쥐 우수한 자궁암 신경 (SCG)에서 Culturing 교감 신경에 대한 프로토콜
Summary
이것은 갓 태어난 새끼 쥐의 우수한 경추 신경 (SCG)에서 기본 교감 신경을 분리하고 문화하는 방법을 설명하는 프로토콜입니다.
Abstract
쥐에서 우수 자궁 경부 신경 (SCG)은 교감 신경을 포함 작은 광택, 아몬드 모양의 구조입니다. 이들 뉴런은 머리와 목 지역에 대한 공감 innervations를 제공하고 그들은 잘 특징과 비교적 균질 인구 (4) 구성합니다. 교감 신경이 NGF의 가용성은 그들의 문화와 실험 조작 (2, 3, 6)을 용이하게 생존, 분화 및 axonal 성장과 넓은 확산에 대한 신경 성장 인자 (NGF)에 따라 달라집니다. 이러한 이유로, 교양 교감 신경이의 연결을 개발 및 분화, 프로그램 및 병리 학적 세포 죽음의 메커니즘 및 신호 전달 (1, 2, 5, 6)를 포함하여 연구의 다양한 사용되었습니다. 신생아 쥐 및 culturing 교감 신경에서 SCG를 해부하는 것은 매우 복잡하지 않으며 매우 빠르게 마스터하실 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는 신생아 쥐 새끼에서 SCG을 해부하다하고 교감 신경의 문화를 확립하기 위해 그들을 사용하는 방법을 자세히 설명합니다. 이 문서는 또한 준비 단계와이를하는 데 필요한 다양한 시약과 장비를 설명합니다.
Protocol
Discussion
우리는 우리의 문화 스프 라그 돌리 쥐를 사용합니다.
신경 청소 때 시간과주의를 가져가라. 모든 파편, 혈관과 지방을 제거합니다. 이 단계는 더 많거나 적은 균일한과 관계없는 세포 종류의 무료 문화 확보에 중요합니다. uridine/5-FDU의 추가는 크게 문화를 오염 나머지 (mitotic) 이외의 연결을 세포를 제거하거나 적어도 증식을 억제합니다.
또한, 분리 단계 동안 인내심을하고는 접시에 씨앗되면 그들?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
NZ, 동정 뉴런을 해부하고 수확에서 그녀를 훈련 연구소 회원 Subhas Biswas, 앤드류 스프 라울, 그리고 라이언 윌렛 감사하고 싶습니다. NIH – NINDS에서 교부금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps, Stainless steel #5 | Tool | Roboz | RS4976 | |
| Scissors, DEAVER straight sharp-blunt- 43mm blades – 5.5 | Tool | Roboz | RS6760 | |
| RPMI 1640 w/ L-Glutamin | Reagent | Cellgro, Mediatech, Inc. | 10-040-CV | |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | SAFC Biosciences | 12103c | |
| Donor Horse Serum | Reagent | JRH Biosciences | 12449 | Heat-inactivate by incubating in 56°C waterbath for 30 minutes. |
| Penicillin/streptomycin | Reagent | Gibco, Invitrogen | 15140-122 | |
| Trypsin without EDTA | Reagent | Difco | MT 25-050-CI | |
| Uridine | Reagent | Sigma | U3003 | |
| 5-Fluoro-5′ deoxyuridine | Reagent | Sigma | F-8791 | |
| NGF | Reagent | Harlan Bioproduct | BT-5025 | |
| Dissection Microscope and light source | Microscope | |||
| 15 ml polypropylene tubes | Tool | BD Falcon | 352096 | |
| Cell culture dishes | Tool | Corning, Nunclone |
References
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- Biswas, S. C., Shi, Y., Sproul, A., Greene, L. A. Pro-apoptotic Bim Induction in Response to Nerve Growth Factor Deprivation Requires Simultaneous Activation of Three Different Death Signaling Pathways. The Journal of Biological Chemistry. 282 (40), 29368-29374 (2007).
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