Bu, yeni doğmuş sıçan yavruların üstün servikal ganglion (SCG) birincil sempatik nöronlar izole ve kültür nasıl açıklayan bir protokoldür.
Abstract
Sıçanlarda üstün servikal ganglion (SCG), sempatik nöronlar içeren küçük, parlak, badem biçimli yapılar. Bu nöronlar, baş ve boyun bölgeleri için sempatik innervations sağlamak ve iyi karakterize ve görece homojen bir nüfus (4) oluşturmaktadır. Sempatik nöronlar NGF, kullanılabilirlik, kendi kültür ve deneysel manipülasyon (2, 3, 6) kolaylaştırır, hayatta kalma, farklılaşma ve aksonal büyüme ve yaygın sinir büyüme faktörü (NGF) bağlıdır. Bu nedenlerden dolayı, kültürlü, sempatik nöronlar nöronal gelişim ve farklılaşma, ve patolojik programlanmış hücre ölümü mekanizmaları ve sinyal iletimi (1, 2, 5 ve 6) da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede çalışmalar kullanılmaktadır. Yeni doğan sıçan ve kültür sempatik nöronlar SCG Diseksiyon çok karmaşık değildir ve oldukça hızlı bir şekilde üstesinden gelinebilir. Bu makalede, yeni doğan sıçan yavrular SCG incelemek ve sempatik nöronların kültürleri kurmak için bunları kullanmak için ne kadar detaylı bir şekilde anlatacağız. Makalede ayrıca, hazırlık adımları ve bunu başarmak için gerekli olan çeşitli reaktifler ve ekipman anlatacağız.
Protocol
1. Diseksiyon için hazırlanması: Uygun kültür deneyler doğa bağlı olarak çanak (10 cm veya 6-iyi ya da 24 kuyu tabak, vb), ve sıçan kuyruklu kollajen 24 saat diseksiyonu önce ceket seçin. Sıçan kuyruğu kollajen hazırlanması ve kat kültür yemekleri kullanarak yöntemleri (1) başka bir yerde tarif edilmiştir. % 0.25 tripsin çözüm hazırlayın fosfat tamponlu salin (PBS) (hiçbir EDTA) ve sterilize. -20 º C'de 1 ml alikotları ve mağaza hazırlayın Distile / dei…
Discussion
Biz kültürlerin Sprague Dawley rat kullanın.
Ganglionlar temizlik zaman ve özen. Tüm artıkları, kan damarları ve yağ çıkarın. Bu adım, daha az ya da çok homojen ve gereksiz hücre tiplerinin bir kültür sağlanmasında önemlidir. Uridine/5-FDU eklenmesi, büyük ölçüde kültür kirlenmesine kalan (mitotik) non-nöronal hücrelerin ortadan kaldırılması ya da en azından onların çoğalmasını baskıladığı.
Buna ek olarak, ayrışma adım sırasında, sabırlı olun ve plakalar üzerine numaralı ser…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
NZ sempatik nöronlar diseksiyon ve hasat onu eğitim için laboratuar üyeleri Subhas Biswas, Andrew Sproul ve Ryan Willet teşekkür etmek istiyorum. NIH-NINDS gelen bağışlarla desteklenir.
Zareen, N., Greene, L. A. Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG). J. Vis. Exp. (23), e988, doi:10.3791/988 (2009).