هذا هو بروتوكول تصف كيفية عزل الخلايا العصبية والثقافة متعاطفة الأساسي من العقد العنقية العليا (SCG) من الفئران الوليدة الوليد.
Abstract
في العقد متفوقة عنق الرحم (SCG) في الفئران ، لامعة صغيرة ، لوزية الشكل الهياكل التي تحتوي على الخلايا العصبية المتعاطفة. هذه الخلايا العصبية توفير innervations متعاطفة عن الرأس والعنق والمناطق التي يشكل عدد سكانها جيدا ، وتتميز متجانسة نسبيا (4). الخلايا العصبية المتعاطفة تعتمد على عامل نمو الاعصاب (نيسان الخليج) لتحقيق النمو والبقاء التمايز والمحاور وانتشرت على نطاق وتوافر NGF يسهل ثقافتهم والتلاعب التجريبية (2 ، 3 ، 6). لهذه الأسباب ، فقد تم استخدام الخلايا العصبية المتعاطفة مثقف في طائفة واسعة من الدراسات بما في ذلك تطوير الخلايا العصبية والتفرقة ، وآليات للموت الخلايا المبرمج والمرضية ، ونقل الإشارة (1 ، 2 ، 5 ، و 6). تشريح خارج SCG من الفئران حديثي الولادة وزراعة الخلايا العصبية المتعاطفة ليست معقدة للغاية ويمكن أن تتقن بسرعة إلى حد ما. في هذه المقالة ، فإننا سوف تصف بالتفصيل كيفية تشريح خارج SCG من الفئران الوليدة الوليد واستخدامها لإنشاء الثقافات من الخلايا العصبية المتعاطفة. وتصف المقالة أيضا الخطوات التحضيرية والكواشف والمعدات المختلفة التي يحتاجها لتحقيق ذلك.
Protocol
1. التحضير للتشريح : حدد طبق الثقافة المناسبة (10 سم أو 6 لوحات جيدا أو جيدا 24 ، الخ.) تبعا لطبيعة من التجارب الخاصة بك ، ومعطف لهم ذيل فأر 24 ساعة قبل تشريح الكولاجين. وقد وصفت وسائل لاعداد الجرذان ذيل الكولاجين واستخدامها ل…
Discussion
نستخدم سبراغ داولي الفئران لثقافاتنا.
يستغرق وقتا طويلا والحذر عند تنظيف العقد. إزالة جميع السفن الحطام في الدم ، والدهون. هذه الخطوة هامة في ضمان وجود الثقافة التي هي أكثر أو أقل متجانسة وخالية من أنواع الخلايا الدخيلة. وإضافة إلى حد كبير uridine/5-FDU القضا…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ونيوزيلندي أود أن أشكر أعضاء مختبر سوبهاس بيسواس ، سبرول أندرو ، ويليت ريان على تدريبها في تشريح وحصاد الخلايا العصبية المتعاطفة. بدعم من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة ، NINDS.
Zareen, N., Greene, L. A. Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG). J. Vis. Exp. (23), e988, doi:10.3791/988 (2009).