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Chemistry

हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-टेंडम क्वाड्रोपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा में ट्राइमेथिलमाइन का पता लगाने के लिए एक बेहतर तकनीक

Published: March 10, 2023 doi: 10.3791/65291
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 1, 1, 1, 4, 5, 1, 1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd, 3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Shimadzu (China) Co., Ltd

ERRATUM NOTICE

Summary

यहां, पशु-व्युत्पन्न दवाओं में ट्राइमेथिलमाइन (टीएमए) के निर्धारण के लिए उपयुक्त एक हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-टेंडम क्वाड्रोपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एचएस-जीसी-एमएस / एमएस) विधि का वर्णन किया गया है। प्रोटोकॉल में नमूना प्रथागत, हेडस्पेस उपचार, विश्लेषण की स्थिति, पद्धतिगत सत्यापन और पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए का निर्धारण शामिल है।

Abstract

पशु-व्युत्पन्न दवाओं में विशिष्ट विशेषताएं और महत्वपूर्ण उपचारात्मक प्रभाव होते हैं, लेकिन उनमें से अधिकांश में एक स्पष्ट मछली की गंध होती है, जिसके परिणामस्वरूप नैदानिक रोगियों का खराब अनुपालन होता है। ट्राइमेथिलमाइन (टीएमए) पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा में प्रमुख मछली गंध घटकों में से एक है। लाइ के जुड़ने के बाद तेजी से एसिड-बेस प्रतिक्रिया के कारण हेडस्पेस शीशी में बढ़े दबाव के कारण मौजूदा पहचान विधि का उपयोग करके टीएमए को सटीक रूप से पहचानना मुश्किल है, जिसके कारण टीएमए हेडस्पेस शीशी से बच जाता है, जिससे पशु-व्युत्पन्न दवा की मछली की गंध की अनुसंधान प्रगति रुक जाती है। इस अध्ययन में, हमने एक नियंत्रित पहचान विधि का प्रस्ताव दिया जिसने एसिड और लाइ के बीच एक अलगाव परत के रूप में एक पैराफिन परत पेश की। थर्मोस्टैटिक भट्ठी हीटिंग के माध्यम से पैराफिन परत को धीरे-धीरे तरलीकृत करके टीएमए उत्पादन की दर को प्रभावी ढंग से नियंत्रित किया जा सकता है। इस विधि ने संतोषजनक रैखिकता, सटीक प्रयोग, और अच्छी प्रजनन क्षमता और उच्च संवेदनशीलता के साथ वसूली दिखाई। इसने पशु-व्युत्पन्न दवा के डिओडोराइजेशन के लिए तकनीकी सहायता प्रदान की।

Introduction

जानवरों के अंगों और / या उनके उप-उत्पादों (यहां पशु-व्युत्पन्न दवाओं के रूप में संदर्भित) से प्राप्त उत्पादों का उपयोग करके मानव रोगों का इलाज करना अधिक ध्यान आकर्षित कर रहा है। वे कैंसर, हृदय रोग, यकृत सिरोसिस, मास्टिटिस और अन्य बीमारियों के इलाज में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, एक मजबूत प्रभाव, छोटी खुराक और महत्वपूर्ण और विशिष्ट नैदानिक प्रभावकारिता के फायदे के साथ। हालांकि, पशु-व्युत्पन्न दवाओं में आम तौर पर एक प्रमुख मछली की गंध होती है, जो रोगियों के अनुपालन को बहुत प्रभावित करती है, और विशेष रूपसे बच्चों के लिए प्रतिकूल होती है। मछली की गंध मुख्य रूप से दवा में निहित प्रोटीन, अमीनो एसिड, वसा और अन्य पदार्थों से आती है, जो फैटी एसिड ऑक्सीकरण, अमीनो एसिड क्षरण और मछली की गंध के साथ विभिन्न प्रकार के पदार्थों का उत्पादन करने के अन्य तरीकोंके माध्यम से विघटित होती है। उनमें से, ट्राइमेथिलैमाइन (टीएमए) एक मछली की गंध के साथ एक वाष्पशील गैस है जो सड़ने या सड़े हुए पशु-व्युत्पन्नखाद्य पदार्थों में व्यापक रूप से मौजूद है।

अब तक, गैस क्रोमैटोग्राफी (जीसी), तरल क्रोमैटोग्राफी (एलसी), आयन क्रोमैटोग्राफी, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री, तरल क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस), और सेंसर विधियों का उपयोग आमतौर पर पर्यावरण, भोजन और मूत्र 6,7,8,9 में टीएमए का पता लगाने के लिए किया जाता है। जीसी कॉलम और इंजेक्शन सिस्टम के कम संदूषण के साथ-साथ उच्च संवेदनशीलता, प्रजनन क्षमता और कम पहचान सीमा (0.1-1 मिलीग्राम / किग्रा) को देखते हुए, भोजन औरजैविक विश्लेषण के लिए हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एचएस-जीसी-एमएस) विधि को प्राथमिकता दी गई थी। वर्तमान में, केवल चीन ने भोजन में टीएमए के लिए एक राष्ट्रीय मानक स्थापित किया है, और एचएस-जीसी-एमएस जीबी 5009.179-2016 मानक10 में पहली विधि है। इसलिए, पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा में टीएमए का पता लगाने के लिए उपरोक्त एचएस-जीसी-एमएस विधि का चयन किया गया था। प्रारंभिक चरण में, हमारे शोध समूह ने पाया कि भोजन में टीएमए के लिए एचएस-जीसी-एमएस पहचान मानक कई पशु-व्युत्पन्न दवाओं में मछली की गंध का पता लगा सकता है। अध्ययन 11,12 के परिणामों के साथ संयुक्त, यह साबित किया जा सकता है कि टीएमए पशु-व्युत्पन्न दवाओं में मछली की गंध का सामान्य प्रमुख पदार्थ है। हालांकि, यह पाया गया कि प्रयोगात्मक परिणामों की प्रजनन क्षमता खराब थी, और टीएमए पलायन और खराब स्थिरता जैसी समस्याएं थीं, जिन्हें कार्यप्रणाली द्वारा सत्यापित नहीं किया जा सकता था। यह इस तथ्य के कारण हो सकता है कि लाइ को हेडस्पेस शीशी में इंजेक्ट किया गया था और तेजी से एसिड-बेस प्रतिक्रिया के कारण शीशी में दबाव बढ़ गया, इस प्रकार टीएमए इंजेक्शन छिद्र से बच गया, जिससे टीएमए की स्थिर और सटीक पहचान नहीं हो सकी। इसलिए, इस अध्ययन ने इन समस्याओं को हल करने के लिए एक बेहतर हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-टेंडम क्वाड्रोपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एचएस-जीसी-एमएस / एमएस) पहचान विधि का प्रस्ताव दिया।

प्रोटोकॉल ठोस पैराफिन, एक अच्छी ठोस-तरल चरण परिवर्तन सामग्री की मदद से प्रथागत में एसिड-बेस अभिकारकों को अलग करके नमूना प्रथागत में सुधार करता है। चूंकि पैराफिन धीरे-धीरे थर्मोस्टेटिक भट्ठी के तापमान में वृद्धि के साथ तरलीकृत हो गया, टीएमए को धीरे-धीरे सील हेडस्पेस शीशी में भी जारी किया गया, जिससे हिंसक और तेजी से एसिड-बेस प्रतिक्रिया के कारण दबाव में वृद्धि से बचा जा सके और स्थिर और सटीक टीएमए का पता लगाया जा सके। इसके अलावा, जीसी-एमएस /एमएस में मल्टीपल रिएक्शन मॉनिटरिंग (एमआरएम) मोड के साथ संयुक्त हेडस्पेस इंजेक्शन ने मैट्रिक्स रासायनिक हस्तक्षेप को प्रभावी ढंग से दबा दिया और परिणामों की विश्वसनीयता सुनिश्चित की। पद्धतिगत सत्यापन के परिणामों ने साबित कर दिया कि बेहतर पहचान विधि की रैखिकता, सटीक परीक्षण और वसूली दर अच्छी प्रजनन क्षमता और उच्च संवेदनशीलता के साथ आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है।

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Protocol

फेरेटिमा, पेरिप्लानेटा अमेरिकाना और हिरुडो की औषधीय सामग्री के बारे में जानकारी के लिए तालिका 1 देखें। उनकी पहचान चेंगदू यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन के प्रोफेसर जू रुनचुन ने फेरेटिमा एस्परगिलम (ई.पेरियर), पेरिप्लानेटा अमेरिकाना एल. और व्हिटमैनिया पिग्रा व्हिटमैन के सूखे शरीर के रूप में की है।

1. नमूना निष्कर्षण

  1. फेरेटिमा, पेरिप्लानेटा अमेरिकाना और हिरुडो को हर्बल ग्राइंडर (सामग्री की तालिका देखें) के साथ क्रश करें, औषधीय पाउडर को नंबर 2 (छलनी एपर्चर: 0.8 मिमी) और नंबर 4 (छलनी एपर्चर: 0.25 मिमी) मानक दवा छलनी के माध्यम से छान लें, और आवश्यक नमूना पाउडर प्राप्त करने के लिए दो छलनी के बीच पाउडर एकत्र करें।
    नोट: पेरेटिमा कुचलने के बाद फूला हुआ होता है, इसलिए इसके पाउडर को छलनी करने की आवश्यकता नहीं होती है।
  2. 50 एमएल प्लास्टिक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में 1 ग्राम पाउडर (0.001 ग्राम तक सटीक) लें, 5% ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड (टीसीए) समाधान के 20 एमएल जोड़ें ( सामग्री की तालिका देखें), और उच्च गति फैलाव होमोजिनाइज़र के साथ 1 मिनट के लिए 1,000 आरएमआईएन -1 पर समरूप करें।
  3. होमोजेनाइजेशन के बाद, कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए 1,717 x g पर सेंट्रीफ्यूज करें, ग्लास फ़नल में थोड़ा शोषक कपास जोड़ें, और सतह पर तैरने वाले को 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में फ़िल्टर करें।
  4. उपरोक्त निष्कर्षण प्रक्रिया को 15 एमएल और 5% टीसीए समाधान के 10 एमएल के साथ दो बार दोहराएं। छानना मिलाएं और इसे 5% टीसीए समाधान के साथ 50 एमएल तक पतला करें।

2. अभिकर्मक तैयारी

  1. 20% सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान तैयार करें: 20 ग्राम सोडियम हाइड्रॉक्साइड का वजन करें और 100 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मात्रा को ठीक करने के लिए विआयनीकृत पानी का उपयोग करें।
  2. 5% टीसीए समाधान तैयार करें: टीसीए के 25 ग्राम वजन करें और 500 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में मात्रा को ठीक करने के लिए विआयनीकृत पानी का उपयोग करें।

3. टीएमए मानक स्टॉक समाधान तैयार करना

  1. टीएमए मानक स्टॉक समाधान तैयार करें: टीएमए हाइड्रोक्लोराइड मानक नमूने के 0.0162 ग्राम वजन करें, इसे 5% टीसीए समाधान में घोलें, और टीएमए मानक स्टॉक समाधान के 100 μg / mL की एकाग्रता के बराबर मात्रा को 100 mL तक तय करें। इसे 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  2. टीएमए मानक उपयोग समाधान तैयार करें: टीएमए मानक स्टॉक समाधान की एक निश्चित मात्रा लें और इसे 0.1 μg / mL, 0.5 μg / mL, 1 μg / mL, 2 μg / mL, 5 μg / mL और 10 μg / mL की सांद्रता के लिए 5% टीसीए समाधान के साथ चरण-दर-चरण पतला करें।

4. नमूना हेडस्पेस प्रसंस्करण

  1. 20 एमएल हेडस्पेस शीशी में सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के 2 मिलीलीटर और ठोस पैराफिन के 0.5 ग्राम (गलनांक: 58-60 डिग्री सेल्सियस) का सटीक वजन करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
  2. हेडस्पेस शीशी को लगभग 30 मिनट के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर ओवन में रखें। ठोस पैराफिन पूरी तरह से पिघल जाता है।
  3. इसे बाहर निकालें, और इसे कमरे के तापमान पर ठंडा होने दें ताकि पैराफिन जम जाए। ठोस पैराफिन सोडियम हाइड्रॉक्साइड को सील कर देगा।
  4. प्रत्येक नमूना निष्कर्षण समाधान का 2 एमएल लें और इसे पैराफिन परत के शीर्ष पर रखें, टोपी दबाएं, और सील करें।
  5. माप के लिए मशीन पर सील हेडस्पेस शीशी रखें ( सामग्री की तालिका देखें)।

5. एचएस-जीसी-एमएस/एमएस विश्लेषण शर्तों की स्थापना।

  1. हेडस्पेस स्थितियों और जीसी-एमएस स्थितियों के लिए तालिका 2 देखें।
  2. आयन जानकारी के लिए तालिका 3 देखें।

6. मानक वक्र ड्राइंग

  1. लाइ और पैराफिन सीलिंग परत युक्त हेडस्पेस शीशी तैयार करने के लिए चरण 4.1-4.3 में नमूना हेडस्पेस प्रोसेसिंग का संदर्भ लें।
  2. 0.1 μg/mL, 0.5 μg/mL, 1 μg/mL, 2 μg/mL, 5 μg/mL, और 10 μg/mL मानक समाधान को 20 mL हेडस्पेस शीशी में 2 mL का एस्पिरेट करें, कैप को सील करें, और मशीन पर मापें।

7. सटीक परीक्षण

  1. लाइ और पैराफिन सीलिंग परत युक्त हेडस्पेस शीशी तैयार करने के लिए चरण 4.1-4.3 में नमूना हेडस्पेस प्रसंस्करण का संदर्भ लें।
  2. 0.1 μg /mL TMA मानक घोल के 2 mL को 20 mL हेडस्पेस शीशी में डालें और कैप को सील करें। निर्माता के निर्देशों का पालन करते हुए मशीन में छह समानांतर परीक्षण करें ( सामग्री की तालिका देखें)।

8. रिकवरी दर प्रयोग

  1. फेरेटिमा, पेरिप्लानेटा अमेरिकाना और हिरुडो (एस 02, एस 05, एस 07) का एक बैच लें; तालिका 1) रिकवरी दर प्रयोग के लिए प्रतिनिधि दवाओं के रूप में।
  2. नमूना पाउडर (एस 02, एस 05, एस 0 7) के कई बैच लें और उन्हें 72 घंटे के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर ओवन में बेक करें जब तक कि कोई टीएमए का पता न चले।
  3. बेक्ड दवा पाउडर में टीएमए की सामग्री का पता लगाने के लिए अनुभाग 4-6 में नमूना तैयारी विधि देखें।
  4. बेक्ड पाउडर का 1 ग्राम (0.001 ग्राम तक सटीक) लें, इसे 50 एमएल प्लास्टिक सेंट्रीफ्यूज ट्यूब में डालें, और टीएमए मानक समाधान के 50 μL जोड़ें।
    नोट: टीएमए मानक समाधान की एकाग्रता 100 μg / mL, 1000 μg / mL, और 10000 μg / mL है।
  5. 5% टीसीए समाधान के 20 एमएल जोड़ें और 1 मिनट के लिए 1000 आरएमआईएन -1 पर समरूप करें।
  6. होमोजेनाइजेशन के बाद, 5 मिनट के लिए 1717 x g पर सेंट्रीफ्यूज, ग्लास फ़नल में थोड़ा शोषक कपास जोड़ें और सतह पर तैरने वाले को 50 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में फ़िल्टर करें।
  7. उपरोक्त निष्कर्षण प्रक्रिया को 15 एमएल और 5% टीसीए समाधान के 10 एमएल के साथ दो बार दोहराएं; छानना मिलाएं और इसे 5% टीसीए समाधान के साथ 50 एमएल तक पतला करें।

9. पता लगाने (एलओडी) और परिमाणीकरण (एलओक्यू) की सीमाओं का निर्धारण

  1. जब सिग्नल-टू-शोर अनुपात (S/N) = 3 होता है तो LOD को संबंधित सांद्रता द्वारा निर्धारित करें।
  2. जब S/N = 10 होता है तो संबंधित सांद्रता द्वारा LOQ का निर्धारण करें।

10. नमूना टीएमए सामग्री का निर्धारण

  1. क्रमशः फेरेटिमा, पेरिप्लेनेटा अमेरिकाना और हिरुडो के बारीक पाउडर के लगभग 1 ग्राम लें, उपरोक्त विधि के अनुसार नमूना निकालें, और इसे मशीन पर निर्धारित करें।

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Representative Results

इस प्रोटोकॉल के पूर्व-प्रसंस्करण सिद्धांत और संचालन के योजनाबद्ध आरेख क्रमशः चित्र 1 और चित्रा 2 में दिखाए गए हैं। टीएमए का चरम समय 2.3 मिनट था, जिसमें एक तेज शिखर आकार था और अन्य अशुद्धियों से कोई हस्तक्षेप नहीं था (चित्रा 3)। 0.1-10 μg / mL TMA मानक समाधान की रैखिक सीमा को मापते हुए, TMA एकाग्रता के साथ एब्सिसा और चरम क्षेत्र को निर्देशांक के रूप में, एक मानक वक्र तैयार किया गया था। रैखिक प्रतिगमन समीकरण को y = 2522482x + 24255 के रूप में प्राप्त किया गया था, सहसंबंध गुणांक (R2) = 0.9998 के साथ, एक अच्छा रैखिक संबंध दर्शाता है। LOD और LOQ की गणना क्रमशः S/N = 3 और S/N = 10 के साथ की गई थी। एलओडी 0.03 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम और एलओक्यू 0.11 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम था। इस विधि की परिशुद्धता की जांच करने के लिए, TMA (0.1 μg / mL) की सामग्री को 5.84% के सापेक्ष मानक विचलन (RSD) के समानांतर छह बार निर्धारित किया गया था, जिसने इस विधि की अच्छी परिशुद्धता साबित की। फेरेटिमा, पेरिप्लानेटा अमेरिकाना और हिरुडो के नमूनों के एक समूह को वसूली प्रयोग (एस 02, एस 05, एस 07, क्रमशः) के लिए प्रतिनिधि नमूने के रूप में चुना गया था; जड़ी-बूटियों में टीएमए को कम करने के लिए इन्हें सुखाकर स्पाइक्ड रिकवरी परीक्षणों के अधीन किया गया था, और विश्लेषण आवश्यकताओं को पूरा करने वाली सटीकता के साथ औसत वसूली दर क्रमशः 84.49%, 94.66% और 85.67% थी (तालिका 4)। टीएमए का पता फेरेटिमा, पेरिप्लानेटा अमेरिकाना और हिरुडो से जड़ी-बूटियों के नौ बैचों में लगाया गया था, जिसमें सांद्रता 13.23-271.63 मिलीग्राम / किग्रा (तालिका 5) थी। इस प्रोटोकॉल विधि में अच्छे पद्धतिगत सत्यापन परिणाम हैं और एक स्पष्ट मछली गंध के साथ पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए सामग्री का भी पता लगाया गया है।

Figure 1
चित्र 1: लाइ-पैराफिन-निष्कर्षण समाधान के प्रतिक्रिया सिद्धांत का योजनाबद्ध आरेख। (1) 20 एमएल हेडस्पेस शीशी में सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के 2 एमएल का सटीक वजन करें। (2) हेडस्पेस शीशी में 0.5 ग्राम ठोस पैराफिन जोड़ें। (3) ठोस पैराफिन को पिघलाने के लिए गर्मी, जो सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के साथ स्तरित होता है और सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के ऊपर तैरता है। (4) ठंडा होने के बाद, पैराफिन सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान पर मजबूती से जम जाता है और सील हो जाता है। (5) नमूना निष्कर्षण समाधान के 2 एमएल लें और इसे पैराफिन परत के ऊपर रखें, टोपी दबाएं, और सील करें। (6) माप के लिए मशीन पर सील हेडस्पेस शीशी डालें। थर्मोस्टैटिक ओवन के गर्म होने से पैराफिन परत पिघल जाती है, और पैराफिन परत के ऊपर और नीचे एसिड-बेस अभिकारक एक सील वातावरण में टीएमए का उत्पादन करने के लिए प्रतिक्रिया करते हैं। नमूने का हेडस्पेस प्रसंस्करण मोटे तौर पर अनुभाग 1 से 6 में किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: नमूना प्रथागत ऑपरेशन का योजनाबद्ध आरेख । (ए) सीलिंग लाइ: प्रोटोकॉल में चरण 4.1-4.3। (बी) नमूना निष्कर्षण: प्रोटोकॉल में अनुभाग 1 और चरण 4.4। (सी) टीएमए डिटेक्शन: प्रोटोकॉल में चरण 4.5 और अनुभाग 5। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3: टीएमए का कुल आयन क्रोमैटोग्राम। 1 μg / mL TMA मानक समाधान का स्पेक्ट्रोग्राम। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

जत्था मूल
Pheretima S01 लेशान सिटी, सिचुआन प्रांत
Pheretima S02 दियानबाई सिटी, गुआंग्डोंग प्रांत
Pheretima S03 माओमिंग सिटी, गुआंग्डोंग प्रांत
अमेरिका के पेरीप्लेनेटा S04 - शिचांग सिटी, लियांगशान यी स्वायत्त प्रान्त, सिचुआन प्रांत
अमेरिका के पेरीप्लेनेटा S05 मिडु काउंटी, डाली प्रान्त, युन्नान प्रांत
अमेरिका के पेरीप्लेनेटा S06 बोज़ौ सिटी, अनहुई प्रांत
Hirudo S07 वीशन काउंटी, जिनिंग सिटी, शेडोंग प्रांत
Hirudo S08 कुनशान शहर, जिआंगसु प्रांत
Hirudo S09 लाइवू जिला, जिनान शहर, शेडोंग प्रांत

तालिका 1: पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा जानकारी।

हेडस्पेस की स्थिति
थर्मोस्टेटिक ओवन का तापमान 80 °C
नमूना बी थर्मोस्टैटिंग के लिए समय 30 मिनट
हेडस्पेस सुई का तापमान 100 °C
नमूना आकार 1 mL
जीसी-एमएस की शर्तें
क्रोमैटोग्राफिक कॉलम एसएच-वाष्पशील अमाइन, 30 मीटर × 0.32 मिमी ×5μm
स्तंभ तापमान प्रोग्राम 40 डिग्री सेल्सियस (0.5 मिनट) _20 डिग्री सेल्सियस / मिनट _ 200 डिग्री सेल्सियस (5 मिनट)
इंजेक्टर का तापमान 200 °C
वाहक गैस नियंत्रण मोड निरंतर रैखिक गति
इंजेक्शन मोड स्प्लिट इंजेक्शन
विभाजित अनुपात 10:01
स्तंभ प्रवाह 2 मिलीलीटर/मिनट
नमूना आकार 1 mL
आयनीकरण मोड ईआइ
आयन स्रोत का तापमान 200 °C
जीसी-एमएस इंटरफ़ेस तापमान 230 °C
डिटेक्टर वोल्टेज ट्यूनिंग वोल्टेज +0.6 केवी
अधिग्रहण मोड जानकारी MRM

तालिका 2: हेडस्पेस स्थिति और जीसी-एमएस / एमएस स्थितियां।

यौगिक का नाम CAS अवधारण समय (मिनट) मात्रात्मक आयन (m/z) सीई संदर्भ आयन (m/z) सीई
ट्राइमिथाइलमाइन 75-50-3 2.308 58>42 20 58>30 7

तालिका 3: टीएमए यौगिक जानकारी।

नमूना नमूना एकाग्रता (मिलीग्राम / किग्रा) स्पाइक्ड सांद्रता (मिलीग्राम / किग्रा) मापा एकाग्रता (मिलीग्राम / किग्रा) औसत रिकवरी दर (%) आरएसडी (%)
S02 128.99 500.00 548.50 84.49 2.12%
S05 49.08 500.00 520.93 94.66 0.96%
S07 101.36 500.00 527.07 85.67 1.87%

तालिका 4: पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए के लिए वसूली दर प्रयोग के परिणाम।

नमूना नमूना एकाग्रता (मिलीग्राम / किग्रा)
S01 88.11
S02 137.34
S03 18.63
S04 19.10
S05 40.50
S06 13.23
S07 271.63
S08 69.73
S09 67.70

तालिका 5: पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए एकाग्रता के निर्धारण के परिणाम।

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Discussion

पशु-व्युत्पन्न दवाएं पूरे शरीर, अंगों या ऊतकों, शारीरिक या रोग संबंधी उत्पादों, उत्सर्जन या स्राव, और जानवरों के संसाधित उत्पादों से आती हैं। टीएमए पशु-व्युत्पन्न दवाओं में मछली की गंध का एक महत्वपूर्ण स्रोत है; यह बहुत कम घ्राण सीमा (0.000032 × 10-6 वी / वी) और एक मजबूत मछली गंध13 के साथ एक विशिष्ट मैलोडोरस पदार्थ है। वर्तमान में, आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली एचएस-जीसी-एमएस विधि पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए का स्थिर और सटीक रूप से पता नहीं लगा सकती है।

इस प्रोटोकॉल में कई पहलुओं में सुधार हुआ है: (1) टीएमए अधिक ध्रुवीय और क्षारीय है। इस प्रोटोकॉल में, टीएमए का पता लगाने के लिए वाष्पशील अमाइन गैस क्रोमैटोग्राफी के लिए एक विशेष कॉलम चुना जाता है, जो टीएमए का पता लगाने की सटीकता और संवेदनशीलता सुनिश्चित करता है। (2) जीबी 5009.179-2016 में एचसी-जीसी-एमएस विधि की नमूना तैयारी प्रक्रिया में, एक उच्च सांद्रता सोडियम हाइड्रॉक्साइड समाधान को सील हेडस्पेस शीशी10 में इंजेक्ट किया जाता है। इस समय, एसिड-बेस प्रतिक्रिया की घटना से हेडस्पेस शीशी में दबाव में वृद्धि होती है, जिससे टीएमए का पलायन हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप टीएमए का गलत पता लगाया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल ने पारंपरिक चीनी चिकित्सा14 में सल्फर डाइऑक्साइड अवशेषों की पहचान विधि को संदर्भित किया। नमूना प्रथागत में, ठोस पैराफिन का उपयोग एसिड-बेस अभिकारकों को अलग करने के लिए एक माध्यम के रूप में किया जाता है। हेडस्पेस शीशी को सील करने के बाद, पैराफिन थर्मोस्टेटिक भट्ठी के हीटिंग के तहत धीरे-धीरे पिघलता है, गंभीर एसिड-बेस प्रतिक्रिया से बचता है, और टीएमए प्रतिक्रिया के लिए एक अच्छा एयरटाइट वातावरण प्रदान करता है, जिससे टीएमए का पता लगाने की स्थिरता और सटीकता सुनिश्चित होती है। (3) यह प्रोटोकॉल अधिग्रहण के लिए जीसी-एमएस / एमएस में एमआरएम मोड का उपयोग करता है और विश्लेषणात्मक दक्षता और सटीकता सुनिश्चित करने के लिए डिटेक्शन पैरामीटर (कॉलम तापमान कार्यक्रम, आदि) का अनुकूलन करता है।

इस प्रोटोकॉल के संचालन में निम्नलिखित बिंदुओं पर ध्यान दिया जाना चाहिए: (1) ठोस पैराफिन मोम की एक उपयुक्त मात्रा का चयन किया जाना चाहिए। एक छोटे पैराफिन खुराक से एक अनसील पैराफिन परत और एसिड-बेस अभिकारकों की तत्काल प्रतिक्रिया होगी, जिसके परिणामस्वरूप सीलिंग से पहले टीएमए का उत्पादन और पलायन होगा। एक उच्च पैराफिन खुराक टीएमए की रिहाई, संवर्धन और पता लगाने में बाधा डाल सकती है। (2) ग्रंथि तंग और सील बरकरार होनी चाहिए। इसके अलावा, प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं हैं। पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए अंतर्जात है और इसे सुखाकर साफ नहीं किया जा सकता है; रिकवरी प्रयोग में टीएमए हाइड्रोक्लोराइड मानक समाधान की कम सांद्रता का उपयोग किया गया था, लेकिन प्रभाव असंतोषजनक था। इसलिए, इस प्रोटोकॉल में रिकवरी प्रयोग के लिए केवल टीएमए हाइड्रोक्लोराइड मानक समाधान की समान एकाग्रता का चयन किया गया था।

अंत में, इस प्रोटोकॉल ने पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए का एक नमूना प्रथागत विधि और सटीक पहचान प्रदान की। इस पद्धति की स्थापना ने पशु-व्युत्पन्न दवाओं में टीएमए की पहचान विधि में अंतर को भर दिया और पशु-व्युत्पन्न दवाओं में मछली की गंध पदार्थों के अनुसंधान के लिए तकनीकी सहायता प्रदान की, जो पशु-व्युत्पन्न दवाओं के अनुसंधान, विकास और आवेदन को बढ़ावा देने के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

यह काम चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (82173991), और सिचुआन विज्ञान और प्रौद्योगिकी कार्यक्रम (2022वाईएफएस0442) से अनुदान द्वारा समर्थित था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Centrifuge Beckman Coulter Trading (China) Co. SSC-2-0213
Chinese herbal medicine grinder Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory HX-200K
Convection oven Sanyo Electric Co., Ltd MOV-112F
Decapper for 20 mm Aluminum caps ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc V1750004
Electronic balance Shimadzu Corporation Japan AUW220D
Gas chromatography mass spectrometry Shimadzu Corporation Japan TQ-8050 NX
Headspace Vial ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc 25760200
Homogenizer Shanghai biaomo Factory FJ200-SH
Preassembled Cap ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc L4150050
Sample sieve Zhenxing Sieve Factory /
SH-Volatile Amine Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd 227-3626-01
Sodium hydroxide Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd 2022101401
Solid paraffin wax Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory 20221112
Trichloroacetic acid Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd 2022102001
Trimethylamine hydrochloride Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd AF22022108
Ultra-pure water system Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd UPR-11-5T

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References

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रसायन विज्ञान अंक 193 पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा ट्राइमेथिलमाइन मछली की गंध हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-टेंडम क्वाड्रोपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री।

Erratum

Formal Correction: Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry
Posted by JoVE Editors on 11/28/2023. Citeable Link.

An erratum was issued for: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry. The Authors section was updated from:

Hui Ye1
Xuemei Liu1
Haozhou Huang2
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin3
Xiaoming Bao4
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4Shimadzu (China) Co., Ltd

to:

Hui Ye1
Xuemei Liu1
JiaBao Liao2
Haozhou Huang3
Lin Huang1
Yang Bao1
Hongyan Ma1
Junzhi Lin4
Xiaoming Bao5
Dingkun Zhang1
Runchun Xu1
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
5Shimadzu (China) Co., Ltd

हेडस्पेस गैस क्रोमैटोग्राफी-टेंडम क्वाड्रोपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पशु-व्युत्पन्न चिकित्सा में ट्राइमेथिलमाइन का पता लगाने के लिए एक बेहतर तकनीक
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Ye, H., Liu, X., Liao, J., Huang,… More

Ye, H., Liu, X., Liao, J., Huang, H., Huang, L., Bao, Y., Ma, H., Lin, J., Bao, X., Zhang, D., Xu, R. An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry. J. Vis. Exp. (193), e65291, doi:10.3791/65291 (2023).

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