C'est un protocole décrivant la façon d'isoler et de culture primaire de neurones sympathiques des ganglions cervicaux supérieurs (GCS) de ratons nouveau-né.
Abstract
Les ganglions cervicaux supérieurs (GCS) chez les rats sont petites, brillant, en forme d'amande structures qui contiennent des neurones sympathiques. Ces neurones fournissent innervations sympathiques pour la tête et du cou et ils constituent une population bien caractérisés et relativement homogène (4). Neurones sympathiques sont tributaires du facteur de croissance nerveuse (NGF) pour la croissance de survie, la différenciation et axonale et la généralisation de la disponibilité du NGF facilite leur culture et leur manipulation expérimentale (2, 3, 6). Pour ces raisons, des cultures de neurones sympathiques ont été utilisés dans un large éventail d'études, y compris le développement neuronal et la différenciation, les mécanismes de mort cellulaire programmée et pathologiques, et la transduction du signal (1, 2, 5 et 6). Disséquer la CTB à partir de rats nouveau-nés et les neurones sympathiques en culture n'est pas très compliqué et peut être maîtrisé assez rapidement. Dans cet article, nous allons décrire en détail comment disséquer la CTB de ratons nouveau-nés et à les utiliser pour établir des cultures de neurones sympathiques. L'article décrit également les étapes préparatoires et les différents réactifs et du matériel qui sont nécessaires pour atteindre cet objectif.
Protocol
1. Préparation à la dissection: Sélectionnez la boîte de culture approprié (10 cm ou des plaques 6 puits ou 24 puits, etc) selon la nature de vos expériences, et les enduire de collagène de queue de rat 24 heures avant la dissection. Les méthodes de préparation de collagène de queue de rat et l'utiliser pour des boîtes de culture manteau ont été décrites ailleurs (1). Préparer une solution de trypsine à 0,25% en tampon phosphate salin (PBS) (sans EDTA) et stériliser par filtratio…
Discussion
Nous utilisons des rats Sprague-Dawley pour nos cultures.
Prenez le temps et les soins lors du nettoyage des ganglions. Enlever tous les débris, les vaisseaux sanguins et de graisse. Cette étape est importante pour assurer une culture qui est plus ou moins homogènes et de types de cellules étrangères. L'ajout de uridine/5-FDU éliminera largement toutes les cellules restantes non-neuronales (mitose) contaminent la culture ou au moins supprimer leur prolifération.
En outre, durant l'étape de dissociation, être…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
NZ tiens à remercier les membres du laboratoire Subhas Biswas, Andrew Sproul, et Ryan Willet pour sa formation en disséquant et la récolte neurones sympathiques. Soutenu par des subventions du NIH-NINDS.
Zareen, N., Greene, L. A. Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG). J. Vis. Exp. (23), e988, doi:10.3791/988 (2009).