Graft-versus-Host-Krankheit ist eine große Komplikation nach allogenen Knochenmarktransplantation. Dendritische Zellen spielen eine entscheidende Rolle bei der Pathogenese der Transplantat-versus-Host-Krankheit. Der aktuelle Artikel beschreibt eine neuartige Knochenmarktransplantationsplattform, um die Rolle dendritischer Zellen bei der Entwicklung von Transplantat-versus-Host-Krankheit und dem Transplantat-versus-Leukämie-Effekt zu untersuchen.
Ein Abonnement von JoVE ist erforderlich, um diesen Inhalt anzuzeigen. Melden Sie sich an oder beginnen Sie noch heute mit einer kostenlosen Testphase.
Methodenartikel
Knochenmarktransplantationsplattform zur Untersuchung der Rolle dendritischer Zellen bei Graft-versus-Host-Krankheit
* These authors contributed equally
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Allogene Knochenmarktransplantation (BMT) ist eine wirksame Therapie bei hämatologischen Malignitäten aufgrund des Transplantat-versus-Leukämie-Effekts (GVL), um Tumore auszurotten. Jedoch, seine Anwendung ist durch die Entwicklung der Transplantat-versus-Host-Krankheit (GVHD), eine große Komplikation von BMT begrenzt. GVHD wird evoziert, wenn T-Zellen in den Spendertransplantaten alloantigen erkennen, das von Empfängerzellen exprimiert wird, und unerwünschte immunologische Angriffe auf gesunde Gewebe des Empfängers durchführen. So sind traditionelle Therapien entwickelt, um Spender T-Zell Alloreaktivität zu unterdrücken. Diese Ansätze beeinträchtigen jedoch den GVL-Effekt erheblich, so dass das Überleben des Empfängers nicht verbessert wird. Das Verständnis der Auswirkungen therapeutischer Ansätze auf BMT, GVL und GVHD ist daher von wesentlicher Bedeutung. Aufgrund der Antigen-präsentations- und Zytokin-Sekretionskapazitäten zur Stimulierung von Spender-T-Zellen spielen empfänger dendritische Zellen (DCs) eine wichtige Rolle bei der Induktion von GVHD. Daher wird die Ausrichtung von Empfänger-DCs zu einem potenziellen Ansatz für die Steuerung von GVHD. Diese Arbeit bietet eine Beschreibung einer neuartigen BMT-Plattform, um zu untersuchen, wie Host DCs GVH- und GVL-Antworten nach der Transplantation regulieren. Ebenfalls vorgestellt wird ein effektives BMT-Modell zur Untersuchung der Biologie von GVHD und GVL nach der Transplantation.
Einleitung
Allogene hämatopoetische Stammzelltransplantation (BMT) ist eine wirksame Therapie zur Behandlung hämatologischer Malignome1,2 durch den Transplantat-versus-Leukämie-Effekt (GVL)3. Spenderlymphozyten führen jedoch immer unerwünschte immunologische Angriffe auf Empfängergewebe ein, ein Prozess, der als Transplantat-versus-Host-Krankheit (GVHD)4bezeichnet wird.
Murine Modelle von GVHD sind ein wirksames Werkzeug, um die Biologie der GVHD und die GVL-Antwort5zu studieren. Mäuse sind ein kostengünstiges Forschungsti....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Protokoll
Die experimentellen Verfahren wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee der University of Central Florida genehmigt.
1. GVHD-Induktion
HINWEIS: Die allogene Knochenmark-Zelltransplantation (BM) (Schritt 1.2) erfolgt innerhalb von 24 h nach beeiritierter Bestrahlung. Alle unten beschriebenen Verfahren werden in einer sterilen Umgebung durchgeführt. Führen Sie das Verfahren in einer Gewebekulturhaube durch und verwenden Sie gefilterte Reagenzien.
- Tag 0: Bereiten Sie die Empfängermäuse vor.
- Verwenden Sie weibliche Wildtyp-Mäuse (WT) auf einem BALB/c-Hintergrund (CD45.2+ H2k<....
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Ergebnisse
Das große MHC-Mismatched-B6-Modell (H2kb)-BALB/C (H2kd) entsprach eng der GVHD-Entwicklung nach der Transplantation (Abbildung 2). Alle sechs zuvor von Cooke et al.16 festgestellten GVHD-Symptome traten bei den mit WT-B6-T-Zellen transplantierten Empfängern auf, nicht jedoch bei den Empfängern, die mit BM allein transplantiert wurden (Schritt 1.5), die die GVHD-negative Gruppe darstellten. In diesem Modell gibt es.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Diskussion
Die Verwendung von Stammzellen für eine bestimmte Person ist ein effektiver Ansatz zur Behandlung von fortgeschrittenen und resistenten Krebsarten18. Kleine Molekülpharmazeutika sind jedoch seit langem ein Hauptfokus der personalisierten Krebstherapie. Andererseits kann in der Zelltherapie eine Vielzahl von Wechselwirkungen zwischen Spender und Wirt die Behandlungsergebnisse entscheidend beeinflussen, wie z.B. die Entwicklung von GVHD nach BMT1.
.......
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte.
Danksagungen
Diese Studie wird unterstützt durch das Start-up-Stipendium des University of Central Florida College of Medicine (an HN), das Start-up-Stipendium des University of Pittsburgh Medical Center Hillman Cancer Center (an HL), das United States NIH Grant #1P20CA210300-01 und das vietnamesische Gesundheitsministerium Grant #4694/QD-BYT (zu PTH). Wir danken Dr. Xue-zhong Yu von der Medical University of South Carolina für die Bereitstellung von Materialien für die Studie.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 0,5 M EDTA pH 8,0 100ML | Fisher Scientific | BP2482100 | MACS-Puffer |
| 10X PBS | Fisher Scientific | BP3994 | MACS-Puffer |
| A20 B-Zell-Lymphom | Universität von Zentralflorida | Inhouse-GVL-Experiment | |
| ACC1 fl/fl | Jackson Lab | 30954 | GVL-Experiment |
| ACC1 fl/fl CD4cre | Universität von Zentralflorida | GVL-Experiment | |
| Anti-Biotin MicroBeads | Miltenyi Biotec | 130-090-485 | T-Zell-Anreicherung |
| Anti-Mensch/Maus CD45R (B220) | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-85 | T-Zell-Anreicherung |
| Anti-Maus B220 FITC | Thermo Fisher Scientific | 10452-85 | Durchflusszytometrie-Analyse |
| Anti-Maus CD11c- AF700 | Thermo Fisher Scientific | 117319 | Durchflusszytometrie-Analyse |
| Anti-Maus CD25 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0251-82 | Durchflussfärbung |
| Anti-Maus CD4 Biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-0041-86 | T-Zell-Anreicherung |
| Anti-Maus CD4 eFluor® 450 (Pacific Blue® Ersatz) | Thermo Fisher Scientific | 48-0042-82 | Durchflussfärbung |
| Anti-Maus CD45.1 PE | Thermo Fisher Scientific | 12-0900-83 | Durchflusszytometrische Analyse |
| Anti-Maus CD8a APC | Thermo Fisher Scientific | 17-0081-83 | Durchflusszytometrische Analyse |
| Anti-Maus H-2Kb PerCP-Fluor 710 | Thermo Fisher Scientific | 46-5958-82 | Durchflusszytometrische Analyse |
| Anti-Maus MHC Klasse II Antikörper APC | Thermo Fisher Scientific | 17-5320-82 | Durchflusszytometrische Analyse |
| Anti-Maus TER-119 Biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-85 | T-Zell-Anreicherung |
| Anti-Thy1.2 | Bio Excel | BE0066 | BM Generation |
| B6 fB-/- Mäuse | Universität von Zentralflorida | Inhouse | Empfänger |
| B6. Ly5.1 (CD45.1+) Mäuse | Charles River | 564 | Spender |
| BALB/c Mäuse | Charles River | 028 | Transplantatempfänger |
| C57BL/6 Mäuse | Charles River | 027 | Spender/Empfänger |
| CD11b | Thermo Fisher Scientific | 13-0112-85 | T-Zell-Anreicherung |
| CD25-Biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-0251-82 | T-Zell-Anreicherung |
| CD45R | Thermo Fisher Scientific | 13-0452-82 | T-Zell-Anreicherung |
| CD49b Monoklonaler Antikörper (DX5)-Biotin | Thermo Fisher Scientific | 13-5971-82 | T-Zell-Anreicherung |
| Zellsieb 40 μM | Thermo Fisher Scientific | 22363547 | Zellvorbereitung |
| Zellsieb 70 μM | Thermo Fisher Scientific | 22363548 | Zellvorbereitung |
| D-Luciferin | Goldbio | LUCK-1G | Lebendtierbildgebung |
| Fötales Rinderserum (FBS) | Atlanta Bilogicals R& D-System | D17051 | Zellkultur |
| Durchflusszytometrie-Röhrchen | Fisher Scientific | 352008 | Durchflusszytometrie-Analyse |
| FVB/NCrl | Charles River | 207 | Spender |
| Lipopolysacharid (LPS) | Millipore Sigma | L4391-1MG | DC reife |
| LS-Säule | Mitenyi Biotec | 130-042-401 | Zellvorbereitung |
| MidiMACS | Miltenyi Biotec | 130-042-302 | T-Zell-Anreicherung |
| New Brunswick Galaxy 170R Inkubator | Eppendorf | Galaxy 170 R | Zellkultur |
| Penicilin+StreptomycinPenicillin/Streptomycin (10.000 Einheiten Penicillin / 10.000 mg/ml Streptomycin) | GIBCO | 15140 | Media |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scienctific | 11875-093 | Media |
| TER119 | Thermo Fisher Scientific | 13-5921-82 | T-Zell-Anreicherung |
| Xenogen IVIS-200 | Perkin Elmer | Xenogen IVIS-200 | Bildgebung von lebenden Tieren |
| X-RAD 320 Biologischer Bestrahlungspräzision | RÖNTGEN | X-RAD 320 | Ganzkörperbestrahlung |
Referenzen
- Shlomchik, W. D. Graft-versus-host disease. Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).
- Appelbaum, F. R. Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature. 411, 385-389 (2001).
- Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M.
Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Nachdrucke und Genehmigungen
