ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
Burada, hayvansal kaynaklı ilaçlarda trimetilamin (TMA) tayini için uygun bir headspace gaz kromatografisi-tandem dört kutuplu kütle spektrometrisi (HS-GC-MS/MS) yöntemi açıklanmaktadır. Protokol, numune ön işlemini, üst boşluk tedavisini, analiz koşullarını, metodolojik doğrulamayı ve hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA'nın belirlenmesini içerir.
Abstract
Hayvansal kaynaklı ilaçların ayırt edici özellikleri ve önemli iyileştirici etkileri vardır, ancak çoğunun belirgin bir balık kokusu vardır ve bu da klinik hastaların zayıf uyumuna neden olur. Trimetilamin (TMA), hayvansal kaynaklı tıptaki en önemli balık kokusu bileşenlerinden biridir. Kostik ilavesinden sonra hızlı asit-baz reaksiyonunun neden olduğu üst boşluk şişesindeki artan basınç nedeniyle mevcut tespit yöntemini kullanarak TMA'yı doğru bir şekilde tanımlamak zordur, bu da TMA'nın üst boşluk şişesinden kaçmasına neden olur ve hayvansal kaynaklı ilaçların balık kokusunun araştırma ilerlemesini durdurur. Bu çalışmada, asit ve kostik arasında bir izolasyon tabakası olarak bir parafin tabakası ekleyen kontrollü bir tespit yöntemi önerdik. TMA üretim hızı, parafin tabakasının termostatik fırın ısıtması yoluyla yavaşça sıvılaştırılmasıyla etkin bir şekilde kontrol edilebilir. Bu yöntem, iyi tekrarlanabilirlik ve yüksek hassasiyet ile tatmin edici doğrusallık, hassas deneyler ve geri kazanımlar gösterdi. Hayvansal kaynaklı ilaçların koku giderme konusunda teknik destek sağladı.
Introduction
Hayvan parçalarından ve/veya bunların yan ürünlerinden (burada hayvansal kaynaklı ilaçlar olarak anılacaktır) elde edilen ürünleri kullanarak insan hastalıklarının tedavisi giderek daha fazla ilgi görmektedir. Kanser, kardiyovasküler hastalık, karaciğer sirozu, mastitis ve diğer hastalıkların tedavisinde güçlü bir etki, küçük dozaj ve önemli ve spesifik klinik etkinlik avantajları ile önemli bir rol oynarlar. Bununla birlikte, hayvansal kaynaklı ilaçlar genellikle belirgin bir balık kokusuna sahiptir, bu da hastaların uyumunu büyük ölçüde etkiler ve özellikle çocuklar için elverişsizdir 1,2. Balık kokusu esas olarak, yağ asidi oksidasyonu, amino asit bozunması ve balık kokusu 2,3,4 ile çeşitli maddeler üretmenin diğer yolları yoluyla ayrışan ilaçta bulunan proteinlerden, amino asitlerden, yağlardan ve diğer maddelerden gelir. Bunlar arasında trimetilamin (TMA), çürüyen veya çürümüş hayvansal kaynaklı gıdalarda yaygın olarak bulunan balık kokusuna sahip uçucu bir gazdır5.
Şimdiye kadar, gaz kromatografisi (GC), sıvı kromatografisi (LC), iyon kromatografisi, spektrofotometri, sıvı kromatografisi-kütle spektrometrisi (LC-MS) ve sensör yöntemleri, ortamda, yiyeceklerde ve idrarda TMA'yı tespit etmek için yaygın olarak kullanılmıştır 6,7,8,9. GC kolonu ve enjeksiyon sisteminin düşük kontaminasyonunun yanı sıra yüksek hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve düşük tespit limiti (0.1-1 mg/kg) göz önüne alındığında, gıda ve biyolojik analizler için tepe boşluğu gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi (HS-GC-MS) yöntemi tercih edilmiştir8. Şu anda, yalnızca Çin gıdada TMA için ulusal bir standart oluşturmuştur ve HS-GC-MS, GB5009.179-2016 standardı10'daki ilk yöntemdir. Bu nedenle, hayvansal kaynaklı tıpta TMA'yı tespit etmek için yukarıdaki HS-GC-MS yöntemi seçilmiştir. Erken aşamada, araştırma grubumuz, gıdalardaki TMA için HS-GC-MS tespit standardının çeşitli hayvan kaynaklı ilaçlardaki balık kokusunu tespit edebildiğini buldu. Çalışmaların sonuçları11,12 ile birleştiğinde, TMA'nın hayvansal kaynaklı ilaçlarda balık kokusunun ortak anahtar maddesi olduğu kanıtlanabilir. Bununla birlikte, deneysel sonuçların tekrarlanabilirliğinin zayıf olduğu ve metodoloji ile doğrulanamayan TMA kaçışı ve zayıf stabilite gibi problemlerin olduğu bulunmuştur. Bunun nedeni, kostiğin üst boşluk şişesine enjekte edilmesi ve hızlı asit-baz reaksiyonunun şişede artan basınca yol açması olabilir, böylece TMA enjeksiyon gözeneğinden kaçarak TMA'nın kararlı ve doğru bir şekilde tespit edilmesini engelleyebilir. Bu nedenle, bu çalışma, bu sorunları ele almak için geliştirilmiş bir üst boşluk gaz kromatografisi-tandem dört kutuplu kütle spektrometrisi (HS-GC-MS/MS) algılama yöntemi önermiştir.
Protokol, iyi bir katı-sıvı faz değişim malzemesi olan katı parafin yardımıyla ön işlemdeki asit-baz reaktanları ayırarak numune ön işlemini iyileştirir. Parafin, termostatik fırının sıcaklık artışıyla yavaşça sıvılaştırıldıkça, şiddetli ve hızlı asit-baz reaksiyonunun neden olduğu basınç artışını önleyerek ve kararlı ve doğru TMA tespiti sağlayarak, kapalı üst boşluk şişesinde TMA da yavaşça salındı. Ayrıca, GC-MS/MS'de çoklu reaksiyon izleme (MRM) modlarıyla birleştirilmiş üst boşluk enjeksiyonu, matris kimyasal girişimini etkili bir şekilde bastırdı ve sonuçların güvenilirliğini sağladı. Metodolojik doğrulamanın sonuçları, geliştirilmiş algılama yönteminin doğrusallığının, hassasiyet testinin ve geri kazanım hızının, iyi tekrarlanabilirlik ve yüksek hassasiyetle gereksinimleri karşılayabileceğini kanıtladı.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo'nun tıbbi malzemeleri hakkında bilgi için Tablo 1'e bakınız. Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi'nden Prof. Xu Runchun tarafından Pheretima aspergillum (E.Perrier), Periplaneta americana L. ve Whitmania pigra Whitman'ın kurutulmuş bedenleri olarak tanımlandılar.
1. Numune ekstraksiyonu
- Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo'yu bitkisel bir öğütücü ile ezin (Malzeme Tablosuna bakınız), tıbbi tozu No. 2 (elek açıklığı: 0.8 mm) ve No. 4 (elek açıklığı: 0.25 mm) standart ilaç eleklerinden eleyin ve gerekli numune tozunu elde etmek için tozu iki elek arasında toplayın.
NOT: Pheretima ezildikten sonra kabarıktır, bu nedenle tozunun elenmesine gerek yoktur. - 50 mL'lik bir plastik santrifüj tüpüne 1 g toz (0,001 g'a kadar hassas) alın, 20 mL %5 trikloroasetik asit (TCA) çözeltisi ekleyin (Malzeme Tablosuna bakın) ve yüksek hızlı dispersiyon homojenizatörü ile 1.000 rmin-1'de 1 dakika homojenize edin.
- Homojenizasyondan sonra, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 1.717 x g'da santrifüjleyin, cam huniye biraz emici pamuk ekleyin ve süpernatanı 50 mL'lik hacimsel bir şişeye süzün.
- Yukarıdaki ekstraksiyon işlemini 15 mL ve 10 mL% 5 TCA çözeltisi ile iki kez tekrarlayın. Süzüntüyü birleştirin ve% 5 TCA çözeltisi ile 50 mL'ye seyreltin.
2. Reaktif hazırlama
- % 20 sodyum hidroksit çözeltisi hazırlayın: 20 g sodyum hidroksit tartın ve hacmi 100 mL'lik bir hacimsel şişeye sabitlemek için deiyonize su kullanın.
- % 5 TCA çözeltisi hazırlayın: 25 g TCA tartın ve hacmi 500 mL hacimsel bir şişeye sabitlemek için deiyonize su kullanın.
3. TMA standart stok çözeltisi hazırlama
- TMA standart stok çözeltisini hazırlayın: 0.0162 g TMA hidroklorür standart numunesini tartın, %5 TCA çözeltisi içinde çözün ve hacmi 100 μg/mL TMA standart stok çözeltisinin konsantrasyonuna eşit olan 100 mL'ye sabitleyin. 4 °C'de saklayın.
- TMA standart kullanım solüsyonu hazırlayın: belirli bir hacimde TMA standart stok solüsyonu alın ve 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL ve 10 μg/mL TMA standart solüsyonu konsantrasyonlarına kadar %5 TCA solüsyonu ile adım adım seyreltin.
4. Örnek headspace işleme
- 20 mL'lik bir üst boşluk şişesinde 2 mL sodyum hidroksit çözeltisi ve 0,5 g katı parafini (erime noktası: 58-60 °C) doğru bir şekilde tartın (bkz.
- Headspace şişesini yaklaşık 30 dakika boyunca 70 °C'de bir fırına koyun. Katı parafin tamamen erir.
- Çıkarın ve parafinin katılaşması için oda sıcaklığına soğumaya bırakın. Katılaşmış parafin, sodyum hidroksiti kapatacaktır.
- Her numune ekstraksiyon çözeltisinden 2 mL alın ve parafin tabakasının üzerine koyun, kapağa bastırın ve kapatın.
- Ölçüm için kapalı üst boşluk şişesini makineye koyun ( Malzeme Tablosuna bakın).
5. HS-GC-MS/MS analiz koşullarının ayarlanması
- Üst boşluk koşulları ve GC-MS koşulları için Tablo 2'ye bakın.
- İyon bilgisi için Tablo 3'e bakın.
6. Standart eğri çizimi
- Sodalı su ve parafin sızdırmazlık tabakası içeren üst boşluk şişesini hazırlamak için 4.1-4.3 adımlarındaki üst boşluk işlemesine bakın.
- 2 mL 0,1 μg/mL, 0,5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL ve 10 μg/mL TMA standart çözeltisini 20 mL'lik bir üst boşluklu şişeye aspire edin, kapağı kapatın ve makinede ölçün.
7. Hassasiyet testi
- Sodalı su ve parafin sızdırmazlık tabakası içeren üst boşluk şişesini hazırlamak için 4.1-4.3 adımlarındaki üst boşluk işlemesine bakın.
- 2 mL 0.1 μg/mL TMA standart solüsyonunu 20 mL'lik bir üst boşluk şişesine aspire edin ve kapağı kapatın. Üreticinin talimatlarını izleyerek makinede altı paralel test gerçekleştirin (bkz. Malzeme Tablosu).
8. Kurtarma oranı deneyi
- Bir grup Pheretima, Periplaneta Americana ve Hirudo (S02, S05, S07; Tablo 1) geri kazanım oranı deneyi için temsili ilaçlar olarak.
- Birkaç parti numune tozu (S02, S05, S07) alın ve bunları 50 °C'de bir fırında 72 saat boyunca TMA tespit edilmeyene kadar pişirin.
- Pişmiş ilaç tozundaki TMA içeriğini tespit etmek için bölüm 4-6'daki numune hazırlama yöntemine bakın.
- 1 g pişmiş toz alın (0.001 g'a kadar hassas), 50 mL'lik bir plastik santrifüj tüpüne koyun ve 50 μL TMA standart çözeltisi ekleyin.
NOT: TMA standart çözeltisinin konsantrasyonu 100 μg/mL, 1000 μg/mL ve 10000 μg/mL'dir. - 20 mL% 5 TCA çözeltisi ekleyin ve 1 dakika boyunca 1000 rmin-1'de homojenize edin.
- Homojenizasyondan sonra, 5 dakika boyunca 1717 x g'da santrifüjleyin, cam huniye biraz emici pamuk ekleyin ve süpernatanı 50 mL'lik bir hacimsel şişeye süzün.
- Yukarıdaki ekstraksiyon işlemini 15 mL ve 10 mL% 5 TCA çözeltisi ile iki kez tekrarlayın; filtratı birleştirin ve% 5 TCA çözeltisi ile 50 mL'ye seyreltin.
9. Tespit (LOD) ve miktar tayini (LOQ) sınırlarının belirlenmesi
- Sinyal-gürültü oranı (S/N) = 3 olduğunda LOD'yi karşılık gelen konsantrasyona göre belirleyin.
- S/N = 10 olduğunda karşılık gelen konsantrasyona göre LOQ'yu belirleyin.
10. Örnek TMA içeriğinin belirlenmesi
- Sırasıyla yaklaşık 1 g ince toz Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo alın, numuneyi yukarıdaki yönteme göre çıkarın ve makinede belirleyin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu protokolün ön işleme prensibinin ve çalışmasının şematik diyagramları sırasıyla Şekil 1 ve Şekil 2'de gösterilmektedir. TMA'nın pik süresi 2.3 dakika idi, keskin bir tepe şekli vardı ve diğer safsızlıklardan etkilenmedi (Şekil 3). 0.1-10 μg/mL TMA standart çözeltisinin doğrusal aralığı, apsis olarak TMA konsantrasyonu ve ordinat olarak tepe alanı ile standart bir eğri çizildi. Doğrusal regresyon denklemi y = 2522482x + 24255 olarak elde edildi ve korelasyon katsayısı (R2) = 0.9998 olarak iyi bir doğrusal ilişki gösterdi. LOD ve LOQ sırasıyla S/N = 3 ve S/N = 10 ile hesaplandı. LOD 0.03 mg/kg ve LOQ 0.11 mg/kg idi. Bu yöntemin kesinliğini araştırmak için, TMA içeriği (0.1 μg/mL), %5.84'lük bir nispi standart sapmaya (RSD) paralel olarak altı kez belirlendi ve bu da bu yöntemin iyi kesinliğini kanıtladı. Pheretima, Periplaneta americana ve Hirudo'dan bir grup örnek, geri kazanım deneyi için temsili örnekler olarak seçildi (sırasıyla S02, S05, S07); bunlar, bitkilerde TMA'yı azaltmak için kurutularak çivili geri kazanım testlerine tabi tutuldu ve ortalama geri kazanım oranları sırasıyla %84.49, %94.66 ve %85.67 idi ve doğruluk analiz gereksinimlerini karşıladı (Tablo 4). TMA, Pheretima, Periplaneta Americana ve Hirudo'dan 13.23-271.63 mg / kg arasında değişen konsantrasyonlarda dokuz bitki grubunda tespit edildi (Tablo 5). Bu protokol yöntemi, iyi metodolojik doğrulama sonuçlarına sahiptir ve ayrıca bariz bir balık kokusu olan hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA içeriğini tespit etmiştir.
Şekil 1: Kül suyu-parafin-ekstraksiyon çözeltisinin reaksiyon prensibinin şematik diyagramı. (1) 20 mL'lik bir üst boşluklu şişede 2 mL sodyum hidroksit çözeltisini doğru şekilde tartın. (2) Headspace şişesine 0,5 g katı parafin ekleyin. (3) Sodyum hidroksit çözeltisi ile kaplanmış ve sodyum hidroksit çözeltisinin üzerinde yüzen katı parafini eritmek için ısıtın. (4) Soğuduktan sonra parafin katılaşır ve sodyum hidroksit çözeltisi üzerinde sıkıca yapışır. (5) 2 mL numune ekstraksiyon solüsyonu alın ve parafin tabakasının üzerine koyun, kapağa bastırın ve kapatın. (6) Ölçüm için kapalı üst boşluk şişesini makineye koyun. Termostatik fırının ısıtılması parafin tabakasını eritir ve parafin tabakasının üstündeki ve altındaki asit-baz reaktanları kapalı bir ortamda TMA üretmek için reaksiyona girer. Numunenin üst boşluk işlemesi kabaca 1'den 6'ya kadar olan bölümlerde gerçekleştirilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Numune ön işlem işleminin şematik diyagramı. (A) Kül suyunun sızdırmazlığı: protokolde adım 4.1-4.3. (B) Numune çıkarma: protokolde bölüm 1 ve adım 4.4. (C) TMA tespiti: protokolde adım 4.5 ve bölüm 5. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: TMA'nın toplam iyon kromatogramı. 1 μg/mL TMA standart çözeltisinin spektrogramı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Toplu iş | Köken | |
| Kırlangıç | S01 Serisi | Leshan Şehri, Sichuan Eyaleti |
| Kırlangıç | S02 Serisi | Dianbai Şehri, Guangdong Eyaleti |
| Kırlangıç | S03 Serisi | Maoming Şehri, Guangdong Eyaleti |
| Periplaneta americana | S04 Serisi | Xichang Şehri, Liangshan Yi Özerk İli, Sichuan Eyaleti |
| Periplaneta americana | S05 Serisi | Midu İlçesi, Dali Eyaleti, Yunnan Eyaleti |
| Periplaneta americana | S06 Serisi | Bozhou Şehri, Anhui Eyaleti |
| Hirudo Dili | S07 Serisi | Weishan İlçesi, Jining Şehri, Shandong Eyaleti |
| Hirudo Dili | S08 Serisi | Kunshan Şehri, Jiangsu Eyaleti |
| Hirudo Dili | S09 Serisi | Laiwu Bölgesi, Jinan Şehri, Shandong Eyaleti |
Tablo 1: Hayvansal kaynaklı ilaç bilgileri.
| Üst boşluk durumu | |
| Termostatik fırın sıcaklığı | 80 °C |
| Numune b termostatlama zamanı | 30 dk |
| Headspace iğne sıcaklığı | 100 °C |
| Örneklem büyüklüğü | 1 mL |
| GC-MS koşulları | |
| Kromatografik Kolon | SH-Uçucu Amin, 30m × 0.32mm × 5μm |
| Kolon sıcaklık programı | 40 °C (0,5 dk) _20 °C /dk _200 °C (5 dk) |
| Enjektör sıcaklığı | 200 °C |
| Taşıyıcı gaz kontrol modu | sabit doğrusal hız |
| Enjeksiyon modu | Bölünmüş enjeksiyon |
| Bölme oranı | 10:01 |
| Sütun akışı | 2 mL/dk |
| Örneklem büyüklüğü | 1 mL |
| İyonlaşma modu | Duygusal Zeka |
| İyon kaynağı sıcaklığı | 200 °C |
| GC-MS arayüz sıcaklığı | 230 °C |
| Dedektör voltajı | Ayar gerilimi +0,6 kV |
| Alım modu bilgileri | MRM (MRM) |
Tablo 2: Üst boşluk durumu ve GC-MS/MS koşulları.
| Bileşik ad | CAS | Bekletme süresi (dk) | Kantitatif iyon (m/z) | CE | Referans iyonu (m/z) | CE |
| Trimetilamin | 75-50-3 | 2.308 | 58>42 | 20 | 58>30 | 7 |
Tablo 3: TMA bileşik bilgileri.
| Örnek | Numune konsantrasyonu (mg/kg) | Çivili konsantrasyon (mg/kg) | Ölçülen konsantrasyon (mg/kg) | Ortalama geri kazanım oranı (%) | RSD (%) |
| S02 Serisi | 128.99 | 500.00 | 548.50 | 84.49 | 2.12% |
| S05 Serisi | 49.08 | 500.00 | 520.93 | 94.66 | 0.96% |
| S07 Serisi | 101.36 | 500.00 | 527.07 | 85.67 | 1.87% |
Tablo 4: Hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA için geri kazanım oranı deneyinin sonuçları.
| Örnek | Numune konsantrasyonu (mg/kg) |
| S01 Serisi | 88.11 |
| S02 Serisi | 137.34 |
| S03 Serisi | 18.63 |
| S04 Serisi | 19.10 |
| S05 Serisi | 40.50 |
| S06 Serisi | 13.23 |
| S07 Serisi | 271.63 |
| S08 Serisi | 69.73 |
| S09 Serisi | 67.70 |
Tablo 5: Hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA konsantrasyonu belirleme sonuçları.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hayvansal kaynaklı ilaçlar tüm vücuttan, organ veya dokulardan, fizyolojik veya patolojik ürünlerden, dışkılardan veya salgılardan ve hayvanların işlenmiş ürünlerinden gelir. TMA, hayvansal kaynaklı ilaçlarda önemli bir balık kokusu kaynağıdır; çok düşük koku alma eşiği (0.000032 × 10-6 V/V) ve güçlü balık kokusu13 olan tipik bir kötü kokulu maddedir. Şu anda, yaygın olarak kullanılan HS-GC-MS yöntemi, hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA'yı stabil ve doğru bir şekilde tespit edememektedir.
Bu protokol çeşitli yönlerden geliştirilmiştir: (1) TMA daha polar ve alkalidir. Bu protokolde, TMA'yı tespit etmek için uçucu amin gazı kromatografisi için özel bir kolon seçilir, bu da TMA tespitinin doğruluğunu ve hassasiyetini sağlar. (2) GB5009.179-2016'daki HC-GC-MS yönteminin numune hazırlama işleminde, kapalı üst boşluk şişesine10 yüksek konsantrasyonlu bir sodyum hidroksit çözeltisi enjekte edilir. Bu sırada, asit-baz reaksiyonunun meydana gelmesi, üst boşluk şişesinde basınçta bir artışa yol açar, bu da TMA'nın kaçmasına neden olarak TMA'nın yanlış tespit edilmesine neden olabilir. Bu protokol, geleneksel Çin tıbbında kükürt dioksit kalıntısının tespit yöntemine atıfta bulunmuştur14. Numune ön işleminde, asit-baz reaktanları izole etmek için bir ortam olarak katı parafin kullanılır. Üst boşluk şişesi kapatıldıktan sonra, parafin termostatik fırının ısıtılması altında yavaşça erir, şiddetli asit-baz reaksiyonunu önler ve TMA reaksiyonu için iyi bir hava geçirmez ortam sağlayarak TMA tespitinin stabilitesini ve doğruluğunu sağlar. (3) Bu protokol, alım için GC-MS/MS'deki MRM modunu kullanır ve analitik verimlilik ve doğruluk sağlamak için algılama parametrelerini (kolon sıcaklık programı vb.) optimize eder.
Bu protokolün işleyişinde aşağıdaki hususlara dikkat edilmelidir: (1) Uygun miktarda katı parafin mumu seçilmelidir. Daha küçük bir parafin dozajı, mühürlenmemiş bir parafin tabakasına ve asit-baz reaktanların anında reaksiyonuna yol açacak ve bu da sızdırmazlıktan önce TMA'nın oluşmasına ve kaçmasına neden olacaktır. Daha yüksek bir parafin dozu, TMA'nın salınmasını, zenginleştirilmesini ve saptanmasını engelleyebilir. (2) Bez sıkı olmalı ve conta sağlam olmalıdır. Ek olarak, protokolün bazı sınırlamaları vardır. Hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA endojendir ve kurutularak temiz bir şekilde uzaklaştırılamaz; Geri kazanım deneyinde düşük konsantrasyonda TMA hidroklorür standart çözeltisi kullanıldı, ancak etki tatmin edici değildi. Bu nedenle, bu protokoldeki geri kazanım deneyi için sadece aynı konsantrasyonda TMA hidroklorür standart çözeltisi seçilmiştir.
Sonuç olarak, bu protokol örnek bir ön tedavi yöntemi ve hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA'nın doğru tespitini sağlamıştır. Bu yöntemin kurulması, hayvansal kaynaklı ilaçlarda TMA tespit yöntemindeki boşluğu doldurmuş ve hayvansal kaynaklı ilaçların araştırılması, geliştirilmesi ve uygulanmasının teşvik edilmesi için büyük önem taşıyan hayvansal kaynaklı ilaçlarda balık kokusu maddelerinin araştırılması için teknik destek sağlamıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Acknowledgments
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82173991) ve Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı (2022YFS0442) tarafından sağlanan hibelerle desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Centrifuge | Beckman Coulter Trading (China) Co. | SSC-2-0213 | |
| Chinese herbal medicine grinder | Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory | HX-200K | |
| Convection oven | Sanyo Electric Co., Ltd | MOV-112F | |
| Decapper for 20 mm Aluminum caps | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | V1750004 | |
| Electronic balance | Shimadzu Corporation Japan | AUW220D | |
| Gas chromatography mass spectrometry | Shimadzu Corporation Japan | TQ-8050 NX | |
| Headspace Vial | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | 25760200 | |
| Homogenizer | Shanghai biaomo Factory | FJ200-SH | |
| Preassembled Cap | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | L4150050 | |
| Sample sieve | Zhenxing Sieve Factory | / | |
| SH-Volatile Amine | Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd | 227-3626-01 | |
| Sodium hydroxide | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022101401 | |
| Solid paraffin wax | Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory | 20221112 | |
| Trichloroacetic acid | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022102001 | |
| Trimethylamine hydrochloride | Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd | AF22022108 | |
| Ultra-pure water system | Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd | UPR-11-5T |
References
- Fan, H., et al. Material basis of stench of animal medicine: a review. China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).
- Deng, Y. J., et al. Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines. China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).
- Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage. Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).
- Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics. Microorganisms. 5 (3), 50 (2017).
- Baliño-Zuazo, L., Barranco, A. A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products. Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).
- Zhao, C., et al. Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness. Food Chemistry. 392, 133318 (2022).
- Bota, G. M., Harrington, P. B. Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry. Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).
- Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062 (2020).
- Mitsubayashi, K., et al. Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis. Sensors & Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).
- National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. GB 5009. 179-2016. , 12 (2016).
- Liu, X. M., et al. Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).
- Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).
- Yoshiharu, I. Odor olfactory measurement. , Japan Association on Odor Environment. Tokyo. (2004).
- Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).
Tags
Kimya Sayı 193 hayvansal kaynaklı ilaç trimetilamin balık kokusu tepe boşluğu gaz kromatografisi-tandem dört kutuplu kütle spektrometrisiErratum
Formal Correction: Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry
Posted by JoVE Editors on 11/28/2023.
Citeable Link.
An erratum was issued for: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry. The Authors section was updated from:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
Haozhou Huang2
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin3
Xiaoming Bao4
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1
Xuemei Liu1
JiaBao Liao2
Haozhou Huang3
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin4
Xiaoming Bao5
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
5Shimadzu (China) Co., Ltd
