Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- For å teste en kvinnelig flues preferanse for egglegging, eller oviposisjonssteder, gi en individuell kvinnelig fly med et valg mellom to forskjellige underlag for å deponere eggene sine i et testkammer. Flyet vil sammenligne de tilgjengelige alternativene og velge stedene hun foretrekker, vanligvis substratet som passer best for hennes avkom.
Forsikre deg om at flyet er primet til å legge mange egg, så det er robuste eggtall i hver studie. På slutten av eksperimentet, fjern flyet og tell eggene på hvert substrat for å bestemme flyets oviposisjonspreferanse.
I eksempelprotokollen vil vi bruke en høy gjennomstrømningsanalyse for å teste eggleggingspreferanse for vanlige eller sukroseholdige agarose substrater.
- Fortsett med eksperimentet ved å skaffe tidligere konstruerte akryl eggleggingskamre. Sett plastplater inn i toppen og last et stykke av kammeret for å fungere som bunnoverflate.
Deretter bedøver du hunnene på en karbondioksidpute, og laster dem individuelt inn i hver eggleggingsarena. La fluene få 30 minutter til å komme seg fra karbondioksidet og akklimatisere seg til det nye miljøet. Mens fluene justerer seg, fyll et rør med agarose opp til 10 millilitermerket. Lag deretter en 150 millimolar sukrose substrat ved å plassere 750 mikroliter 2 molar sukrose løsning i røret. Hold en flaske smeltet 1% agarose i et vannbad.
Forbered det vanlige substratet på samme måte, men erstatt sukroseoppløsningen med destillert vann. Deretter får du substratstykket av kammeret og pipetten 1000 mikroliter av agarose substratet i hvert trough. Sett agarose til side for å størkne i 30 minutter.
Når agarose substratene og fluene er klare, monterer du alle tre delene av eggleggingskammeret og tar deretter ut plastplatene. Plasser kamrene i flyinkubatorer over natten.
Bedøv kvinner ved å injisere karbondioksid i kammeret. Demonter kammeret og kast de bedøvede fluene. Til slutt, ta bilder av eggene for journalføring.
