Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For at teste en kvindelig flues præference for æglægning eller ovipositionssteder skal du give en individuel kvindelig flue et valg mellem to forskellige substrater, hvorpå hun kan deponere sine æg i et testkammer. Fluen sammenligner de tilgængelige muligheder og vælger de steder, hun foretrækker, normalt det substrat, der passer bedst til hendes afkom.
Sørg for, at fluen er primet til at lægge mange æg, så der er robuste ægnumre i hvert forsøg. Ved afslutningen af eksperimentet skal du fjerne fluen og tælle æggene på hvert substrat for at bestemme fluens oviposition præference.
I eksempelprotokollen vil vi bruge en højgennemstrømningsanalyse til at teste æglægningspræference for almindelige eller saccharoseholdige agaroseunderlag.
- Fortsæt med forsøget ved at anskaffe tidligere konstruerede akrylæglæggende kamre.
Derefter bedøver hunnerne på en kuldioxidpude og indlæser dem individuelt i hver æglægningsarena. Lad fluerne komme sig i 30 minutter efter kuldioxiden og akklimatisere sig til det nye miljø. Mens fluerne justeres, fyldes et rør med agarose op til 10 milliliter-mærket. Derefter tilberedes et 150 millimolar saccharosesubstrat ved at placere 750 mikroliter af 2 ellar saccharoseopløsning i røret.
Forbered det almindelige substrat på samme måde, men udskift saccharoseopløsningen med destilleret vand. Dernæst fås substratet stykke af kammeret og pipette 1.000 mikroliter af agarose substrat i hvert trug. Sæt agarose til side for at størkne i 30 minutter.
Når agarose substraterne og fluerne er klar, samles alle tre stykker af æglægningskammeret og tag derefter plastpladerne ud. Placer kamrene i flyveinkubatorer natten over.
Bedøve hunner ved at injicere kuldioxid i kammeret.
