幼虫リンパ腺解離:ショ ウジョウバエ ヘモサイト産生器官の分離

-ショウジョウバエメラノガスター幼虫リンパ腺は、ヘモサイトの産生を担当しています,または、幼虫の血中リンパで循環する血液細胞リンパ腺を特定するには、まず全身にヘモリンフを送り込む心の下側血管を見つけ、脳が見つかるまで後部血管を頭に向かって進む。リンパ腺は脳の隣にある小さな多葉構造で、後部血管に隣接する。

主葉を見つけるには、腺の最大のローブを特定します。 このローブには、血球の発達の異なる段階によって定義される3つのゾーンが含まれています。後部血管に最も近い髄質帯には未熟な血球が含まれ、皮質帯には成熟した血球が含まれています。

リンパ腺を解剖するには、解剖顕微鏡、幼虫を操作するための2つの鉗子、および緩衝生理食液が必要です。

この例では、免疫検査で使用するためにリンパ腺を解剖します。

- リンパ腺解離を開始するには、解剖する実験設定ごとに1x PBSの1ミルリットルを24ウェルプレートの1ウェルに加え、使い捨てのトランスファーピペットを使用して、各井戸に0.1%PBSTの1滴を加えます。

幼虫をPBSTドロップに移して解剖してください。後端から約1/4の長さの鉗子、後部側を上に1組持って溶岩を持ち、2番目の鉗子で、キューティクルを最初のペアにすぐに前につかみ、口のフックが露出するまで幼虫のキューティクルを前部にそっと引っ張ります。

キューティクルを離して両鉗子を使って幼虫を二分する。PBSTドロップから後部端を取り除いて捨てる。安定性のためにキューティクルをピン留めし、2番目の鉗子を使って露出した口のフックをつかんでそっと引き出す。

口のフックを保持し、唾液腺、脂肪体、腸などの不要な構造を慎重に取り除き、解剖した組織複合体を口のフックでそっと拾い、氷の上のプレートの井戸に移します。

ティッシュマウントを開始するには、取り付けバッファのドロップをガラススライドに置き、口のフックをハンドルとして使用して、リンパ腺を緩衝液に移します。

慎重に後部容器の下に鉗子の1トンをスライドさせ、取り付けバッファの周囲にそっと引っ張ってリンパ腺を引き出して平らにします。

きれいなカバースリップを取り、慎重に取り付けバッファに下げます。スライドはイメージングの準備ができているか、必要になるまで摂氏4度で保存することができます。