Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי להתחיל, להתחיל על ידי התייבשות ייבוש מדגם קבוע כדי להפחית עיוות מדגם שנגרם על ידי הסרת גזים ומים נוזליים בלחץ ההפעלה המופחת של מיקרוסקופים אלקטרונים סריקה קונבנציונלית, SEMs.
כדי לייבש את המדגם, לשטוף אותו עם ריכוזים הולכים וגדלים של אתנול במים עד 100% אתנול הוא הגיע. ואז לחזור על תהליך זה עם חומר ייבוש כימי באתנול עד המדגם נשטף עם סוכן ייבוש טהור.
לאחר מכן, הר את המדגם המוכן על החלק העליון של ספח מיקרוסקופ באמצעות סרט דבק פחמן. לבסוף, להחיל צבע כסף על הקצוות של הספח, ולאחר מכן מקצה הספח לכל אחת מהדגימות, כדי להפחית את הצטברות של אלקטרונים עודפים, אשר יכול לגרום חפצי תמונה לא רצויים.
בניסוי זה, זבובי פירות, Drosophila melanogaster, מוכנים לניתוח SEM באמצעות HMDS סוכן ייבוש.
- כדי להכין Drosophila melanogaster, לטבול זבובים מורדמים ב 1 מיליליטר של תיקון במשך 2 שעות ב 4 מעלות צלזיוס, לוודא שהם שקועים לחלוטין.
השתמש פיפטה זכוכית כדי להסיר את fixitive. לשטוף את מדגם Drosophila קבוע בצינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר שלוש פעמים עם 1 מיליליטר של 0.1 פוספט טוחנת חיץ pH 7.2 בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. השתמש פיפטה זכוכית כדי להסיר כל לשטוף, נזהר לא להסיר את המדגם.
ואז לייבש את המדגם בצינור microfuge, בנפח של 1 מיליליטר, באמצעות סדרת אתנול מדורגת במשך 10 דקות כל אחד. השתמש פיפטה זכוכית כדי להסיר כל לשטוף, נזהר לא להסיר את המדגם.
כדי לבצע ייבוש כימי של הזבובים באמצעות HMDS, ראשית, להחליף את הפתרון 100% אתנול עם פתרון 1 עד 2 של HMDS ו 100% אתנול במשך 20 דקות. לאחר מכן להחליף את הפתרון עם פתרון 2 עד 1 של HMDS ו 100% אתנול במשך 20 דקות. לבסוף, להחליף פתרון זה עם 100% HMDS במשך 20 דקות, ולאחר מכן לחזור על התהליך פעם אחת.
העבר את הדגימה, שנמצאת בצינור מיקרוצנטריפוגה 1.5 מיליליטר וHMDS, לתוך צלחת שקילה מאלומיניום חד פעמית. החלף את 100% HMDS עם מספיק טרי 100% HMDS כדי לכסות את המדגם.
כדי להרכיב Drosophila תווית החלק התחתון של stub הרכבה אלומיניום. השתמש פינצטה מדויקת כדי למקם את הזבובים המיובשים במיקום הרצוי על כרטיסיית דבק פחמן מאובטח לחלק העליון של בדל תחת מיקרוסקופ ניתוח.
השתמשו בקיסם כדי לחבר את צבע הכסף לזבובים, להבטיח מוליכות, לוודא שהצבע לא נוגע באזור ההדמיה הרצוי.
