ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
כאן מתוארת שיטת ספקטרומטריית מסה מרובעת של גז ראש (HS-GC-MS/MS) המתאימה לקביעת טרימתילאמין (TMA) בתרופות שמקורן מן החי. הפרוטוקול כולל טיפול מקדים לדגימה, טיפול במרחב הראש, תנאי ניתוח, תיקוף מתודולוגי וקביעת TMA בתרופות שמקורן בבעלי חיים.
Abstract
לתרופות מן החי יש מאפיינים ייחודיים והשפעות מרפא משמעותיות, אך לרובן יש ריח דגים ברור, וכתוצאה מכך היענות לקויה של חולים קליניים. טרימתילאמין (TMA) הוא אחד ממרכיבי ריח הדג העיקריים ברפואה מן החי. קשה לזהות TMA במדויק באמצעות שיטת הזיהוי הקיימת בשל הלחץ המוגבר בבקבוקון הראש הנגרם על ידי התגובה החומצית-בסיסית המהירה לאחר הוספת lye, הגורמת ל-TMA לברוח מבקבוקון headspace, מה שמעכב את התקדמות המחקר של ריח הדג של תרופות שמקורן בבעלי חיים. במחקר זה הצענו שיטת זיהוי מבוקרת שהציגה שכבת פרפין כשכבת בידוד בין חומצה לליי. קצב ייצור TMA יכול להיות נשלט ביעילות על ידי הנזלה איטית של שכבת הפרפין באמצעות חימום תנור תרמוסטטי. שיטה זו הראתה ליניאריות משביעת רצון, ניסויים מדויקים והתאוששויות עם יכולת שחזור טובה ורגישות גבוהה. היא סיפקה תמיכה טכנית לנטרול ריחות של תרופות שמקורן בבעלי חיים.
Introduction
טיפול במחלות אנושיות על ידי שימוש במוצרים שמקורם בחלקי בעלי חיים ו / או תוצרי הלוואי שלהם (המכונים כאן תרופות מן החי) זוכה לתשומת לב מוגברת. הם ממלאים תפקיד חשוב בטיפול בסרטן, מחלות לב וכלי דם, שחמת הכבד, דלקת השדים ומחלות אחרות, עם יתרונות של השפעה חזקה, מינון קטן, ויעילות קלינית משמעותית וספציפית. עם זאת, תרופות שמקורן מן החי בדרך כלל יש ריח דגים בולט, אשר משפיע מאוד על ההיענות של החולים, והם שליליים במיוחד עבור ילדים 1,2. ריח הדג מגיע בעיקר מהחלבונים, חומצות האמינו, השומנים וחומרים אחרים הכלולים בתרופה, אשר מפורקים באמצעות חמצון חומצות שומן, פירוק חומצות אמינו ודרכים אחרות לייצר מגוון חומרים בעלי ריח דגים 2,3,4. ביניהם, trimethylamine (TMA) הוא גז נדיף עם ריח דגים כי קיים נרחב מזונות נרקבים או רקובים מן החי5.
עד כה, כרומטוגרפיית גז (GC), כרומטוגרפיה נוזלית (LC), כרומטוגרפיית יונים, ספקטרופוטומטריה, ספקטרומטריית כרומטוגרפיה נוזלית-מסה (LC-MS), ושיטות חיישנים שימשו בדרך כלל לגילוי TMA בסביבה, מזון ושתן 6,7,8,9. לאור הזיהום הנמוך של עמוד ה-GC ומערכת ההזרקה, כמו גם הרגישות הגבוהה, יכולת השחזור ומגבלת הגילוי הנמוכה (0.1-1 מ"ג/ק"ג), שיטת ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסה של גז Headspace (HS-GC-MS) הועדפה לניתוח מזון וביולוגי8. נכון לעכשיו, רק סין קבעה תקן לאומי עבור TMA במזון, ו- HS-GC-MS היא השיטה הראשונה בתקן GB5009.179-201610. לכן, שיטת HS-GC-MS הנ"ל נבחרה כדי לזהות TMA ברפואה שמקורה בבעלי חיים. בשלב המוקדם, קבוצת המחקר שלנו מצאה כי תקן זיהוי HS-GC-MS עבור TMA במזון יכול לזהות את ריח הדג במספר תרופות שמקורן בבעלי חיים. בשילוב עם תוצאות המחקרים11,12, ניתן להוכיח כי TMA הוא חומר המפתח הנפוץ של ריח דגים בתרופות מן החי. עם זאת, נמצא כי יכולת השחזור של תוצאות הניסוי הייתה ירודה, והיו בעיות כגון בריחת TMA ויציבות ירודה, שלא ניתן היה לאמת על ידי המתודולוגיה. זה יכול להיות בגלל העובדה שהליי הוזרק לתוך בקבוקון הראש והתגובה החומצית-בסיסית המהירה הובילה ללחץ מוגבר בבקבוקון, וכך TMA ברח מנקבובית ההזרקה, ומנע זיהוי יציב ומדויק של TMA. לכן, מחקר זה הציע שיטה משופרת לזיהוי ספקטרומטריית מסה מרובעת של גז ראש (HS-GC-MS/MS) כדי לטפל בבעיות אלה.
הפרוטוקול משפר את הטיפול המקדים לדגימה על ידי הפרדת מגיבי בסיס חומצה בטיפול המקדים בעזרת פרפין מוצק, חומר טוב לשינוי פאזה מוצק-נוזלי. כאשר הפרפין נוזל באיטיות עם עליית הטמפרטורה של הכבשן התרמוסטטי, TMA שוחרר באיטיות גם בבקבוקון הראש האטום, ובכך נמנע מעליית הלחץ הנגרמת על ידי תגובת בסיס חומצה אלימה ומהירה והבטיח זיהוי TMA יציב ומדויק. יתר על כן, הזרקת headspace בשילוב עם מצבי ניטור תגובה מרובים (MRM) ב- GC-MS/MS דיכאו ביעילות הפרעות כימיות של מטריצה והבטיחו את אמינות התוצאות. תוצאות התיקוף המתודולוגי הוכיחו כי הלינאריות, בדיקת הדיוק וקצב ההתאוששות של שיטת הזיהוי המשופרת יכולים לעמוד בדרישות, עם יכולת שחזור טובה ורגישות גבוהה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ראו טבלה 1 למידע על החומרים הרפואיים של Pheretima, Periplaneta americana ו-Hirudo. הם זוהו על ידי פרופ' שו רונצ'ון, מאוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית, כגופותיהם המיובשות של Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. ו-Whitmania pigra Whitman.
1. מיצוי דגימות
- מרסקים את Pheretima, Periplaneta americana ו-Hirudo בעזרת מטחנת צמחים (ראו טבלת חומרים), מנפים את האבקה הרפואית דרך מס' 2 (צמצם מסננת: 0.8 מ"מ) ומס' 4 (צמצם מסננת: 0.25 מ"מ) מסננות תרופות סטנדרטיות, ואוספים את האבקה בין שתי המסננות כדי לקבל את אבקת הדגימה הנדרשת.
הערה: הפרטימה רכה לאחר הריסוק, ולכן אין צורך לנפות את האבקה שלה. - יש ליטול גרם אחד של אבקה (מדויק עד 0.001 גרם) בצינור צנטריפוגה מפלסטיק בנפח 50 מ"ל, להוסיף 20 מ"ל של תמיסת חומצה טריכלורואצטית (TCA) 5% (ראו טבלת חומרים) וליצור הומוגניזציה במהירות של 1,000 סל"ד-1 למשך דקה אחת עם הומוגנייזר פיזור במהירות גבוהה.
- לאחר הומוגניזציה, צנטריפוגה בגודל 1,717 x גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר, מוסיפים מעט כותנה סופגת במשפך הזכוכית, ומסננים את הסופרנאטנט לצלוחית נפחית של 50 מ"ל.
- חזור על תהליך המיצוי לעיל פעמיים עם 15 מ"ל ו 10 מ"ל של תמיסת TCA 5%. שלב את התסנין ודלל אותו ל 50 מ"ל עם תמיסת TCA 5%.
2. הכנת מגיב
- הכינו תמיסת נתרן הידרוקסיד 20%: שקלו 20 גרם נתרן הידרוקסידי והשתמשו במים נטולי יונים, כדי לקבע את הנפח בצלוחית נפחית של 100 מ"ל.
- הכינו תמיסת TCA 5%: שקלו 25 גרם TCA והשתמשו במים נטולי יונים, כדי לקבע את הנפח בצלוחית נפחית של 500 מ"ל.
3. הכנת פתרון מלאי סטנדרטי TMA
- הכינו תמיסת מלאי סטנדרטית של TMA: שקלו 0.0162 גרם של דגימה סטנדרטית TMA הידרוכלוריד, המסו אותה בתמיסת TCA 5% וקיבעו את הנפח ל-100 מ"ל, שווה לריכוז של 100 מיקרוגרם/מ"ל של תמיסת מלאי סטנדרטית TMA. אחסנו אותו בטמפרטורה של 4°C.
- הכן פתרון שימוש סטנדרטי של TMA: קח נפח מסוים של תמיסת מלאי סטנדרטית TMA ודלל אותו צעד אחר צעד עם תמיסת TCA 5% לריכוזים של 0.1 מיקרוגרם/מ"ל, 0.5 מיקרוגרם/מ"ל, 1 מיקרוגרם/מ"ל, 2 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל ו-10 מיקרוגרם/מ"ל תמיסה סטנדרטית TMA.
4. עיבוד headspace לדוגמה
- שקלו במדויק 2 מ"ל תמיסת נתרן הידרוקסידי ו-0.5 גרם פרפין מוצק (נקודת התכה: 58-60 מעלות צלזיוס) בבקבוקון מרווח של 20 מ"ל (ראו טבלת חומרים).
- מכניסים את בקבוקון הראש לתנור ל-70 מעלות צלזיוס למשך כ-30 דקות. הפרפין המוצק נמס לחלוטין.
- הוציאו אותו, ותנו לו להתקרר לטמפרטורת החדר, כך שהפרפין יתמצק. הפרפין המוצק יאטום נתרן הידרוקסידי.
- קח 2 מ"ל מכל תמיסת מיצוי דגימה והנח אותה על גבי שכבת הפרפין, לחץ על המכסה ואטם.
- הניחו את בקבוקון מרווח הראש האטום על המכשיר (ראו טבלת חומרים) לצורך מדידה.
5. הגדרת תנאי ניתוח HS-GC-MS/MS
- ראה טבלה 2 עבור תנאי headspace ותנאי GC-MS.
- ראו טבלה 3 למידע על יונים.
6. ציור עקומה סטנדרטי
- עיין בעיבוד headspace לדוגמה בשלבים 4.1-4.3 כדי להכין את בקבוקון headspace המכיל שכבת איטום lye ופרפין.
- יש לשאוף 2 מ"ל של 0.1 מיקרוגרם/מ"ל, 0.5 מיקרוגרם/מ"ל, 1 מיקרוגרם/מ"ל, 2 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל ו-10 מיקרוגרם/מ"ל תמיסה סטנדרטית TMA בנפח 20 מ"ל, לאטום את המכסה ולמדוד במכשיר.
7. בדיקת דיוק
- עיין בעיבוד headspace לדוגמה בשלבים 4.1-4.3 כדי להכין את בקבוקון headspace המכיל lye ואת שכבת איטום הפרפין.
- יש לשאוף 2 מ"ל של תמיסה סטנדרטית TMA של 0.1 מיקרוגרם/מ"ל לתוך בקבוקון מרווח ראש של 20 מ"ל ולאטום את המכסה. לבצע שש בדיקות מקבילות במכונה בהתאם להוראות היצרן (ראה טבלת חומרים).
8. ניסוי קצב התאוששות
- קח קבוצה של Pheretima, Periplaneta Americana, ו Hirudo (S02, S05, S07; טבלה 1) כתרופות המייצגות לניסוי שיעור ההחלמה.
- קח כמה קבוצות של אבקה לדוגמה (S02, S05, S07) ואופים אותם בתנור ב 50 ° C במשך 72 שעות עד לא מזוהה TMA.
- עיין בשיטת הכנת הדגימה בסעיפים 4-6 כדי לזהות את תכולת TMA באבקת רפואה אפויה.
- קח 1 גרם של אבקה אפויה (מדויק ל 0.001 גרם), לשים אותו לתוך צינור צנטריפוגת פלסטיק 50 מ"ל, ולהוסיף 50 μL של תמיסה סטנדרטית TMA.
הערה: הריכוז של תמיסה סטנדרטית TMA הוא 100 מיקרוגרם/מ"ל, 1000 מיקרוגרם/מ"ל ו-10,000 מיקרוגרם/מ"ל. - הוסף 20 מ"ל של תמיסת TCA 5% והומוגניזציה ב 1000 סל"ד-1 למשך דקה אחת.
- לאחר הומוגניזציה, צנטריפוגה ב 1717 x גרם במשך 5 דקות, מוסיפים מעט כותנה סופגת במשפך הזכוכית ומסננים את supernatant לתוך בקבוק נפח 50 מ"ל.
- חזור על תהליך המיצוי לעיל פעמיים עם 15 מ"ל ו 10 מ"ל של תמיסת TCA 5%; שלב את התסנין ודלל אותו ל 50 מ"ל עם תמיסת TCA 5%.
9. קביעת גבולות הזיהוי (LOD) והכימות (LOQ)
- קבע את LOD לפי הריכוז המתאים כאשר יחס אות לרעש (S/N) = 3.
- קבע את LOQ לפי הריכוז המתאים כאשר S/N = 10.
10. קביעת תוכן TMA לדוגמה
- קח בערך 1 גרם של אבקה דקה של Pheretima, Periplaneta americana, ו Hirudo , בהתאמה, לחלץ את הדגימה על פי השיטה לעיל, ולקבוע אותו על המכונה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
דיאגרמות סכמטיות של עקרון העיבוד מראש והפעולה של פרוטוקול זה מוצגות באיור 1 ובאיור 2, בהתאמה. זמן השיא של TMA היה 2.3 דקות, עם צורת שיא חדה וללא הפרעות מזיהומים אחרים (איור 3). מדידת הטווח הליניארי של 0.1-10 מיקרוגרם/מ"ל תמיסה סטנדרטית TMA, עם ריכוז TMA כאבסקיסה ואזור שיא כאורדינטה, שורטטה עקומה סטנדרטית. משוואת הרגרסיה הליניארית התקבלה כ- y = 2522482x + 24255, כאשר מקדם המתאם (R2) = 0.9998, מראה קשר ליניארי טוב. LOD ו- LOQ חושבו עם S/N = 3 ו- S/N = 10, בהתאמה. ה-LOD היה 0.03 מ"ג/ק"ג וה-LOQ היה 0.11 מ"ג/ק"ג. כדי לחקור את הדיוק של שיטה זו, התוכן של TMA (0.1 מיקרוגרם / מ"ל) נקבע שש פעמים במקביל לסטיית תקן יחסית (RSD) של 5.84%, אשר הוכיחה את הדיוק הטוב של שיטה זו. קבוצת דגימות מ-Pheretima, Periplaneta americana ו-Hirudo נבחרו כדגימות מייצגות לניסוי השחזור (S02, S05, S07, בהתאמה); אלה עברו מבחני התאוששות דוקרנים על ידי ייבוש כדי להפחית TMA בצמחי המרפא, ושיעורי ההחלמה הממוצעים היו 84.49%, 94.66% ו-85.67%, בהתאמה, כאשר הדיוק עמד בדרישות הניתוח (לוח 4). TMA זוהה בתשע קבוצות של צמחי מרפא מ-Pheretima, Periplaneta Americana ו-Hirudo, בריכוזים שנעו בין 13.23-271.63 מ"ג/ק"ג (טבלה 5). לשיטת פרוטוקול זו יש תוצאות אימות מתודולוגיות טובות והיא גם זיהתה תכולת TMA בתרופות מן החי עם ריח דגים ברור.
איור 1: דיאגרמה סכמטית של עקרון התגובה של תמיסת מיצוי ליי-פרפין. (1) לשקול במדויק 2 מ"ל של תמיסת נתרן הידרוקסידי בבקבוקון מרווח של 20 מ"ל. (2) הוסיפו 0.5 גרם פרפין מוצק לבקבוקון הראש. (3) מחממים כדי להמיס את הפרפין המוצק, אשר שכבות בתמיסת נתרן הידרוקסיד וצפות מעל תמיסת הנתרן הידרוקסידי. (4) לאחר הקירור, הפרפין מתמצק ואוטם היטב מעל תמיסת הנתרן הידרוקסידי. (5) קח 2 מ"ל של תמיסת מיצוי דגימה ושים אותה על גבי שכבת הפרפין, לחץ על המכסה ואטם. (6) הניחו את בקבוקון מרווח הראש האטום על המכונה לצורך מדידה. חימום התנור התרמוסטטי ממיס את שכבת הפרפין, והמגיבים על בסיס חומצה מעל ומתחת לשכבת הפרפין מגיבים ליצירת TMA בסביבה אטומה. עיבוד הראש של הדגימה מתבצע באופן גס בסעיפים 1 עד 6. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: תרשים סכמטי של פעולת קדם-טיפול לדוגמה. (A) איטום ליי: שלב 4.1-4.3 בפרוטוקול. (ב) חילוץ דגימה: סעיף 1 ושלב 4.4 בפרוטוקול. (ג) זיהוי TMA: שלב 4.5 וסעיף 5 בפרוטוקול. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: כרומטוגרמה כוללת של יונים של TMA. ספקטוגרמה של 1 מיקרוגרם/מ"ל תמיסה סטנדרטית TMA. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
| אצווה | מקור | |
| פרטימה | S01 | לשאן סיטי, מחוז סצ'ואן |
| פרטימה | S02 | דיאנבאי סיטי, מחוז גואנגדונג |
| פרטימה | S03 | מאומינג סיטי, מחוז גואנגדונג |
| פריפלנטה אמריקנה | S04 | העיר שיצ'אנג, המחוז האוטונומי ליאנגשאן יי, מחוז סצ'ואן |
| פריפלנטה אמריקנה | S05 | מחוז מידו, מחוז דאלי, מחוז יונאן |
| פריפלנטה אמריקנה | S06 | בוז'ו סיטי, מחוז אנחואי |
| הירודו | S07 | מחוז ויישאן, ג'ינינג סיטי, מחוז שאנדונג |
| הירודו | S08 | קונשאן סיטי, מחוז ג'יאנגסו |
| הירודו | S09 | Laiwu District , ג'ינאן סיטי, מחוז שאנדונג |
טבלה 1: מידע על תרופות מן החי.
| מצב Headspace | |
| טמפרטורת התנור התרמוסטטי | 80°C |
| זמן לתרמוסטאט b לדוגמה | 30 דק' |
| טמפרטורת מחט Headspace | 100°C |
| גודל מדגם | 1 מ"ל |
| תנאי GC-MS | |
| עמודה כרומטוגרפית | אמין נדיף,30 מ'×0.32 מ"מ×5 מיקרומטר |
| תוכנית טמפרטורת עמודה | 40 ° C (0.5 דקות) _20 ° C / דקה _200 ° C (5 דקות) |
| טמפרטורת מזרק | 200 °C |
| מצב בקרת גז נשא | מהירות ליניארית קבועה |
| מצב הזרקה | הזרקה מפוצלת |
| יחס מפוצל | 10:01 |
| זרימת עמודות | 2 מ"ל/דקה |
| גודל מדגם | 1 מ"ל |
| מצב יינון | EI |
| טמפרטורת מקור יונים | 200 °C |
| טמפרטורת ממשק GC-MS | 230 °C |
| מתח גלאי | מתח כוונון +0.6 kV |
| מידע על מצב רכישה | MRM |
טבלה 2: תנאי Headspace ותנאי GC-MS/MS.
| שם מתחם | CAS | זמן שמירה (מינימום) | יון כמותי (m/z) | CE | יון ייחוס (m/z) | CE |
| טרימתילאמין | 75-50-3 | 2.308 | 58>42 | 20 | 58>30 | 7 |
טבלה 3: מידע מורכב של TMA.
| לדוגמה | ריכוז הדגימה (מ"ג/ק"ג) | ריכוז ספייק (מ"ג/ק"ג) | ריכוז נמדד (מ"ג/ק"ג) | שיעור החלמה ממוצע (%) | RSD (%) |
| S02 | 128.99 | 500.00 | 548.50 | 84.49 | 2.12% |
| S05 | 49.08 | 500.00 | 520.93 | 94.66 | 0.96% |
| S07 | 101.36 | 500.00 | 527.07 | 85.67 | 1.87% |
טבלה 4: תוצאות ניסוי שיעור החלמה של TMA בתרופות מן החי.
| לדוגמה | ריכוז הדגימה (מ"ג/ק"ג) |
| S01 | 88.11 |
| S02 | 137.34 |
| S03 | 18.63 |
| S04 | 19.10 |
| S05 | 40.50 |
| S06 | 13.23 |
| S07 | 271.63 |
| S08 | 69.73 |
| S09 | 67.70 |
טבלה 5: תוצאות קביעת ריכוז TMA בתרופות מן החי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
תרופות מן החי מגיעות מכל הגוף, איברים או רקמות, מוצרים פיזיולוגיים או פתולוגיים, הפרשות או הפרשות, ומוצרים מעובדים של בעלי חיים. TMA הוא מקור חשוב לריח דגים בתרופות מן החי; זהו חומר בעל ריח רע טיפוסי עם סף ריח נמוך מאוד (0.000032 × 10-6 V/V) וריח דגים חזק13. כיום, שיטת HS-GC-MS הנפוצה אינה יכולה לזהות TMA בתרופות מן החי בצורה יציבה ומדויקת.
פרוטוקול זה משופר במספר היבטים: (1) TMA הוא קוטבי ובסיסי יותר. בפרוטוקול זה נבחרת עמודה מיוחדת לכרומטוגרפיית גז אמין נדיף לזיהוי TMA, המבטיחה את הדיוק והרגישות של זיהוי TMA. (2) בתהליך הכנת הדגימה של שיטת HC-GC-MS ב- GB5009.179-2016, מוזרקת תמיסת נתרן הידרוקסיד בריכוז גבוה לבקבוקון האטום10. בשלב זה, התרחשות התגובה חומצה-בסיס מובילה לעלייה בלחץ בבקבוקון הראש, מה שעלול לגרום לבריחה של TMA, וכתוצאה מכך זיהוי לא מדויק של TMA. פרוטוקול זה התייחס לשיטת הזיהוי של שאריות גופרית דו-חמצנית ברפואה הסינית המסורתית14. בטיפול המקדים של הדגימה, פרפין מוצק משמש כמדיום לבידוד מגיבים על בסיס חומצה. לאחר אטימת בקבוקון חלל הראש, הפרפין נמס באיטיות תחת חימום הכבשן התרמוסטטי, נמנע מתגובת בסיס חומצה חמורה, ומספק סביבה אטומה טובה לתגובת TMA, מה שמבטיח את היציבות והדיוק של זיהוי TMA. (3) פרוטוקול זה משתמש במצב MRM ב- GC-MS/MS לרכישה וממטב את פרמטרי הזיהוי (תוכנית טמפרטורת עמודה וכו ') כדי להבטיח יעילות ודיוק אנליטיים.
יש לשים לב לנקודות הבאות בהפעלת פרוטוקול זה: (1) יש לבחור כמות מתאימה של שעוות פרפין מוצקה. מינון פרפין קטן יותר יוביל לשכבת פרפין לא אטומה ולתגובה מיידית של מגיבים על בסיס חומצה, וכתוצאה מכך יצירה ובריחה של TMA לפני האיטום. מינון פרפין גבוה יותר עלול לעכב את השחרור, ההעשרה והזיהוי של TMA. (2) הבלוטה חייבת להיות הדוקה והאטם שלם. בנוסף, יש כמה מגבלות של הפרוטוקול. TMA בתרופות מן החי הוא אנדוגני ולא ניתן להסיר אותו בצורה נקייה על ידי ייבוש; בניסוי השחזור נעשה שימוש בריכוז נמוך של תמיסה סטנדרטית TMA הידרוכלוריד, אך ההשפעה לא הייתה משביעת רצון. לכן, רק אותו ריכוז של תמיסה סטנדרטית הידרוכלוריד TMA נבחר לניסוי השחזור בפרוטוקול זה.
לסיכום, פרוטוקול זה סיפק שיטת טיפול מקדים לדוגמה וזיהוי מדויק של TMA בתרופות שמקורן בבעלי חיים. הקמת שיטה זו מילאה את הפער בשיטת הזיהוי של TMA בתרופות מן החי וסיפקה תמיכה טכנית למחקר של חומרי ריח דגים בתרופות מן החי, דבר בעל משמעות רבה לקידום המחקר, הפיתוח והיישום של תרופות מן החי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
למחברים אין מה לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82173991), ותוכנית המדע והטכנולוגיה של סצ'ואן (2022YFS0442).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Centrifuge | Beckman Coulter Trading (China) Co. | SSC-2-0213 | |
| Chinese herbal medicine grinder | Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory | HX-200K | |
| Convection oven | Sanyo Electric Co., Ltd | MOV-112F | |
| Decapper for 20 mm Aluminum caps | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | V1750004 | |
| Electronic balance | Shimadzu Corporation Japan | AUW220D | |
| Gas chromatography mass spectrometry | Shimadzu Corporation Japan | TQ-8050 NX | |
| Headspace Vial | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | 25760200 | |
| Homogenizer | Shanghai biaomo Factory | FJ200-SH | |
| Preassembled Cap | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | L4150050 | |
| Sample sieve | Zhenxing Sieve Factory | / | |
| SH-Volatile Amine | Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd | 227-3626-01 | |
| Sodium hydroxide | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022101401 | |
| Solid paraffin wax | Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory | 20221112 | |
| Trichloroacetic acid | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022102001 | |
| Trimethylamine hydrochloride | Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd | AF22022108 | |
| Ultra-pure water system | Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd | UPR-11-5T |
References
- Fan, H., et al. Material basis of stench of animal medicine: a review. China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).
- Deng, Y. J., et al. Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines. China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).
- Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage. Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).
- Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics. Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).
- Baliño-Zuazo, L., Barranco, A. A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products. Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).
- Zhao, C., et al. Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness. Food Chemistry. 392, 133318 (2022).
- Bota, G. M., Harrington, P. B. Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry. Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).
- Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).
- Mitsubayashi, K., et al. Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis. Sensors & Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).
- National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).
- Liu, X. M., et al. Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).
- Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).
- Yoshiharu, I. Odor olfactory measurement. , Japan Association on Odor Environment. Tokyo. (2004).
- Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).
Tags
כימיה גיליון 193 רפואה מן החי טרימתילאמין ריח דגים כרומטוגרפיית גז Headspace-טנדם ספקטרומטריית מסה מרובעתErratum
Formal Correction: Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry
Posted by JoVE Editors on 11/28/2023.
Citeable Link.
An erratum was issued for: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry. The Authors section was updated from:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
Haozhou Huang2
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin3
Xiaoming Bao4
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
JiaBao Liao2
Haozhou Huang3
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin4
Xiaoming Bao5
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
5Shimadzu (China) Co., Ltd
