| Red blood cell lysis buffer | Solarbio, Beijing, China | R1010 | |
| RPMI-1640 medium | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 8118367 | |
| Surgical Suture Needles with Thread | LingQiao, Ningbo, China | 3/8 arc 4×10 | |
| Tissue-processed molds and auxiliary blades | Celliver Biotechnology, Shanghai, China | LT2603 | |
| Trypsin-EDTA | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 2003779 | |
| Type 1 collagenase | Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, California, USA | 17100017 |
References
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