Larval Кольцо Гланд вскрытие: Изоляция развития эндокринных органов от Drosophila

- Чтобы вскрыть кольцевую железу, вам понадобится рассекающий микроскоп, два типса, тонкая калибровочных игла, чтобы служить в качестве вскрытого ножа, и буферный раствор. Найти кольцевую железу, идентифицирует голову личинок, которая содержит крючки для рта. Путешествие по длине личинок, чтобы найти мозг, который находится между грудной клеткой и брюшной сечением.

Личиночно-кольцевая железа является сложной эндокринной структурой, которая содержит три различных эндокринных органа. Корпус аллатум находится в центре кольцевой железы и производит ювенильный гормон, который регулирует развитие и старение. Проторакальная железа окружает корпус аллатума и составляет большую часть структуры. Ecdysone, гормон, участвующий в солоде насекомых, производится этой железой.

В этом примере мы будем вскрывать личиновидные мозги и кольцевые железы для иммуногистохимии.

- После подготовки личинок, начать курс вскрытия в три сантиметра блюдо заполнено PBS под рассечением микроскопа. Во-первых, сцепление рот крючок с типсами. Затем, используя микро-ножницы, разорвать тело примерно на треть длины от передней оконечности. Далее, удерживайте переднюю длину с одной парой типсов и использовать вторую пару, чтобы мягко нажать кончик головы в тело, чтобы в конечном итоге повернуть

Подготовьте до 20 личинок таким образом в течение 10 минут, а затем перенесите их в фиксативный раствор. Через 30 минут промойте препараты и приступайте к иммуностеинированию. После иммуностея личинки используйте одноразовый пипетку для передачи образцов в блюдо, наполненное 0,3% ПБТ.

Под рассечением микроскопа, сцепление кутикулы или рот крючок с одной парой типсов. Затем, используйте 27-го калибра иглы прилагается к одноми миллилитров шприц, как нож, чтобы удалить мозг-кольцо железы глаз дисков комплекса из кутикулы тела, отрезав передний кончик пищевода и глазных дисков.

Далее, используя типсы, тщательно отделяйте пищевод и кишечник от комплекса мозг-кольцевая железа-глазной диск. Вытяните кишечник на заднюю сторону, так как пищевод проходит через мозг над желудочковым нервным шнуром. Наконец, чтобы изолировать комплекс желез головного кольца, тщательно перережьте связи между диском мозга, дисками глаз и дисками ног с помощью иглы.

- Очень важно использовать тонкие миппы с острыми краями во время вскрытия. Я также настоятельно рекомендую вам заточить типсы с арканзасом шлифовальный камень, чтобы принести свои края вместе без каких-либо пробелов.

- Для передачи образцов используйте микропипет с широким наконечником скважины. Депозит образцы на центр стеклянной горки. Затем, использовать типсы для позиционирования образцов на их брюшной стороны, чтобы кольцо железы, которая находится на спинной стороне мозга, могут быть изображены. Далее, наклонить слайд и стереть как можно больше избыточного PBT, как это возможно.