ゴナドマイクロインジェクション:C.エレガンスの生殖細胞に直接化合物送達する方法

- 注射の準備のために、ワームピックを使用してアガロースパッドにハロカーボンオイルのトラックを置き、油にワームを置き、寒天パッドにそっと押し込んで固定します。 

キューティクルを通して針をそっと押し込み、目的の核酸または化合物を持つ生殖腺アームを注入します。各生殖腺アームには生殖細胞が含まれており、個々の卵母細胞に発達します。

ワームを注入した後、M9バッファに油を交換してください。ワームが動き始めたら、細菌性食品を含むNGM寒天プレートに移します。

- テキストプロトコルに記載されているように、C.エレガンスとアガロースパッドの調製から始めます。ワームピックを使用して、パッドの片端に沿ってハロカーボンオイルの小さなトラックを敷設します。その後、油でコーティングされたワームピックを使用して、NG寒天プレートから油のトラックにいくつかのワームを持ち上げます。一度に1 つのワームをマウントして注入します。

パッドに取り付けられたら、ワームをワームピックの先端から別の数滴のハロカーボンオイルで重ね、取り付けられたワームを注入顕微鏡に置きます。

高倍率に切り替え、生殖腺アームに隣接する針を再配置し、 中~後半パキテーンの核付近の領域に対応するマイクロマニピュレーターを使用して、針をワームに対して動かし、キューティクルをわずかに押し込み、片手で顕微鏡ステージの側面をタップしてキューティクルを通して針を振り回し、注射ペダルまたはボタンをゆっくりと埋め、注射ミックスで拍動アームに充填し、もう片方のアームでステップを繰り返します。

ワームが注入されたら、アガロースパッドのカバースリップを取り外し、解剖顕微鏡の下に置きます。 M9バッファをピペットしてワームから油を置き換える。寒天からワームを放出するためにこの治療を行う。10分後、ワームが緩衝液の中で叩き回しているとき、引っ張られた毛細管ピペットを使ってOP50細菌を持つNG寒天プレートに移す。 OP50と寒天プレート、25°Cインキュベーターにプレートを転送します。