Summary
Das vorliegende Protokoll beschreibt die Drahtmyographentechnik zur Messung der vaskulären Reaktivität der Koronararterie der Ratte.
Abstract
Als Schlüsselereignis von Erkrankungen des Herz-Kreislauf-Systems wurde die koronare Herzkrankheit (KHK) weithin als Hauptursache für Atherosklerose, Myokardinfarkt und Angina pectoris angesehen, die das Leben und die Gesundheit von Menschen auf der ganzen Welt ernsthaft bedrohen. Wie man jedoch die dynamischen biomechanischen Eigenschaften isolierter Blutgefäße aufzeichnet, hat die Menschen lange verwirrt. Inzwischen ist die präzise Positionierung und Isolierung von Koronararterien zur Messung dynamischer Veränderungen der vaskulären Spannung in vitro zu einem Trend in der Entwicklung von CAD-Medikamenten geworden. Das vorliegende Protokoll beschreibt die makroskopische Identifizierung und mikroskopische Trennung von Rattenkoronararterien. Die Kontraktions- und Dilatationsfunktion des Koronararterienrings entlang des Gefäßdurchmessers wurde mit dem etablierten Multimyographensystem überwacht. Die standardisierten und programmierten Protokolle der Koronarangspannungsmessung, von der Probenahme bis zur Datenerfassung, verbessern die Wiederholbarkeit der experimentellen Daten enorm, was die Authentizität der vaskulären Spannungsaufzeichnungen nach physiologischen, pathologischen und medikamentösen Eingriffen gewährleistet.
Introduction
Die koronare Herzkrankheit (KHK) wurde weithin als typische und repräsentative Herz-Kreislauf-Erkrankung anerkannt und ist die häufigste Todesursache sowohl in Industrie- als auch in Entwicklungsländern 1,2. Als Blut- und Sauerstoffversorgungsweg für eine normale kardiale physiologische Funktion gelangt zirkulierendes Blut durch zwei Hauptkoronararterien und ein Blutgefäßnetzwerk auf der Oberfläche des Myokards in das Herz und nährt eses 3,4. Cholesterin und Fettablagerungen in den Koronararterien unterbrechen die Blutversorgung des Herzens und die heftige Entzündungsreaktion des Gefäßsystems, was zu Atherosklerose, stabiler Angina, instabiler Angina pectoris, Myokardinfarkt oder plötzlichem Herztodführt 5,6. Als Reaktion auf eine pathologische Stenose der Koronararterien befriedigt der kompensatorisch beschleunigte physiologische Herzschlag die Blutversorgung des Herzens selbst oder der lebenswichtigen Organe des Körpers, indem er die Leistung des linken Ventrikels7 erhöht. Wenn eine längere Koronarstenose nicht rechtzeitig gelindert wird, können sich in bestimmten Bereichen des Herzens ausgedehnte neue Blutgefäße entwickeln8. Gegenwärtig umfasst die klinische Behandlung von CAD häufig medikamentöse Thrombolyse oder chirurgische mechanische Thrombolyse und einen exogenen bionischen Gefäßbypass mit häufigen Medikamenten und großer chirurgischer Behinderung9. Daher ist die funktionelle Untersuchung der physiologischen Aktivität der Koronararterien immer noch ein dringender Durchbruch für Herz-Kreislauf-Erkrankungen10.
Es gibt keine verfügbaren technischen Mittel zur Erkennung der koronaren physiologischen Aktivität, mit Ausnahme von drahtlosen Telemetriesystemen, die in vivo Koronardruck, Gefäßspannung, Blutsauerstoffsättigung und pH-Werte dynamisch aufzeichnenkönnen 11. Angesichts der strukturellen Geheimhaltung und Komplexität der Koronararterien sind daher die genaue Identifizierung und Isolierung der Koronararterien zweifellos die beste Wahl für die Erforschung mehrerer Mechanismen der CAD in vitro4.
Ein Serien-Multimyographensystem, insbesondere ein mikrovaskulärer Spannungsdetektor für Drahtmikroskopie (siehe Materialtabelle), ist ein sehr ausgereiftes marktfähiges Gerät zur Erfassung von In-vitro-Gewebespannungsänderungen kleiner Gefäß-, Lymph- und Bronchienröhren mit den Eigenschaften einer hochpräzisen und kontinuierlichen dynamischen Aufzeichnung12. Das besagte System wurde umfassend eingesetzt, um In-vitro-Gewebespannungseigenschaften von Hohlraumstrukturen mit Durchmessern von 60 μm bis 10 mm zu erfassen. Die kontinuierlichen Erwärmungseigenschaften der Plattform der Drahtmikroskopie gleichen die Stimulation der nachteiligen äußeren Umgebung weitgehend aus. In der Zwischenzeit ermöglichen uns die konstanten Eingaben des Gasgemisches und die pH-Werte, genauere Gefäßspannungsdaten in einem ähnlichen physiologischen Zustandzu erhalten 13. In Anbetracht der Komplexität der anatomischen Lokalisation von Koronararterien von Ratten (Abbildung 1) hat seine Isolierung jedoch die Erforschung diversifizierter kardiovaskulärer Erkrankungen und der Arzneimittelentwicklung durch den Mechanismus verwirrt und eingeschränkt. Daher stellt das vorliegende Protokoll die anatomische Lage und den Trennprozess der Koronararterie der Ratte im Detail vor, gefolgt von einer Spannungsmessung auf der Plattform der Drahtmikroskopie14.
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Protocol
Das Tierprotokoll wurde vom Management Committee der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine überprüft und genehmigt (Record No. 2021-11). Männliche Sprague Dawley (SD) Ratten (260-300 g, 8-10 Wochen alt) wurden für die vorliegende Studie verwendet. Die Ratten wurden in einer Tierkammer gehalten und konnten während des Experiments frei trinken und essen.
1. Lösungsvorbereitung
- Es wird eine physiologische Salzlösung (PSS) hergestellt, indem 118 mM NaCl, 4,7 mM K+, 2,5 mMCaCl2, 1,2 mMKH2PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H 2O,25mM NaHCO 3, 11 mM D-Glucose und 5 mM HEPES (siehe Materialtabelle) gelöst werden.
- Es wird eine Salzlösung mit hohem K+-Gehalt hergestellt, indem 58 mM NaCl, 60 mM K+, 2,5 mM CaCl 2, 1,2 mM KH 2 PO4, 1,2 mM MgCl2∙6H 2O, 25 mM NaHCO 3, 11 mMD-Glucose und 5 mM HEPES gelöst werden.
- Die beiden oben genannten Lösungen werden gesättigt und mit einem Mischgas von 95% O2 und 5% CO2 blasen. In der Zwischenzeit werden die pH-Werte der Lösung zwischen 7,38 und 7,42 mit 2 mM NaOH gehalten.
HINWEIS: Detaillierte Informationen zur Lösungsvorbereitung finden Sie unter Referenz15.
2. Koronararteriendissektion der Ratte
- Betäuben Sie die Ratte durch Inhalation von 2% Isofluran. Bestätigen Sie die Tiefenanästhesie durch Zehenkneifen und verabreichen Sie bei Bedarf zusätzliche Anästhetika. Öffnen Sie dann sofort die Brusthöhle, um das Herz auf dem tragbaren Operationstisch nach einem zuvor veröffentlichten Bericht12 freizulegen.
- Nachdem Sie das Herz dissoziiert und entfernt haben, lassen Sie das restliche Blut aus allen Herzkammern ab, indem Sie es leicht mit einer medizinischen Kunststoffzange zusammendrücken. Geben Sie das vorverarbeitete Herz schnell in eine Petrischale mit 95%O2 + 5% CO2 gesättigtem PSS bei 4 °C mit einem pH-Wert von 7,40.
- Um die anatomische Position der Koronararterien genau zu identifizieren, passen Sie die Haltung des isolierten Herzens unter dem Lichtmikroskop gemäß dem schematischen Diagramm an (Abbildung 2A).
HINWEIS: In der Frontalansicht befanden sich die rechte Ohrmuschel und die Lungenarterie oben links bzw. oben rechts.- Schneiden Sie die linke und rechte Ventrikelhöhle entlang der interventrikulären Septum von der Wurzel der Lungenarterie mit chirurgischer Schere und Pinzette ab (Abbildung 2B).
- Um die linke und rechte Koronararterien vom Myokardgewebe zu dissoziieren, sezieren Sie den rechten Ventrikel unter einem optischen anatomischen Mikroskop, um den rechten Koronararterienzweig gründlich freizulegen. Identifizieren Sie dann die Position der linken Koronararterie, indem Sie das Herzgewebe um 45° im Uhrzeigersinn drehen (Abbildung 2D).
- Nachdem Sie das umgebende klebrige Myokardgewebe entfernt haben, erkennen Sie explizit die pulsierenden linken (ca. 5 mm) und rechten (ca. 5 mm) Koronararterien. Trennen Sie die Koronararterien in der Mitte sofort und tauchen Sie bei 4 °C vollständig in PSS ein. Erwerben Sie einen arteriellen Ring von etwa 2 mm, indem Sie die abgelöste Arterie mit einer anatomischen Schere vertikal schneiden, um die Gefäßspannung unter verschiedenen Reizen aufzuzeichnen (Abbildung 2E).
3. Aufhängung und Fixierung des arteriellen Rings
HINWEIS: Weitere Informationen zu diesem Schritt finden Sie unter Referenz14.
- Bereiten Sie zwei 2 cm lange Edelstahldrähte vor (siehe Materialtabelle) und tränken Sie sie in einer 4 °C PSS-Lösung, die mit 95% O 2 + 5% CO2 gesättigt ist. Führen Sie beide Drähte parallel durch den arteriellen Ring zusammen mit der Richtung des Gefäßes unter einem optischen anatomischen Mikroskop und mit Drähten gleicher Länge, die an beiden Enden der Gefäßhöhle freiliegen.
- Befestigen Sie den arteriellen Ring mit dem Stahldraht vorne und hinten im Bad des Drahtes Mikrograph, gefüllt mit sprudelndem PSS mit 95% O 2 + 5% CO2. Drehen Sie den horizontalen Schraubenknopf für einen angemessenen vorderen und hinteren Abstand, so dass die beiden Drähte horizontal sind und sich der arterielle Ring in einem natürlichen Entspannungszustand befindet.
- Öffnen Sie nach der Installation des DMT-Bades am Thermostatgerät die Datenerfassungssoftware (siehe Materialtabelle), um sicherzustellen, dass das entsprechende Wegsignal aufgezeichnet wurde. Stellen Sie die folgenden Parameter ein: Okularkalibrierung (mm/div): 0,36; Zieldruck (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; Online-Mittelungszeit: 2 s; Verzögerungszeit: 60 S. Die Schritte der arteriellen Ringfixierung sind in Abbildung 3 dargestellt.
4. Standardisierung der Gefäßspannung im arteriellen Ring der Ratte
HINWEIS: Für verschiedene Hohlraumproben war eine optimale Anfangsspannung erforderlich, damit die Gefäße eine außergewöhnliche Aktivität in vitro aufrechterhalten konnten. Weitere Informationen finden Sie unter Referenz15.
- Erreichen Sie die optimale Anfangsspannung des arteriellen Rings, indem Sie eine angemessene Spannung entlang des Durchmessers des Gefäßes anwenden.
ANMERKUNG: Basierend auf der vorherigen Studie 16 wurde die maximale Agonisten-induzierte Spannung beim Faktor k Wert von 0,90 mit der Anfangsdehnungsspannung von 1,16 ± 0,04 mN/mm erreicht (Referenzwerte für verschiedene Gefäßproben: k-Wert, 0,90-0,95; Anfangsspannung, 1,16-1,52 mN/mm). - Setzen Sie an dieser Stelle den angezeigten Gefäßspannungswert auf Null. Danach wenden Sie einen 3 mN Zugreiz auf den arteriellen Ring an, indem Sie die Spiralachse des Bades drehen.
- Nach der Inkubation für 1 h im sauerstoffgesättigten PSS-Puffer bei 37 °C, pH 7,40, stellen Sie den Spannungswert auf dem Zugkontrollfeld der Drahtmikroskopaufnahme erneut auf 0 mN ein. Der Abbindeprozess der Anfangsspannung des arteriellen Rings ist in Abbildung 4 dargestellt.
5. Reaktivitätserkennung des Koronararterienrings
- Führen Sie die kontraktile Aktivität des Koronararterienrings mit der Drahtmyographentechnik 14 durch und validieren Sie in drei separaten Operationen, indem Sie mit 60 mM K + -Lösung für jeweils10 min stimulieren.
- Nach jeder Stimulation spülen Sie das Bad mit sauerstoffgesättigtem PSS, bis der Gefäßtonus in seinen ursprünglichen Zustand zurückkehrt.
HINWEIS: Nur wenn die Spannungsschwankung der drei parallelen Messungen weniger als 10% betrug und die Amplitude jeder Kontraktion größer als 1 mN/mm war, konnten qualifizierte und hochaktive arterielle Ringe für weitere Experimente verwendet werden. Die Aktivitätsüberprüfung des Rattenkoronarrings ist in Abbildung 5 dargestellt.
6. Postoperative Behandlung
- Nach der Operation die Tiere nach institutionell genehmigten Protokollen einschläfern.
ANMERKUNG: Für die vorliegende Studie wurden die Tiere durch Einatmen von überschüssigem Isofluran eingeschläfert.
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Representative Results
Anatomisch positionierte, tief im Myokardgewebe verteilte und verborgene Koronararterien der Ratten waren nicht leicht zu erkennen. Durch den Vergleich der Koronararterien von Menschen (Abbildung 1A) und Ratten (Abbildung 1B) wurde eine schnelle und genaue Trennung der Koronararterien von Ratten gemäß dem Probenahmeverfahren in Abbildung 2 durchgeführt. Nach der präzisen Lokalisierung der rechten Ohrmuschel, der Lungenarterie und der Spitze von vorne unter einem optischen Mikroskop wurde das Myokard entlang der in Abbildung 2A gezeigten durchgezogenen schwarzen Linie seziert. Etwa 5 mm des interventrikulären Astes der Koronararterie waren unserer Ansicht deutlich ausgesetzt. Nach einer feinen Trennung des klebrigen Myokards, das die Ventrikelseptumarterie umgibt, wurde ein 2 cm langer Draht verwendet, um eine 2 mm lange Schleife der Koronararterie in Richtung Gefäßausrichtung zu durchqueren. Sofort wurde der abgelöste 2-mm-Koronarring dann fest im DMT-Bad fixiert, wie in Abbildung 3 gezeigt. Nachdem eine anfängliche Spannung von 3 mN auf den arteriellen Ring aufgebracht wurde (Abbildung 4), überschritt seine Spannung mehr als 2 mN, indem dreimal parallel 60 mM K+ angewendet wurden (Abbildung 5). Somit hatten die oben genannten Verfahren zu einem isolierten Koronarring mit ausgezeichneter physiologischer Aktivität geführt.
Kumulative K+ (20, 28, 39, 55, 77 und 108 mM) oder U46619 (0,01, 0,03, 0,1, 0,3 und 1 μM) wurden dem Bad von DMT 620M zugesetzt, was zu einem konzentrationsabhängigen Anstieg des In-vitro-Gefäßtonus führte. Die nächste Konzentration von K+ oder U46619 (ein Thromboxan A2 (TP)-Rezeptoragonist)15 wurde hinzugefügt, als der Vasokonstriktionseffekt ein Plateau erreichte. Die experimentellen Ergebnisse sind in Abbildung 6A,B dargestellt. Bei isolierten Koronarringen, die durch K+ (60 mM) und U46619 (0,3 μM) eingeengt waren, verursachte das Testmedikament Apigenin (1, 3, 10, 30 und 100 μM) überraschend konzentrationsabhängig eine Vasodilatation (Abbildung 6C).
Abbildung 1: Freihandzeichnungen von Koronararterien von Menschen und Ratten. (A) stellt die Merkmale der oberflächlichen Verteilung der linken und rechten Koronararterien aus der Vorderansicht des menschlichen Herzens dar und ist mit bloßem Auge leicht zu erkennen. (B) zeigt die linken und rechten Koronararterien der Ratte tief im Myokard und ihr verzweigtes interventrikuläres Septum. Abkürzungen: RCA = rechte Koronararterie; LCA = linke Koronararterie; ISB = interventrikulärer Septumzweig. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 2: Diagramm der Koronararterientrennung bei Ratten. (A) Die rechte Ohrmuschel, die Lungenarterie, die Spitze und die anatomische Linie des Rattenherzens wurden von vorne unter einem Lichtmikroskop beobachtet. (B) Die links- und rechtsventrikulären Lumen wurden entlang des Septums von der Wurzel der Lungenarterie eingeschnitten. (C) Anatomische Lage der linken und rechten Koronararterien und ihres interventrikulären Septums. (D) Ein 2 mm Ring der Arterie. (E) Der arterielle Ring wird durch Draht entlang der Richtung des Gefäßes befestigt. Abkürzungen: RA = rechte Ohrmuschel; PA = Lungenarterie; RCA = rechte Koronararterie; ISB = interventrikulärer Septumzweig; LCA = linke Koronararterie. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 3: Ein Schema des arteriellen Montageverfahrens. Der arterielle Ring mit Draht wurde auf ( A ) übertragen und auf das DMT-Bad (B) geklemmt. Der Stahldraht wurde im Uhrzeigersinn nach links oben (C ) und links unten (D) befestigt und verschraubt. (E) Die Kiefer wurden auseinander geschraubt, um Platz zu schaffen, damit der zweite Draht durch den arteriellen Ring gehen konnte. (F) Der zweite Draht verlief parallel durch den arteriellen Ring. Der Stahldraht wurde im Uhrzeigersinn nach rechts oben (G ) und rechts unten (H) fixiert und verschraubt. (I) Die Kiefer wurden lose verschraubt, um den arteriellen Ring in seinem natürlichen Zustand zu belassen. Die grünen Linien stellen die Drähte und die orangefarbenen Zylinder den isolierten Ausfallring von 2 mm dar. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 4: Normalisierungsverfahren des arteriellen Rings. Nachdem die Spannung des festen isolierten arteriellen Rings auf 0 mN zurückgekehrt war, wurde gleichzeitig eine Zugkraft von 3 mN auf den arteriellen Ring angewendet. Nach 5 min sank die Gefäßspannung auf 2,5 mN. Durch Erhöhung der Spannung auf 3 mN und Stabilhalten für 5 min wurde die Spannung des Koronararterienrings auf 0 mN initialisiert und für 1 h für nachfolgende Studien zur vaskulären Spannung verschiedener Reize ruhend. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 5: Der Test der vaskulären Reaktivität. Drei Anwendungen von 60 mM K+ stimulierten die Spannung des isolierten Koronararterienrings auf mehr als 2 mN und die drei Messungen waren weniger als 10%, was auf eine überlegene vaskuläre Aktivität hindeutet. Nach jeder Stimulation wurde das Bad sanft mit einer 37 °C sauerstoffgesättigten PSS-Lösung gespült, bis die Spannung 0 mN betrug. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
Abbildung 6: Repräsentativer Tracer der kumulativen Dosiskontraktion der Koronararterie der Ratte über K+ oder U46619. Als die Dosis von K+(A) und U46619 (B) zunahm, nahm die Kraft dosisabhängig zu. (C) bezogen auf die entspannende Wirkung von Apigenin auf 60 mM K+- und 0,3 μM U46619-kontrahierten arteriellen Ring in konzentrationsabhängiger Weise. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
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Discussion
Die Störung der koronaren Mikrozirkulation, an der ein breites Spektrum von Patienten mit KHK beteiligt ist, wurde allmählich erkannt und betraf die Grundlage für eine adäquate Myokardperfusion. In Anbetracht der schwerwiegenden Komplikationen der plötzlichen koronaren Herzkrankheit und der Herz-Kreislauf-Erkrankung sind eine rechtzeitige medikamentöse Prävention und Behandlung für eine klinische Person mit CAD17 äußerst wichtig. Zwangsläufig haben die Geheimhaltung der Anatomie der Koronararterien und die Komplexität ihrer physiologischen Struktur die rationale und wissenschaftliche Bewertung der Wirksamkeit von Medikamenten und Behandlungen für CAD 18,19,20,21,22,23,24,25 stark eingeschränkt. . Zweifellos ist die genaue Lokalisation und Isolierung aktiver Koronararterien eine Voraussetzung für die Förderung der Erforschung pathologischer Mechanismen und die Bewertung von Präventions- und Behandlungsmaßnahmen von KHK-bedingten Erkrankungen. Die Plattform der Drahtmikroskopie eignet sich zur unermüdlichen Erfassung der In-vitro-Gewebespannung mit Ring- und Hohlraumstrukturen mit einem Durchmesser von 60 μm bis 10 mm. Der Koronararterienring kann durch zwei Drähte mit einer konstanten Temperatur- und Sauerstoffkontrolle an der Kammer befestigt werden. Die Daten der Vasokonstriktion und Entspannung nach Zugabe verschiedener Medikamente werden über den Zugspannungssensor in den Computer eingegeben, wobei die Daten kontinuierlich erfasst und dokumentiertwerden 14.
Dieser Artikel beschreibt hauptsächlich die konkrete Position und den Trennprozess der Rattenkoronararterie. Und der dynamische Prozess der koronaren Spannungsänderungen bei Ratten wurde mit dem Drahtmikroskopsystem gemessen. Angesichts der Heterogenität von Menschen- und Rattenarten müssen wir uns dieser Unterschiede bewusst sein, wenn wir nach Koronararterien von Ratten suchen und diese isolieren. Die Rattenkoronararterien sind in linke und rechte Arterien mit einem unabhängigen interventrikulären Septumast unterteilt. Die menschlichen Koronararterien befinden sich auf der Oberfläche des Herzens, während die Koronararterien der Ratten etwas tiefer sind. Bei der Messung der arteriellen Ringspannung wurde die gesamte gepufferte Lösung gesättigt und mit 95%O2 + 5% CO2 bei 37 °C, pH = 7,40 geblasen. Der feste Prozess des arteriellen Rings durch zwei Drähte wurde ausführlich vorgestellt. Die Arterie im Körper befindet sich eher in einem Zustand der Mikroverengung als in einem Zustand völliger Entspannung. Und die kontraktile Funktion der Arterie ist eng mit der auf sie ausgeübten Zugkraft bis zu einem gewissen Grad verbunden. Daher ist es notwendig, den arteriellen Ring so zu standardisieren, dass er sich in einem optimalen vorbelasteten Zustand befindet, um die überlegene vaskuläre physiologische Aktivität im nachfolgenden Experiment aufrechtzuerhalten. Da ein hoher K+-Zustand (60 mM) die Zellmembran depolarisieren und spannungsgesteuerte Ca2+-Kanäle aktivieren kann, verursacht dies den Zustrom von extrazellulärem Ca2+ und arterieller Kontraktion26.
Im Test der Vasokonstriktion und -dilatation wurde die kontraktile Wirkung von K+ oder U46619 auf die Koronararterien von Ratten untersucht. In den Ergebnissen können K+ oder U46619 die Koronararterien von Ratten konzentrationsabhängig stetig verengen, indem sie auf Ionenkanäle oder spezifische Rezeptoren wirken. K+ verengt Gefäße hauptsächlich durch Depolarisation von Zellmembranen und Öffnen von L-Typ Ca 2+ Kanälen27. Währenddessen verengt U46619, ein Analogon von TXA2, die Gefäße hauptsächlich durch die Aktivierung von zirkulären Nukleotid-Gated Kanälen und TXA2-Rezeptoren. Apigenin, eine Art Flavonoid, kommt häufig in Obst, Gemüse und traditionellen chinesischen Arzneimitteln (Samenplantaginis und chinesischer Starjasmin) vor)28. Die Ergebnisse deklarierten, dass Apigenin die Kontraktion der Koronararterien für 60 mM K+ und 0,3 μM U46619 Stimuli konzentrationsabhängig erweitern könnte. Am Ende des Experiments wurde der Koronarring mit günstiger Aktivität erneut durch Zugabe von 60 mM K + validiert, was zu einer Vasokonstriktion führte, die der der ursprünglichen Stimulation ähnelte. Obwohl sich die Studie hauptsächlich auf Koronararterien konzentrierte, war das Drahtmikroskopiesystem auch auf andere extrem kleine Gewebegefäße, Lymphgefäße und Bronchus anwendbar. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieser Artikel hauptsächlich die Lage und Isolierung von Koronararterien von Ratten beschreibt. In der Zwischenzeit wurden seine Spannungsänderungen mit der Drahtmikroskopie-Systemplattform gemessen, die eine genaue und reproduzierbare Methodik für die CAD-Exploration bietet.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Acknowledgments
Diese Arbeit wurde durch das Key R&D-Projekt des Sichuan Provincial Science and Technology Plan (2022YFS0438), der National Natural Science Foundation of China (82104533), der China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273) und der Abteilung für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan (2021YJ0175) unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Apigenin | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | 150731 | |
| CaCl2 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A501330 | |
| D-glucose | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A610219 | |
| HEPES | Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China | S3872 | |
| KCl | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100395 | |
| KH2PO4 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100781 | |
| LabChart Professional version 8.3 | ADInstruments, Australia | — | |
| MgCl2·6H2O | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100288 | |
| Multi myograph system | Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark | 620M | |
| NaCl | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100241 | |
| NaHCO3 | Sangon Biotech Co., Ltd., Shanghai, China | A100865 | |
| Steel wires | Danish Myo Technology, Aarhus, Denmark | 400447 | |
| U46619 | Sigma, USA | D8174 |
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