Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי לנתח את בלוטת הטבעת, תצטרך מיקרוסקופ לנתח, שני מלקחיים, מחט מד דק לשמש סכין לנתח, ותמיסה חוצץ.
בלוטת טבעת הזחל היא מבנה אנדוקריני מורכב המכיל שלושה איברים אנדוקריניים שונים. הקורפוס אלאטום יושב במרכז בלוטת הטבעת ומייצר הורמון נעורים, המסדיר את ההתפתחות וההזדקנות. בלוטת הפרות'וריה מקיפה את הקורפוס אלאטום ומרכיבה את רוב המבנה.
בדוגמה זו, ננתח מוחות זחל ובלוטות טבעת עבור אימונוהיסטוכימיה.
- לאחר הכנת הזחלים, התחל את ניתוח הקורס בצלחת של שלושה סנטימטרים מלאה ב- PBS תחת מיקרוסקופ מנותח. ראשית, תפוס את וו הפה במלקחיים. לאחר מכן, באמצעות מספריים זעירים, לנתק את הגוף בערך שליש מהאורך מהקצה הקדמוני.
הכינו עד 20 זחלים באופן זה תוך 10 דקות ולאחר מכן העבירו אותם לפתרון מתקנת. לאחר 30 דקות, שטפו את ההכנות והמשיכו עם immunostaining. לאחר חיסון הזחלים, השתמשו בפיפט חד פעמי כדי להעביר את הדגימות למנה מלאה ב-0.3% PBT.
תחת מיקרוסקופ מנתח, לאחוז את הקוטיקולה או וו הפה עם זוג אחד של מלקחיים.
לאחר מכן, באמצעות מלקחיים, בזהירות להפריד את הוושט ואת המעיים מן המוח- טבעת בלוטת העין דיסק קומפלקס.
- זה די חיוני להשתמש מלקחיים עדינים עם קצוות חדים במהלך הניתוח. אני גם ממליץ בחום לחדד מלקחיים עם אבן שחיקה ארקנסו להביא את הקצוות שלהם יחד ללא כל פערים.
- כדי להעביר את הדגימות, להשתמש micropipette עם קצה נשא רחב. הפקד את הדגימות על מרכז שקופית הזכוכית. לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי למקם את הדגימות על הצדדים הגחוניים שלהם כך בלוטת הטבעת, אשר ממוקם בצד הגבי של המוח, ניתן לדמיין.
