Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 먼저, 기존의 스캐닝 전자 현미경, SEM의 감소된 작동 압력에서 가스 및 액체 물의 제거로 인한 시료 왜곡을 줄이기 위해 고정 시료를 탈수하고 건조하는 것으로 시작합니다.
시료를 탈수하기 위해 100% 에탄올에 도달할 때까지 물에 에탄올 농도가 증가하여 세척하십시오.
다음으로, 탄소 접착제 테이프를 사용하여 현미경 스텁 의 상단에 준비 된 샘플을 장착. 마지막으로, 스텁의 가장자리에 은 페인트를 적용 한 다음 각 샘플에 스텁의 가장자리에서, 과도한 전자의 축적을 줄이기 위해 바람직하지 않은 이미지 아티팩트를 초래할 수 있습니다.
이 실험에서, 과일 파리, 드로소필라 멜라노가스터, 건조 제 HMDS를 사용하여 SEM 분석을 위해 준비된다.
- Drosophila 멜라노가스터를 준비하기 위해, 4섭씨에서 2 시간 동안 고정의 1 밀리리터에 마취 된 파리를 몰입하여 완전히 물에 잠겼습니다.
유리 파이펫을 사용하여 고정된 것을 제거하기 위해 고정 된 Drosophila 샘플을 1.5 밀리리터 미세 센실분리기 튜브에 3 번 세척하여 실온에서 0.1 개의 어금반 인산염 버퍼 pH 7.2로 10 분 동안 각 세척을 제거하십시오.
그런 다음 마이크로퍼지 튜브에서 샘플을 탈수시키고, 1 밀리리터의 부피로, 각각 10분 동안 등급에 등급이 매겨진 에탄올 시리즈를 사용하십시오. 유리 파이펫을 사용하여 각 세척을 제거하고 샘플을 제거하지 않도록 주의하십시오.
HMDS를 사용하여 파리의 화학 건조를 수행하기 위해 먼저 100% 에탄올 용액을 HMDS 1~2솔루션과 100% 에탄올100%로 20분 간 교체하십시오.
1.5 밀리리터 마이크로센심분리기 튜브와 HMDS에 있는 샘플을 일회용 알루미늄 계량 접시에 옮기. 100% HMDS를 시료를 덮을 수 있는 충분한 신선한 100% HMDS로 교체하십시오.
Drosophila 라벨을 알루미늄 장착 스텁의 바닥으로 표시하려면 정밀 핀셋을 사용하여 말린 파리를 해부 된 현미경으로 스텁 의 상단에 고정 된 탄소 접착제 탭에 원하는 위치에 배치하십시오.
이쑤시개를 사용하여 실버 페인트를 파리에 연결하여 전도도를 보장하여 페인트가 원하는 이미징 영역에 닿지 않도록 합니다.
