Denna artikel presenterar experimentella förfaranden för att bedöma minnesförsämringar i pilocarpin-inducerad epileptiska möss. Detta protokoll kan användas för att studera patofysiologiska mekanismer av epilepsi-associerade kognitiv försämring, som är en av de vanligaste samsjuklighet i epilepsi.
Kognitiv svikt är en av de vanligaste samsjukligheterna i temporallobepilepsi. För att sammanfatta epilepsi-associerade kognitiv försämring i en djurmodell av epilepsi genererade vi pilocarpin-behandlade kroniska epileptiska möss. Vi presenterar ett protokoll för tre olika beteendetester med hjälp av dessa epileptiska möss: nya objekt plats (NL), nya objekt erkännande (NO) och mönster separation (PS) tester för att utvärdera inlärning och minne för platser, objekt och sammanhang, respektive. Vi förklarar hur du ställer in beteendeapparaten och tillhandahåller experimentella procedurer för NL-, NO- och PS-tester efter ett öppet fälttest som mäter djurens basala rörelseapparat. Vi beskriver också de tekniska fördelarna med NL, NO och PS tester med avseende på andra beteendemässiga tester för bedömning av minnesfunktion i epileptiska möss. Slutligen diskuterar vi möjliga orsaker och lösningar för epileptiska möss som inte gör 30 s god kontakt med objekten under förtrogenhetssessionerna, vilket är ett viktigt steg för framgångsrika minnestester. Således ger detta protokoll detaljerad information om hur man bedömer epilepsi-associerade minnesförsämringar med hjälp av möss. NL- och NO-testerna är enkla, effektiva analyser som är lämpliga för utvärdering av olika typer av minne hos epileptiska möss.
Epilepsi är en kronisk sjukdom som kännetecknas av spontana återkommande anfall1,2,3. Eftersom repetitiva anfall kan orsaka strukturella och funktionella avvikelser i hjärnan1,2,3, onormal krampanfall aktivitet kan bidra till kognitiv dysfunktion, som är en av de vanligaste epilepsi-associerade samsjuklighet4,5,6. I motsats till de kroniska anfallshändelserna, som är övergående och tillfälliga, kan kognitiva funktionsnedsättningar kvarstå under epileptiska patienters liv, vilket försämrar deras livskvalitet. Därför är det viktigt att förstå patofysiologiska mekanismerna för epilepsi-associerade kognitiv försämring.
Olika experimentella djurmodeller av epilepsi har använts för att visa inlärnings- och minnesunderskott i samband med kronisk epilepsi7,,8,9,10,11,12. Till exempel, Morris vatten labyrint, kontextuell rädsla konditionering, hål-board, nya objekt plats (NL), och nya objekt erkännande (NO) tester har ofta använts för att bedöma minne dysfunktion i temporalloben epilepsi (TLE). Eftersom hippocampus är en av de primära regioner där TLE visar patologi, beteendetester som kan utvärdera hippocampus-beroende minnesfunktion är ofta företrädesvis utvalda. Men med tanke på att anfall kan inducera avvikande hippocampus neurogenes och bidra till epilepsi-associerade kognitiv försämring10, beteendemässiga paradigm för att testa dentate nyfödda neuronal funktion (dvs. rumsliga mönster separation, PS)8,13 kan också ge värdefull information om cellulära mekanismer för minne nedskrivningar i epilepsi.
I den här artikeln visar vi ett batteri av minnestester, NL, NO och PS, för epileptiska möss. Testerna är enkla och lättillgängliga och kräver inget sofistikerat system.
Detta arbete beskriver experimentella procedurer för utvärdering av kognitiv funktion hos möss med kronisk epilepsi. Många olika beteendetestparadigmet används för att bedöma inlärnings- och minnesfunktioner hos möss18. Morris vatten labyrint, radiell arm labyrint, Y-labyrint, kontextuell rädsla konditionering, och objekt-baserade tester är de vanligaste beteendetester och ge tillförlitliga resultat. Bland dem, NL, NO, och PS tester är effektiva, enkla metoder för att utvärdera lär…
The authors have nothing to disclose.
Vi tackar dr Jae-Min Lee för hans tekniska stöd. Detta arbete stöddes av National Research Foundation of Korea (NRF) bidrag som finansieras av den koreanska regeringen (NRF-2019R1A2C1003958, NRF-2019K2A9A2A08000167).
1 ml syringe | Sung-shim | Use with the 26 or 30 gauge needle | |
70% Ethanol | Duksan | UN1170 | Spray to clean the box and objects |
black curtain | For avoiding unnecessary visual cues | ||
Cresyl violet | Sigma | C5042 | For Cresyl violet staining |
cryotome | Leica | E21040041 | For tissue sectioning |
double-sided sticky tape | For the firm placement of the objects | ||
DPX mounting medium | Sigma | 06522 | |
ethanol series | Duksan | UN1170 | Make 100%, 95%, 90%, 80%, 70% ethanol solutions |
floor plate with narrow grid patterns | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 2.75 x 2.75 cm | |
floor plate with wide grid patterns | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, plate size: 42.5 x 42.5 x 0.5 cm, grid size: 5.5 x 5.5 cm | |
illuminometer | TES Electrical Electronic Corp. | 1334A | For the measurement of the room lighting (60 Lux) |
Intensive care unit | Thermocare | #W-1 | |
ketamine hydrochloride | Yuhan | 7003 | Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion |
LED lamp | Lungo | P13A-0422-WW-04 | Lighting for the behavioral test room |
objects | Rubber doll, 50 ml plastic tube, glass Coplin jar, plastic T-flask, glass bottle | ||
open field box | Leehyo-bio | Behavioral experiment equipment, size: 44 x 44 x 31 cm | |
paper towel | Yuhan-Kimberly | 47201 | Use to dry open field box and objects |
paraformaldehyde | Merck Millipore | 104005 | Make 4% solution |
pilocarpine hydrochloride | Sigma | P6503 | |
ruler | Use to locate the objects in the open field box | ||
scopolamine methyl nitrate | Sigma | S2250 | Make 10X stock |
Smart system 3.0 | Panlab | Video tracking system | |
stopwatch | Junso | JS-307 | For the measurement of explorative activities of mice |
sucrose | Sigma | S9378 | For cryoprotection of tissue sections |
terbutaline hemisulfate salt | Sigma | T2528 | Make 10X stock |
video camera (CCD camera) | Vision | VCE56HQ-12 | Place the camera directly overhead of the open field box |
xylazine (Rompun) | Bayer korea | KR10381 | Use to anesthetize the mouse for transcardial perfusion |
xylene | Duksan | UN1307 | For Cresyl violet staining |