转导到标签PDX肿瘤细胞：引入伦蒂病毒表达荧光标记到肿瘤细胞体外

伦蒂病毒是一种含有RNA遗传物质的逆转录病毒。这种病毒提供了一种高效和稳定的方法，将转基因引入癌细胞系。首先，在含有表达绿色荧光蛋白（GFP）的伦蒂病毒的管子中加入神经氨酸酶。将管子保持在37摄氏度一小时，以提高病毒的结合效率。

接下来，离心机一个含有肿瘤细胞悬架的管子，形成一个颗粒。添加含有多晶硅的乳腺层介质，以补充细胞。聚苯是一种离子聚合物，可以提高伦蒂维尔感染效率。现在在六井组织培养板中，每口井的肿瘤细胞的最佳数量。将所需的伦蒂病毒量添加到培养板的每个井中。

旋转板混合内容，并保持在37摄氏度96小时与二氧化碳的连续供应。伦蒂病毒进入细胞并释放RNA。病毒反向转录酶将RNA转化为双搁浅DNA，并集成到宿主基因组中。将板放在荧光显微镜下，并监测细胞以成功转导。由于GFP表达，转基因细胞荧光。

在示例协议中，我们将执行 PDX 分离肿瘤细胞与Lentivir载体的转导。

要转导肿瘤细胞，将分离的细胞在两毫升的乳腺介质中分离，进行悬念。计数后，再将细胞离心，用两毫升的乳腺层介质重新注入颗粒，辅以20微升多晶硅。接下来，板2倍10至第五可行的肿瘤细胞每井在超低坚持6井组织培养板和Lentiviral颗粒到细胞的倍数感染10。

将病毒与细胞混合，在37摄氏度和5%的二氧化碳下孵育共生，长达96小时，在头24小时后加入500微升的新鲜乳腺层介质。当至少10%的细胞是GFP阳性时，将转导的细胞从至少一口井转移到冰上15毫升的圆锥管中，用一毫升的乳腺球介质清洗油井。

将洗涤与细胞一起汇集，将肿瘤细胞在 10 毫升 HBSS 和 HEPES 中离心。最后，在冰上50微升的地下基质提取物中补充细胞，并将嵌入的细胞加载到0.5毫升胰岛素注射器中，用于再植。