Isolamento di fluidi prossimali per studiare il microambiente tumorale dell'adenocarcinoma pancreatico

Greta Donisi; Marialuisa Barbagallo; Giovanni Capretti; Gennaro Nappo; Panteleimon  G. Takis; Alessandro Zerbi; Federica Marchesi; Nina Cortese

doi:10.3791/61687

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Articolo metodologico

Isolamento di fluidi prossimali per studiare il microambiente tumorale dell'adenocarcinoma pancreatico

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DOI:

10.3791/61687

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5 novembre 2020

Greta Donisi^*¹ , Marialuisa Barbagallo^*² , Giovanni Capretti¹^,³ , Gennaro Nappo¹^,³ , Panteleimon G. Takis⁴^,⁵^,⁶ , Alessandro Zerbi¹^,³ , Federica Marchesi²^,⁷ , Nina Cortese²

¹Section of Pancreatic Surgery, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ²Department of Immunology and Inflammation, Humanitas Clinical and Research Center-IRCCS, ³Department of Biomedical Sciences, Humanitas University, ⁴Giotto Biotech S.R.L., ⁵Section of Bioanalytical Chemistry, Division of Systems Medicine, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Imperial College London, ⁶National Phenome Centre, Department of Metabolism, Digestion and Reproduction, Faculty of Medicine, Imperial College London, ⁷Department of Medical Biotechnology and Translational Medicine, University of Milan

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Il succo pancreatico è una preziosa fonte di biomarcatori per il cancro del pancreas umano. Descriviamo qui un metodo per la procedura di raccolta intraoperatoria. Per superare la sfida di adottare questa procedura in modelli murini, suggeriamo un campione alternativo, il liquido interstiziale tumorale, e descriviamo qui due protocolli per il suo isolamento.

Abstract

L'adenocarcinoma pancreatico (PDAC) è la quarta causa di morte correlata al cancro e presto diventerà la seconda. Vi è un urgente bisogno di variabili associate a specifiche patologie pancreatiche per aiutare la diagnosi differenziale preoperatoria e la profilazione del paziente. Il succo pancreatico è un fluido corporeo relativamente inesplorato che, a causa della sua vicinanza al sito tumorale, riflette i cambiamenti nel tessuto circostante. Qui descriviamo in dettaglio la procedura di raccolta intraoperatoria. Sfortunatamente, tradurre la raccolta di succo pancreatico in modelli murini di PDAC, per eseguire studi meccanicistici, è tecnicamente molto impegnativo. Il liquido interstiziale tumorale (TIF) è il fluido extracellulare, al di fuori del sangue e del plasma, che bagna le cellule tumorali e stromali. Analogamente al succo pancreatico, per la sua proprietà di raccogliere e concentrare le molecole che si trovano diluite nel plasma, la TIF può essere sfruttata come indicatore di alterazioni microambientali e come preziosa fonte di biomarcatori associati alla malattia. Poiché la TIF non è facilmente accessibile, sono state proposte varie tecniche per il suo isolamento. Descriviamo qui due metodi semplici e tecnicamente poco impegnativi per il suo isolamento: la centrifugazione tissutale e l'eluizione tissutale.

Introduzione

L'adenocarcinoma duttale pancreatico (PDAC) è uno dei tumori più aggressivi e presto diventerà la seconda causa di morte ^1,2,3. È noto per il suo microambiente immunosoppressivo e per la sua scarsa risposta ai protocolli di immunoterapia⁴. Attualmente, la resezione chirurgica è ancora l'unica opzione curativa per il PDAC, ma c'è un'alta frequenza di recidive precoci e complicanze postchirurgiche. La mancanza di sintomi specifici fino a uno stadio avanzato non consente una diagnosi precoce, contribuendo alla scadenza della malattia. Inoltre, la sovrappo....