Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Um die Vorliebe einer weiblichen Fliege für Eiablage oder Eileiterstellen zu testen, bieten Sie einer einzelnen weiblichen Fliege die Wahl zwischen zwei verschiedenen Substraten, auf denen sie ihre Eier in einer Testkammer ablagern können. Die Fliege vergleicht die verfügbaren Optionen und wählt die Standorte aus, die sie bevorzugt, in der Regel das Substrat, das am besten für ihre Nachkommen geeignet ist.
Stellen Sie sicher, dass die Fliege grundiert ist, um viele Eier zu legen, so gibt es robuste Eizahlen in jeder Studie. Am Ende des Experiments, entfernen Sie die Fliege, und zählen Sie die Eier auf jedem Substrat, um die Eiopositionspräferenz der Fliege zu bestimmen.
Im Beispielprotokoll werden wir einen Hochdurchsatz-Assay verwenden, um die Präferenz für die Eiablage für einfache oder saccharosehaltige Agarosesubstrate zu testen.
- Setzen Sie das Experiment fort, indem Sie zuvor konstruierte Acryl-Ei-Verlegekammern erhalten. Setzen Sie Kunststoffplatten in die Oberseite ein und laden Sie ein Stück der Kammer, um als Bodenfläche zu dienen.
Als nächstes befeuchten Sie die Weibchen auf einem Kohlendioxidpad, und laden Sie sie einzeln in jede Eilegende Arena. Lassen Sie die Fliegen 30 Minuten, um sich vom Kohlendioxid zu erholen und sich an die neue Umgebung zu akklimatisieren. Während sich die Fliegen anpassen, füllen Sie ein Rohr mit Agarose bis zur 10-Milliliter-Marke. Bereiten Sie dann ein 150 Millimolar Saccharosesubstrat vor, indem Sie 750 Mikroliter 2 Molar-Saccharose-Lösung in das Rohr legen.
Bereiten Sie das einfache Substrat auf die gleiche Weise vor, ersetzen Sie aber die Saccharoselösung durch destilliertes Wasser. Als nächstes erhalten Sie das Substratstück der Kammer und die Pipette 1.000 Mikroliter des Agarosesubstrats in jeden Trog. Stellen Sie die Agarose beiseite, um sie 30 Minuten lang zu erstarren.
Sobald die Agarosesubstrate und Fliegen fertig sind, alle drei Teile der Eiablagekammer zusammenbauen und dann die Kunststoffplatten herausnehmen. Legen Sie die Kammern über Nacht in Fliegeninkubatoren.
Anästhesisieren Sie Weibchen durch Injektion von Kohlendioxid in die Kammer. Zerlegen Sie die Kammer und entsorgen Sie die anästhesierten Fliegen. Schließlich fotografieren Sie die Eier für die Aufzeichnung.
