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Behavior

एक उपन्यास पावलोवियन डर कंडीशनिंग प्रतिमान ठंड और उड़ान व्यवहार का अध्ययन करने के लिए

Published: January 5, 2021 doi: 10.3791/61536

Summary

रक्षात्मक व्यवहार प्रतिक्रियाएं खतरे की तीव्रता, निकटता और एक्सपोजर के संदर्भ पर आकस्मिक होती हैं। इन कारकों के आधार पर, हमने एक शास्त्रीय कंडीशनिंग प्रतिमान विकसित किया जो व्यक्तिगत विषयों के भीतर वातानुकूलित ठंड और उड़ान व्यवहार के बीच स्पष्ट संक्रमण को प्रकाश में ताया करता है। यह मॉडल चिंता, आतंक और पोस्ट-ट्रॉमेटिक स्ट्रेस विकारों में शामिल विकृतियों को समझने के लिए महत्वपूर्ण है।

Abstract

भय और चिंता से संबंधित व्यवहार एक जीव के अस्तित्व में महत्वपूर्ण योगदान देते हैं। हालांकि, कथित खतरे के लिए अतिरंजित रक्षात्मक प्रतिक्रियाएं विभिन्न चिंता विकारों की विशेषता हैं, जो संयुक्त राज्य अमेरिका में मानसिक बीमारी का सबसे प्रचलित रूप हैं। रक्षात्मक व्यवहार के लिए जिम्मेदार न्यूरोबायोलॉजिकल तंत्र की खोज उपन्यास चिकित्सीय हस्तक्षेपों के विकास में सहायता करेगी। पावलोवियन डर कंडीशनिंग डर से संबंधित सीखने और स्मृति का अध्ययन करने के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया प्रयोगशाला प्रतिमान है । पारंपरिक पावलोवियन डर कंडीशनिंग प्रतिमान की एक प्रमुख सीमा यह है कि ठंड ही रक्षात्मक व्यवहार की निगरानी की है । हमने हाल ही में एक संशोधित पावलोवियन डर कंडीशनिंग प्रतिमान विकसित किया है जो हमें व्यक्तिगत विषयों के भीतर वातानुकूलित ठंड और उड़ान (जिसे एस्केप के रूप में भी जाना जाता है) व्यवहार का अध्ययन करने की अनुमति देता है। यह मॉडल उच्च तीव्रता वाले फुटशॉक और वातानुकूलित उत्तेजना और बिना शर्त उत्तेजना के बीच बड़ी संख्या में पेयरिंग को रोजगार देता है। इसके अतिरिक्त, इस वातानुकूलित उड़ान प्रतिमान वातानुकूलित उत्तेजना के रूप में शुद्ध टोन और सफेद शोर श्रवण उत्तेजनाओं की धारावाहिक प्रस्तुति का उपयोग करता है । इस प्रतिमान में कंडीशनिंग के बाद, चूहों टोन उत्तेजना के जवाब में ठंड व्यवहार प्रदर्शन, और सफेद शोर के दौरान उड़ान प्रतिक्रियाओं । इस कंडीशनिंग मॉडल अस्तित्व के लिए आवश्यक व्यवहार प्रतिक्रियाओं के बीच तेजी से और लचीला संक्रमण के अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है ।

Introduction

भय तात्कालिक खतरे के प्रति एक विकासवादी रूप से संरक्षित अनुकूली प्रतिक्रिया है1,2. जबकि जीवों के पास खतरे के लिए सहज रक्षात्मक प्रतिक्रियाएं होती हैं, विद्वान संघखतरे केभविष्य कहने वाले उत्तेजनाओं के लिए उचित रक्षात्मक प्रतिक्रियाओं को प्रकाश में लाने के लिए महत्वपूर्ण हैं 3 । रक्षात्मक प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करने वाले मस्तिष्क सर्किट में डिस््रेगुलेशन कई दुर्बल चिंता विकारों से जुड़े विकृत प्रतिक्रियाओं में योगदान करने की संभावना है, जैसे पोस्ट-ट्रॉमेटिक स्ट्रेस डिसऑर्डर (पीटीएसडी), पैनिक डिसऑर्डर4,और विशिष्ट फोबिया5,6। चिंता विकारों के लिए संयुक्त राज्य अमेरिका में व्याप्तता दर वयस्कों के लिए 19.1% और किशोरों में 31.9%7,8है । इन बीमारियों का बोझ व्यक्तियों की दैनिक दिनचर्या पर बहुत अधिक है और उनके जीवन की गुणवत्ता पर नकारात्मक प्रभाव डालता है।

पिछले कई दशकों में, पावलोवियन डर कंडीशनिंग ने डर से संबंधित सीखने और स्मृति9,10, 11अंतर्निहित तंत्रिका तंत्र में जबरदस्त अंतर्दृष्टि प्राप्त करने के लिए एक शक्तिशाली मॉडल प्रणालीकेरूप में कार्य किया है। पावलोवियन डर कंडीशनिंग एक वातानुकूलित उत्तेजना (सीएस, जैसे एक श्रवण उत्तेजना) एक प्रतिकूल अनकंडीशन्ड उत्तेजना (अमेरिका; उदाहरण के लिए, एक बिजली के फुटशॉक)12के साथ बांधना जरूरत पर जोर देता है । क्योंकि ठंड प्रमुख व्यवहार पैदा की और मानक Pavlovian कंडीशनिंग प्रतिमान में मापा जाता है, ऐसे भागने के रूप में रक्षात्मक व्यवहार के सक्रिय रूपों के तंत्रिका नियंत्रण तंत्र/ पिछले अध्ययनों से पता चलता है कि उड़ान जैसे रक्षात्मक व्यवहार के विभिन्न रूपों को खतरे की तीव्रता, निकटता और संदर्भ13, 14के आधार पर पैदा कियाजाताहै। अध्ययन कैसे मस्तिष्क रक्षात्मक व्यवहार के विभिन्न प्रकार को नियंत्रित करता है काफी न्यूरोनल प्रक्रियाओं है कि भय और चिंता विकारों में विनियमित कर रहे है की समझ में योगदान कर सकते हैं ।

इस महत्वपूर्ण आवश्यकता को दूर करने के लिए, हमने एक संशोधित पावलोवियन कंडीशनिंग प्रतिमान विकसित किया है जो15ठंड के अलावा उड़ान और भागने की छलांग को प्रकाश में रखता है। इस प्रतिमान में, चूहों को एक धारावाहिक यौगिक उत्तेजना (SCS) के साथ वातानुकूलित किया जाता है जिसमें सफेद शोर के बाद एक शुद्ध स्वर होता है। एक मजबूत बिजली के फुटशॉक के साथ SCS बांधना के दो दिनों के बाद, चूहों सफेद शोर के दौरान टोन घटक और उड़ान के जवाब में ठंड प्रदर्शन । वातानुकूलित ठंड और उड़ान व्यवहार के बीच व्यवहार स्विच तेजी से और सुसंगत हैं। दिलचस्प बात यह है कि चूहों ने उड़ान व्यवहार को केवल तभी प्रदर्शित किया जब सफेद शोर सीएस को पहले से वितरित फुटशॉक (कंडीशनिंग संदर्भ) के समान संदर्भ में प्रस्तुत किया जाता है, लेकिन तटस्थ संदर्भ में नहीं। इसके बजाय, ठंड प्रतिक्रियाओं इस तटस्थ संदर्भ में हावी है, टोन की तुलना में सफेद शोर के जवाब में ठंड के काफी अधिक स्तर के साथ । यह रक्षात्मक प्रतिक्रिया तीव्रता को मॉडुलन करने में संदर्भ की भूमिका और पारंपरिक खतरे कंडीशनिंग16,17में पाए जाने वाले भय से संबंधित सीखने और स्मृति में प्रासंगिक जानकारी की नियामक भूमिका के अनुरूप है । यह मॉडल संदर्भ-विशिष्ट तरीके से कई रक्षात्मक व्यवहारों की प्रत्यक्ष, भीतर-विषय तुलना के लिए अनुमति देता है।

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Protocol

निम्नलिखित कदम/प्रक्रियाएं तुलेन विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल एवं उपयोग समिति से अनुमोदन के बाद संस्थागत दिशा-निर्देशों के अनुसार आयोजित की गई थीं ।

1. चूहों की तैयारी

  1. 3-5 महीने के बीच की आयु के पुरुष और/या महिला वयस्क चूहों का उपयोग करें । वर्तमान अध्ययन में, हम जैक्सन प्रयोगशाला से प्राप्त पुरुष C57BL/6J चूहों का इस्तेमाल किया, लेकिन एक संमानित आपूर्तिकर्ता से किसी भी माउस तनाव इस्तेमाल किया जा सकता है ।
  2. प्रयोग से कम से एक सप्ताह पहले, सभी चूहों को व्यक्तिगत रूप से 12:12 घंटे के प्रकाश/पूरे अध्ययन में अंधेरे चक्र पर घर । चूहों विज्ञापन लिबिटम भोजन और पानी के लिए उपयोग प्रदान करते हैं।
  3. प्रकाश चक्र के दौरान सभी व्यवहार प्रयोगों को करें। एक व्यक्तिगत पलटन के भीतर दिन के एक ही समय में सभी सत्रों प्रदर्शन करते हैं । उदाहरण के लिए, यदि 1 दिन सुबह 9 बजे प्रयोग शुरू करना है, तो उस समय शुरू करना जारी रखें जब तक कि प्रयोग पूरा नहीं हो जाता.

2. अध्ययन सामग्री की तैयारी

  1. अध्ययन संदर्भ
    1. प्रयोगों को करने के लिए दो अलग-अलग संदर्भों का चयन करें।
    2. एक चिकनी प्लेक्सीग्लास मंजिल के साथ संदर्भ ए के रूप में स्पष्ट प्लेक्सीग्लास (व्यास 30 सेमी) से बना बेलनाकार कक्ष का उपयोग करें। भागने को रोकने के लिए कक्ष की ऊंचाई पर्याप्त होनी चाहिए (कम से कम 30 सेमी ऊंची)।
    3. संदर्भ बी के लिए एक आयताकार बाड़े (25 सेमी x 30 सेमी) का उपयोग करें जिसमें एक विद्युत ग्रिड मंजिल है जो बारी-बारी से वर्तमान फुटशॉक देने के लिए उपयोग की जाती है। इस कक्ष की ऊंचाई बहुत महत्वपूर्ण है और कम से कम 35 सेमी उच्च होना चाहिए। वैकल्पिक रूप से, एक पारदर्शी छत का उपयोग करें (यह सुनिश्चित करें कि इस सामग्री के माध्यम से वीडियो रिकॉर्ड किया जा सकता है)।
      नोट: चिकनी दीवार सतहों के साथ एक कक्ष का उपयोग करें जिसे आसानी से साफ किया जा सकता है।
    4. संदर्भों को साफ करने के लिए एक अलग सफाई समाधान का उपयोग करें। उदाहरण के लिए, 1% एसिटिक एसिड और 70% इथेनॉल के साथ संदर्भ बी के साथ स्वच्छ संदर्भ ए। पहले सत्र की शुरुआत से पहले संदर्भों को साफ करें, व्यक्तिगत चूहों के परीक्षण के बीच, और दिन के सत्रों के पूरा होने के बाद। यह पिछले चूहों से घ्राण संकेतों को हटाने के लिए महत्वपूर्ण है। पूरी तरह से सफाई से शॉक ग्रिड पर मूत्र स्केलिंग को रोकने में भी मदद मिलेगी, जो कंडीशनिंग सत्रों से समझौता करेगा।
      नोट: सफाई समाधान भी एक घ्राण क्यू के रूप में काम करते हैं, इसलिए एक विशेष संदर्भ के लिए एक ही सफाई तरल का उपयोग करें ।
    5. संबंधित अध्ययन सत्रों के दौरान एक ध्वनि-तनु बॉक्स में संदर्भ ए या संदर्भ बी रखें।
  2. ऑडियो जनरेटर
    1. 75 डीबी पर श्रवण उत्तेजनाओं को वितरित करने के लिए संदर्भों के ऊपर एक ओवरहेड स्पीकर माउंट करें।
    2. पूर्व-निर्धारित शेड्यूल पर श्रवण उत्तेजनाओं को उत्पन्न करने के लिए प्रोग्राम करने योग्य ऑडियो जनरेटर का उपयोग करें। 7.5 किलोहर्ट्ज शुद्ध स्वर एक साइनसॉयडल तरंग के साथ एक ध्वनि है, जबकि सफेद शोर एक यादृच्छिक संकेत है जिसमें विभिन्न आवृत्तियों पर समान तीव्रता होती है, जो 1-20,000 हर्ट्ज से लेकर होती है।
    3. अस्थायी परिशुद्धता के साथ श्रवण उत्तेजनाओं और सदमे संकेतों को वितरित करने के लिए टीटीएल दालों का उपयोग करें।
      नोट: प्रयोग शुरू करने से पहले, डीबी मीटर का उपयोग करके प्रत्येक कक्ष में घुड़सवार वक्ता से ध्वनि तीव्रता उत्पादन को मापें।
  3. घिनौना आदमी: बिजली ग्रिड मंजिल है जो ०.९ एमए एसी सदमे देने के लिए प्रयोग किया जाता है के साथ घिनौना आदमी कनेक्ट । एक कंप्यूटर प्रोग्राम में आवृत्ति, शुरुआत और झटके की अवधि को परिभाषित करें। 1 एस की अवधि के लिए प्रत्येक अनुसूचित जाति के अंत में प्रत्येक सदमे उत्तेजना उद्धार, कंडीशनिंग सत्र प्रति पांच SCS शॉक pairings कुल ।

3. कंप्यूटर प्रोग्राम और वीडियो ट्रैकिंग की तैयारी

  1. सॉफ्टवेयर प्रोग्राम में कोडिंग का उपयोग करके व्यवहार प्रोटोकॉल उत्पन्न करें।
  2. कार्यक्रम में, धारावाहिक यौगिक उत्तेजना अनुसूचित जाति को परिभाषित करें। यह उत्तेजना 10 एस शुद्ध स्वर की एक धारावाहिक प्रस्तुति है (प्रत्येक पिप 500 एमएस के लिए प्रस्तुत किया जाता है, 7.5 किलोहर्ट्ज की आवृत्ति पर और 1 हर्ट्ज की दर) और 10 एस सफेद शोर (1 हर्ट्ज पर 500 एमएस पिप्स)।
  3. प्रत्येक परीक्षण के बाद प्रस्तुत अंतर-परीक्षण अंतराल (आईटीआई) को परिभाषित करें, छद्म रूप से।
  4. अध्ययन के दौरान, बाद के विश्लेषण के लिए वीडियो के लिए सभी माउस व्यवहार रिकॉर्ड।
    नोट: व्यावसायिक रूप से उपलब्ध डर कंडीशनिंग बक्से को शीर्ष घुड़सवार कैमरे के माध्यम से व्यवहार रिकॉर्ड करने के लिए स्थापित नहीं किया जा सकता है । यह बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि रिकॉर्ड किए गए वीडियो का उपयोग क्षैतिज आंदोलन, गति और जानवर द्वारा यात्रा की गई कुल दूरी की गणना करने के लिए किया जाता है।
  5. सॉफ्टवेयर ट्रैकिंग सेट करने के लिए, प्रत्येक प्रासंगिक संदर्भ में एक परीक्षण माउस रखें, समोच्च ट्रैकिंग संवेदनशीलता को समायोजित करें, और गुरुत्वाकर्षण के केंद्र को परिभाषित करें। यह सापेक्ष स्थिति पर विश्वसनीय डेटा का अधिग्रहण सुनिश्चित करेगा। इसके अलावा, विषय के लिए सुलभ पूरे संदर्भ क्षेत्र को परिभाषित करें।
    नोट: दोनों संदर्भों के लिए समोच्च आकार का समायोजन महत्वपूर्ण है क्योंकि विभिन्न संदर्भों में चमक में परिवर्तन समोच्च आकार को बदल देगा।
  6. कक्षों के ज्ञात आकारों और कैमरे के पिक्सेल आयामों का उपयोग करके एक अंशांकन गुणांक निर्धारित करें जिसका उपयोग गति (सेमी/एस) की गणना करने के लिए किया जा सकता है।
  7. डेटा अधिग्रहण कंप्यूटर के टाइमस्टैंप घटनाओं को उनके वास्तविक समय की घटनाओं के लिए सिंक्रोनाइज़ करें।

4. व्यवहार प्रयोग

  1. सभी उपकरणों को चालू करें: कंप्यूटर, डर कंडीशनिंग बॉक्स नियंत्रक, घिनौना आदमी, और वीडियो और टाइमस्टैंप रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर। सुनिश्चित करें कि उपयुक्त क्रम में उपकरण चालू किए जाते हैं।
  2. टोन, सफेद शोर, और शॉक डिलीवरी सहित सभी कार्यों की जांच करें, और डेटा अधिग्रहण के लिए सिस्टम स्थापित करें।
  3. जानवरों को उनके स्टोरेज रूम से कंडीशनिंग रूम तक पहुंचाते हैं। उन्हें कम से कम 10 मिनट के लिए वहाँ अनुकूलन करने की अनुमति दें।
  4. जानवर को घर के पिंजरे से बाहर निकालें, धीरे-धीरे इसे संबंधित संदर्भ में रखें, और फिर तुरंत कंप्यूटर प्रोग्राम को सक्रिय करें।
    नोट: एक समय में डर कंडीशनिंग सिस्टम और डेटा संग्रह (टाइमस्टैंप, माउस ट्रैकिंग और वीडियो रिकॉर्डिंग) सॉफ्टवेयर दोनों के आरंभीकरण को टीटीएल पल्स मध्यस्थता सक्रियणों का उपयोग करके सिंक्रोनाइज्ड किया जा सकता है।
  5. प्री-कंडीशनिंग/प्री-एक्सपोजर
    1. 1 दिन पर, विषय को संदर्भ ए (तटस्थ संदर्भ) में रखें। इसे 3 मिनट (बेसलाइन अवधि) के लिए कक्ष में स्वीकार करने की अनुमति दें, और फिर इसे 20 एस कुल अवधि(चित्रा 1ए-1 बी)के अनुसूचित जाति के 4 परीक्षणों के लिए बेनकाब करें।
    2. एक 90 s औसत छद्मप्रांदोई आईटीआई (रेंज 80-100 एस) बनाए रखें। प्रत्येक प्री-एक्सपोजर सत्र की कुल अवधि 590 एस है।
  6. डर कंडीशनिंग
    1. 2 दिन और 3 दिन पर, संदर्भ बी में विषय जगह है । एक 3 मिनट बेसलाइन अवधि के बाद, एक 1 एस, 0.9 एमए एसी फुटशॉक के साथ अनुसूचित जाति सह समाप्त के पांच pairings के अधीन बेनकाब।
    2. एक 120 s औसत छद्म रंग आईटीआई (रेंज 90-150 एस) बनाए रखें। प्रत्येक कंडीशनिंग सत्र कुल में 820 एस के लिए पिछले है(चित्रा 1A).
    3. प्रयोग के लक्ष्य के आधार पर, 4 दिन पर विषय चूहों या तो एक याद परीक्षण करने के लिए (चरण 4.7 देखें) या विलुप्त होने का डर (चरण 4.8 देखें)।
  7. डर याद (संदर्भ निर्भरता का परीक्षण करने के लिए)
    1. 4 दिन पर, संदर्भ ए में विषय रखें । 3 मिनट बेसलाइन अवधि के बाद, इसे 590 एस से अधिक, फुटशॉक के बिना एससी के 4 परीक्षणों के साथ पेश करें।
    2. एक 90 s औसत छद्मप्रांदोई आईटीआई (रेंज 80-100 एस) बनाए रखें।
  8. विलुप्त होने का डर
    1. 4 दिन, संदर्भ बी में विषय जगह है । 3 मिनट बेसलाइन अवधि के बाद, 1 9 10 से अधिक फुटशॉक के बिना एससी के 16 परीक्षण वर्तमान में।
    2. एक 90 s औसत छद्म रंग आईटीआई (रेंज 60-120 एस) बनाए रखें।
  9. जानवर को अपने घर पिंजरे में लौटाएं और सभी जानवरों के लिए प्रक्रिया दोहराएं।

5. व्यवहार का मात्राकरण

  1. प्रयोग के लिए एक पर्यवेक्षक अंधा है स्वचालित फ्रीजिंग डिटेक्टर थ्रेसिंग का उपयोग कर ठंड व्यवहार के लिए रिकॉर्ड किए गए वीडियो पिक्सेल परिवर्तनों के फ्रेम-बाय-फ्रेम विश्लेषण के बाद।
    नोट: अन्य सॉफ्टवेयर पैकेजों का उपयोग 2 कैमरा सिस्टम का उपयोग करके स्वचालित रूप से ठंड की गणना करने के लिए भी किया जा सकता है। एक पर्यवेक्षक के लिए मैन्युअल रूप से ठंड व्यवहार स्कोर करना भी संभव है।
  2. ठंड को शारीरिक आंदोलनों की पूर्ण समाप्ति के रूप में परिभाषित करें, श्वसन के लिए आवश्यक लोगों को छोड़कर, न्यूनतम 1 एस के लिए।
  3. स्कोर कूदता है जब पंजे के सभी 4 मंजिल छोड़, एक ऊर्ध्वाधर और/या क्षैतिज आंदोलन में जिसके परिणामस्वरूप ।
  4. ठंड, कूद और घटना मार्कर के साथ चिह्नित फ़ाइल निर्यात करें।
  5. प्रत्येक परीक्षण के लिए निर्धारित समय अवधि (उदाहरण के लिए, पूर्व-एससी, टोन और सफेद शोर की 10 एस अवधि) से प्रासंगिक घटनाओं (ठंड और कूदता है) निकालें।
  6. स्प्रेडशीट फ़ाइल में घटनाओं की निकाली गई स्टार्ट-स्टॉप अवधि का उपयोग करके, संबंधित परीक्षण अवधियों से अंत समय से शुरू समय को घटाकर ठंड (एस में) की अवधि की गणना करें।
  7. सभी परीक्षणों से ठंड की अवधि को संक्षेप में समाप्त करके, इस डेटा परीक्षण के लिहाज से या दिन के लिहाज से प्रतिनिधित्व करें।
    नोट: अध्ययन के उद्देश्य के आधार पर, उड़ान या ठंड व्यवहार रन बनाए जा सकते है और किसी भी परीक्षण से गणना/
  8. किसी विशेष परीक्षण अवधि से कूदने की कुल संख्या का योग करें।
  9. माउस ट्रैकिंग द्वारा उत्पन्न फ़ाइल को माउस के गुरुत्वाकर्षण के केंद्र के फ्रेम एक्स-वाई एक्सिस आंदोलन द्वारा फ्रेम से निर्देशांक निकालें और माउस (सेमी/एस) की गति की गणना करें।
    नोट: गति डेटा या तो सेमी/एस या पिक्सेल/एस प्रारूप में मौजूद हो सकता है । उस परीक्षण संदर्भ के लिए वीडियो में परिभाषित इंच या सेमी/पिक्सल वैल्यू का उपयोग करके पिक्सेल/एस यूनिट को सेमी/एस में परिवर्तित करें (कृपया धारा ३.६ देखें) ।
  10. वीडियो की फ्रेम गति (अधिमानतः 30 फ्रेम/एस) के आधार पर जानवर के फ्रेम आंदोलन द्वारा फ्रेम के लिए गति डेटा निकालने के बाद, एक विशिष्ट फ्रेम नंबर ब्रैकेट में जानवर की औसत गति की गणना करें (शुरू और अंत फ्रेम संख्या प्राप्त करने के लिए एस में 30 से गुणा शुरू और अंत समय)।
  11. 10 एस प्री-एससी (बेसलाइन, बीएल) के दौरान औसत गति से प्रत्येक अनुसूचित जाति के दौरान औसत गति को विभाजित करके उड़ान स्कोर की गणना करें और फिर प्रत्येक एस्केप जंप (स्पीडसीएस/स्पीडबीएल + # जंप) के लिए 1 अंक जोड़ें। 1 का एक उड़ान स्कोर इसलिए पूर्व-SCS अवधि से उड़ान व्यवहार में कोई परिवर्तन इंगित करता है ।
  12. वैकल्पिक रूप से, पालन और संवारने जैसे अन्य व्यवहारों के लिए मैन्युअल रूप से वीडियो स्कोर करें।

6. सांख्यिकीय विश्लेषण

  1. सांख्यिकीय विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सांख्यिकीय महत्व के लिए डेटा का विश्लेषण करें। सभी परीक्षणों के लिए, सांख्यिकीय महत्व की परिभाषा पीएंडटी;005 है।
  2. शापिरो-विल्क सामान्य परीक्षण (α = 0.05) का उपयोग करके सामान्य वितरण के लिए डेटा की जांच करें।
  3. संकेतों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए, उपयुक्त पैरामेट्रिक (युग्मित टी-टेस्ट) या गैर-पैरामेट्रिक (विलकॉक्सन साइन-रैंक टेस्ट) परीक्षण का उपयोग करके जोड़ीवार तुलना करें।
  4. कारकों की 2-तरह की बातचीत (क्यू एक्स परीक्षण) का आकलन करने के लिए, 2-तरह के एनोवा को पोस्ट-हॉक परीक्षणों (जैसे, बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण/तुकी के परीक्षण) के बाद प्रदर्शन करें।

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Representative Results

जैसा कि आरेख(चित्रा 1A)में वर्णित है, सत्र प्री-एक्सपोजर (दिन 1) के साथ शुरू होता है, इसके बाद डर कंडीशनिंग (दिन 2 और 3), और फिर या तो विलुप्त होने या पुनर्प्राप्ति (दिन 4)।

प्री-एक्सपोजर (डे 1) सत्र में SCS की प्रस्तुतियों ने चूहों(चित्रा 2ए-2B)में उड़ान या ठंड प्रतिक्रिया प्राप्त नहीं की। कंडीशनिंग के दौरान व्यवहार विश्लेषण (दिन 2 और 3) से पता चला है कि अनुसूचित जाति के टोन घटक काफी पूर्व अनुसूचित जाति(चित्रा 2बी, 2E)के दौरान ठंड की तुलना में ठंड बढ़ाया । उड़ान स्कोर सत्रों में काफी बदल गया (दिन 1 से दिन 3, एन = 20; चित्रा 2A)। चूहों ने टोन(चित्रा 2सी-2डी)की तुलना में सफेद शोर क्यू के लिए उच्च गति और अधिक कूदता दिखाया, और इस प्रकार अधिक से अधिक उड़ान स्कोर। चूहों रक्षात्मक व्यवहार का एक स्पष्ट संक्रमण दिखाया-सफेद शोर(चित्रा 2F)के दौरान उच्च उड़ान स्कोर के बाद टोन के दौरान कम उड़ान स्कोर का प्रदर्शन और ठंड प्रतिक्रियाओं के लिए उपाध्यक्ष विपरीत(चित्रा 2G)

वातानुकूलित उड़ान पर खतरे की निकटता और संदर्भ के प्रभाव के लिए परीक्षण करने के लिए, चूहों को दो समूहों में विभाजित किया गया था: एक समूह कंडीशनिंग संदर्भ(चित्रा 3 ए-3B)में विलुप्त होने का प्रशिक्षण दिया गया था, और एक अन्य समूह को तटस्थ संदर्भ(चित्रा 3सी-3डी)में SCS को उजागर करके डर मेमोरी रिकॉल के लिए परीक्षण किया गया था। विलुप्त होने के प्रशिक्षण के 16 परीक्षणों के अधीन चूहों वातानुकूलित उड़ान (एन = 12) के तेजी से विलुप्त होने से पता चला । चार परीक्षणों के पहले ब्लॉक के दौरान उड़ान स्कोर टोन(चित्रा 3A)की तुलना में सफेद शोर के दौरान अधिक थे । उड़ान व्यवहार अब विलुप्त होने के सत्र के अंत में या तो क्यू द्वारा प्राप्त किया गया था । वहां टोन प्रेरित ठंड में एक समग्र कमी और विलुप्त होने के सत्र के दौरान सफेद शोर मध्यस्थता ठंड में वृद्धि हुई थी । चार परीक्षणों के पहले ब्लॉक के लिए ठंड सफेद शोर(चित्रा 3B)की तुलना में टोन के लिए काफी अधिक थी । यह पता चलता है खतरे की नम्रता उड़ान प्रतिक्रिया के लिए महत्वपूर्ण है ।

उड़ान प्रतिक्रिया एक संदर्भ पर निर्भर तरीके से कम हो गया था । तटस्थ संदर्भ में सफेद शोर के संपर्क में उड़ान प्रकाश में लाना नहीं था (n = 8) । इसके बजाय, तटस्थ संदर्भ में सफेद शोर प्रस्तुतियों ने ठंड प्रतिक्रियाओं को प्राप्त किया जो टोन(चित्रा 3सी-3 डी)द्वारा प्राप्त लोगों की तुलना में अधिक थे। यह रक्षात्मक प्रतिक्रिया में संदर्भ के महत्व को दर्शाता है ।

Figure 1
चित्रा 1: ठंड और उड़ान प्रतिमान का आकलन करने के लिए अध्ययन डिजाइन।
A)व्यवहार सत्रों का आरेख। B)धारावाहिक यौगिक उत्तेजना (SCS) की संरचना का ब्यौरा आरेख, साथ ही अमेरिका के समय । C)संदर्भ ए - एक तटस्थ संदर्भ के रूप में कार्य करता है, और पूर्व-एक्सपोजर और रिकॉल सत्रों के दौरान उपयोग किया जाता है। घ)संदर्भ बी - डर कंडीशनिंग के लिए इस्तेमाल किया। इस आंकड़े को फडोक एट अल 2017 से संशोधित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: वातानुकूलित उड़ान प्रतिक्रिया।
A)1-3 दिनों में टोन और सफेद शोर की प्रस्तुति के बाद औसत परीक्षण-वार उड़ान स्कोर (एन = 20) की तुलना। सत्रों में उड़ान स्कोर में एक महत्वपूर्ण परिवर्तन नोट किया गया है (दिन 1 से दिन 3; दो तरह से दोहराया उपाय ANOVA, क्यू × परीक्षण बातचीत, एफ (13, २६६) = ५.७९५; पीएंडटी;0.0001)। पोस्ट-हॉक बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण से डर कंडीशनिंग डे 1 (परीक्षण 4, पी एंड एलटी; ०.०५) और दिन 2 (परीक्षण 2-5, पी & ०.००१) पर टोन और सफेद शोर प्रेरित उड़ान स्कोर के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चलता है । B)1-3 दिनों में टोन और सफेद शोर अवधि के दौरान औसत परीक्षण वार% ठंड की तुलना । सत्रों में % ठंड में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण परिवर्तन पर ध्यान दें (दिन 1 से दिन 3, एन = 20; दो तरह के दोहराए गए उपाय एनोवा, क्यू × परीक्षण बातचीत, एफ (13, 266) = 20.81; पी एंड एलटी; 0.001; चित्रा 2B)। पोस्ट-हॉक बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण से डर कंडीशनिंग दिवस 1 (परीक्षण 4 और 5, पी एंड एलटी; 0.001) और दिन 2 (सभी परीक्षणों, पी & 0.001) पर टोन और सफेद शोर प्रेरित ठंड के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर का पता चलता है। C)3 दिन पूर्व एससी, टोन, सफेद शोर, और सदमे अवधि के दौरान कूद से बचने के जवाब की संख्या की तुलना । बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण के बाद एक-तरफा ANOVA ने दिखाया कि टोन अवधि (पी एंड एलटी; 0.01 और पी एंड एलटी; 0.001, क्रमशः) की तुलना में सफेद शोर और सदमे के दौरान एस्केप जंप काफी अधिक थे। घ)तीसरे दिन टोन और सफेद शोर की प्रस्तुति के दौरान उड़ान स्कोर की तुलना । सफेद शोर अवधि (पी एंड एलटी; 0.001, विलकॉक्सन मिलान-जोड़े हस्ताक्षरित रैंक परीक्षण) के दौरान 3 दिन पर काफी अधिक उड़ान स्कोर ध्यान दें। ई)3 दिन पूर्व अनुसूचित जाति, टोन, और सफेद शोर के दौरान % ठंड की तुलना । 3 दिन पर ठंड व्यवहार टोन और सफेद शोर के महत्वपूर्ण प्रभाव से पता चलता है (एक तरह से दोहराया उपाय ANOVA, एफ = ५६.८२, पी एंड लेफ्टिनेंट; 0.01) । बोनफेरोनी के कई तुलना परीक्षण से पता चला है कि टोन की प्रस्तुति में % फ्रीजिंग बनाम प्री-एससी अवधि (पी एंड एलटी; 0.01) में काफी वृद्धि होती है, जबकि पूर्व-एससी और टोन अवधि (पी एंड एलटी; 0.001 दोनों) की तुलना में% ठंड काफी कम हो गई थी। प्रतिनिधि परीक्षण के लिहाज से डेटा 3 दिन पर माउस में टोन और सफेद शोर की प्रस्तुति के बाद उड़ान(एफ)और ठंड(जी)व्यवहार के संक्रमण से पता चलता है । प्रतिनिधित्व मूल्यों का मतलब है ± SEM. * पी एंड एलटी;0.05, **पी एंड एलटी;0.01, ****पी एंड लेफ्टिनेंट;0.001। प्री-एक्सपी, प्री-एक्सपोजर। पैनल ए-ई को फडोक एट अल, 2017 से संशोधित किया गया है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: विलुप्त होने और उड़ान कंडीशनिंग के बाद याद (4 दिन) ।
A)विलुप्त प्रशिक्षण के दौरान उड़ान स्कोर की तुलना में वातानुकूलित उड़ान (एन = 12; 16 परीक्षणों, दो तरह के दोहराए गए उपायों एनोवा, क्यू × परीक्षण बातचीत, एफ (१५,१६५) = ३.०५, पी & ०.०१) के तेजी से विलुप्त होने से पता चला । विलुप्त होने के चार परीक्षणों (परीक्षण 1-4) के पहले ब्लॉक से उड़ान स्कोर टोन (पी एंड एलटी; ०.०५, विलकॉक्सन मिलान-जोड़े हस्ताक्षरित रैंक परीक्षण) की तुलना में सफेद शोर के लिए काफी अधिक मनाया गया । B) ठंड की तुलना ठंड पर एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया (%) सफेद शोर के बाद (n = 12; 16 परीक्षण, दो तरह से दोहराया उपाय ANOVA, क्यू × परीक्षण बातचीत, एफ (15,165) = 3.55, पी एंड एलटी; 0.01).. विलुप्त होने के दौरान चार परीक्षणों (परीक्षण 1-4) के पहले ब्लॉक के लिए ठंड टोन (युग्मित टी-टेस्ट, पी एंड एलटी; ०.०१) की तुलना में सफेद शोर अवधि के दौरान काफी कम पाई गई । C)संदर्भ में परिवर्तन उड़ान स्कोर (एन = 8; 4 परीक्षणों, दो तरह के दोहराए गए उपायों, क्यू × परीक्षण बातचीत, एफ (1,7) = 27.44, पी एंड एलटी; 0.01) को काफी प्रभावित करते हैं। तटस्थ संदर्भ (दो पूंछ वाले टी-टेस्ट, पी एंड एलटी; 0.01) डी) में टोन अवधि की तुलना में सफेद शोर के दौरान उड़ान स्कोर काफी कम हो गया। पुनर्प्राप्ति के दौरान परीक्षणों में ठंड प्रतिक्रियाएं भी महत्वपूर्ण थीं (एन = 8, 4 परीक्षण, दो-तरह से दोहराए गए उपाय एनोवा, क्यू एफ (1,7) = 27.67, पी एंड एलटी; 0.01 का प्रभाव।) । तटस्थ संदर्भ में WN के एक्सपोजर ने टोन (दो पूंछ वाले टी-टेस्ट, पी एंड एलटी; 0.001) की तुलना में ठंड प्रतिक्रियाओं में काफी वृद्धि की। प्रतिनिधित्व मूल्यों का मतलब है ± SEM. * पी एंड एलटी;0.05, **पी एंड एलटी;0.01, ****पी एंड लेफ्टिनेंट;0.001। पैनल ए-डी फडोक एट अल 2017 से संशोधित कर रहे हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

वर्णित ध्वनि और सदमे पैरामीटर इस प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण तत्व हैं। इसलिए प्रयोग शुरू करने से पहले शॉक आयाम और ध्वनि दबाव स्तर का परीक्षण करना महत्वपूर्ण है। डर कंडीशनिंग अध्ययन आम तौर पर 70-80 डीबी ध्वनि दबाव का स्तर और 0.1-1 एमए सदमे तीव्रता18का उपयोग करें; इस प्रकार, वर्णित पैरामीटर पारंपरिक भय कंडीशनिंग प्रतिमानों की सीमा के भीतर हैं। पिछले सीएस-केवल (कोई फुटशॉक) नियंत्रण प्रयोग में, हमने चूहों में उड़ान या ठंड प्रतिक्रियाओं का निरीक्षण नहीं किया, यह दर्शाता है कि15वर्णित के रूप में प्रस्तुत किए जाने पर श्रवण उत्तेजनाएं आश्चर्यहीन नहीं हैं। 80 डीबी से ऊपर सफेद शोर के डीबी स्तर को बढ़ाने से जन्मजात घृणा पैदा हो सकती है। हालांकि, 75 डीबी पर प्रस्तुत शोर उत्तेजनाओं चूहों19में दबा व्यवहार गतिविधि के रूप में तनाव प्रकाश में लाना नहीं है ।

अनुसूचित जाति में शामिल श्रवण उत्तेजनाओं का सावधानीपूर्वक चयन किया जाना चाहिए । हमारे पिछले अध्ययन में, हमने निर्धारित किया है कि सफेद शोर के साथ एकल सीएस कंडीशनिंग एक शुद्ध टोन15के साथ कंडीशनिंग की तुलना में उच्च उड़ान स्कोर लाती है । यह इस प्रोटोकॉल20में उत्तेजना के महत्व को दर्शाता है । हालांकि, हाल ही में एक अध्ययन से पता चला है कि SCS अनुक्रम (सफेद शोर टोन) के उलट के साथ कंडीशनिंग टोन और सफेद शोर21को ठंड के लिए उड़ान में परिणाम है । ये आंकड़े इस बात का समर्थन करते हैं कि संकेतों का सीखा लौकिक संबंध भी एक महत्वपूर्ण कारक है ।

क्योंकि पिंजरे परिवर्तन तनाव का एक संभावित स्रोत हैं, यह सबसे हाल ही में पिंजरे परिवर्तन के बाद कम से 2 दिन कंडीशनिंग शुरू करने की सिफारिश की है । अध्ययन के दौर से गुजर चूहों में तनाव के प्रभाव को और कम करने के लिए, मल और मूत्र की गंध सहित पिछले विषयों से शेष घ्राण संकेतों को कम करने के लिए उचित देखभाल की जानी चाहिए। इसलिए, प्रत्येक माउस से पहले और बाद में कक्ष की सफाई महत्वपूर्ण है। अशांति के अन्य संभावित स्रोतों से बचने के लिए, किसी भी अन्य चल रहे प्रयोगों से अलग कमरे में इस प्रोटोकॉल का संचालन करना सबसे अच्छा है। चूहों को बहुत कम बेसलाइन फ्रीजिंग15प्रदर्शित करना चाहिए । प्रायोगिक स्थितियों का परीक्षण करने के लिए, प्रत्येक प्रयोगशाला को प्रत्येक संदर्भ में बेसलाइन ठंड का परीक्षण करने के लिए एक प्रायोगिक प्रयोग करना चाहिए।

C57BL/6J और अन्य ट्रांसजेनिक लाइनों के अलावा जो फडोक एट अल (2017)15द्वारा उपयोग की जाती हैं, यह विधि चूहों और चूहों के अन्य उपभेदों के अनुकूलन के लिए उपयुक्त होनी चाहिए20,21। हाल के डेटा (बोरकर एट अल 2020)22 सुझाव देते हैं कि पुरुष और महिला दोनों चूहे तुलनीय उड़ान प्रतिक्रियाएं दिखाते हैं, इसलिए प्रतिमान दोनों लिंगों के लिए उपयुक्त है। जैसा कि उच्च तीव्रता वाले झटकों के जवाब में चरण 2.1.2 में उल्लेख किया गया है, चूहे बहुत अधिक कूदते हैं, इस प्रकार चूहों को संदर्भ से बचने से रोकने के लिए सावधानीपूर्वक कक्ष की ऊंचाई का चयन करते हैं। संकेतों और सदमे उत्तेजनाओं के लगातार और सटीक समय को सुनिश्चित करना भी महत्वपूर्ण है। दोनों एसी और डीसी झटके प्रभावी हैं; हालांकि, डीसी झटके का उपयोग करते समय, एसी झटके के समान उड़ान स्कोर तक पहुंचने के लिए फुटशॉक तीव्रता बढ़ाना आवश्यक हो सकता है। क्योंकि डीसी झटके इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल रिकॉर्डिंग पर कम हानिकारक प्रभाव डालते हैं, इसलिए डीसी शॉक के उपयोग की सिफारिश उन अध्ययनों के लिए की जाती है जिनके लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी डेटा की आवश्यकता होती है। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि फुटशॉक की तीव्रता कम होने से उड़ान प्रतिक्रिया की तीव्रता कम हो सकती है।

जैसा कि प्रोटोकॉल में दर्शाया गया है, उड़ान स्कोर की गणना टोन और सफेद शोर के दौरान गति डेटा को सामान्य करके उन्हें व्यक्तिगत परीक्षण पूर्व-एससी गति मूल्यों के साथ विभाजित करके की जाती है। हालांकि, यदि एक माउस पूर्व-SCS के दौरान ठंड के बेहद उच्च स्तर को प्रदर्शित करता है, तो परिणामी उड़ान स्कोर बहुत अधिक हो सकता है, इस प्रकार डेटा परिवर्तनशीलता में वृद्धि होती है। इसे एक अलग बेसलाइन माप का उपयोग करके दरकिनार किया जा सकता है, जैसे सत्र की शुरुआत में 3 मिनट बेसलाइन अवधि से औसत गति डेटा या व्यक्तिगत परीक्षण पूर्व-एससी मूल्यों के बजाय समग्र पूर्व-एससी (5 परीक्षणों का औसत गति) की औसत गति का उपयोग करके।

खतरे के लिए लचीला और तेजी से व्यवहार अनुकूलन अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण है। अधिकांश शास्त्रीय डर कंडीशनिंग प्रोटोकॉल उन स्थितियों का उपयोग करते हैं जो डर सीखने के एकमात्र निर्धारक के रूप में ठंड को प्रेरित करते हैं। इस प्रोटोकॉल का लाभ यह है कि यह विषयों के भीतर जटिल रक्षात्मक राज्य संक्रमण के अध्ययन के लिए अनुमति देता है । पहले, इस मॉडल का उपयोग यह पता लगाने के लिए किया जाता था कि व्यवहार परिवर्तन केंद्रीय एमिग्डाला15,23में स्थानीय आवर्ती निरोधात्मक सर्किट द्वारा संसाधित किए जाते हैं। इस प्रतिमान ने शोधकर्ताओं को रक्षात्मक व्यवहार21के चयन के लिए कोर्टिको-थैलेसीमिक सर्किट को स्पष्ट करने में भी सक्षम बनाया । इन अध्ययनों से पता चलता है कि इस विधि एक विषय के भीतर रक्षात्मक व्यवहार के बीच तेजी से संक्रमण के तंत्रिका सर्किट नियंत्रण की जांच अध्ययन की सुविधा होगी । इसमें चिंता, पैनिक डिसऑर्डर या पीटीएसडी24, 25के न्यूरोबायोलॉजिकल अंडरपिनिंग की बेहतर समझ विकसित करने के लिए संभावित अनुप्रयोग हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम को लुइसियाना बोर्ड ऑफ रीजेंट्स सपोर्ट फंड (LEQSF (2018-21)-RD-A-17 और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ के नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ हेल्थ के माध्यम से पुरस्कार संख्या R01MH122561 के माध्यम से समर्थन दिया गया था । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करता है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Neutral context Plexiglass cylinder 30 X 30 cm 
Fear conditioning box Med Associates, Inc. VFC-008 25 X 30 X 35 cm dimentions
Audio generator  Med Associates, Inc. ANL-926 
Shocker Med Associates Inc. ENV-414S Stainless steel grid
Speaker Med Associates, Inc. ENV-224AM Suitable for pure tone and white noise 
C57/BL6J mice Jackson laboratory, USA 664 Aged 3-5 month
Cineplex software (Editor/ studio) Plexon CinePlex Studio v3.8.0 For video tracking and behavioral scoring analysis
MedPC software V Med Associates, Inc. SOF-736
Neuroexplorer Plexon Used to extract the freezing data scored in PlexonEditor
GraphPad Prism 8 GraphPad Software, Inc. Version 8 Statistical analysis software

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References

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व्यवहार अंक १६७ डर कंडीशनिंग ठंड उड़ान चिंता भय आतंक रक्षात्मक व्यवहार
एक उपन्यास पावलोवियन डर कंडीशनिंग प्रतिमान ठंड और उड़ान व्यवहार का अध्ययन करने के लिए
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Borkar, C. D., Fadok, J. P. A Novel Pavlovian Fear Conditioning Paradigm to Study Freezing and Flight Behavior. J. Vis. Exp. (167), e61536, doi:10.3791/61536 (2021).

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