A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 02:28Fly Cup Preparation and Embryo Collection
- 04:00Embryo Homogenization and Clarification
- 04:48Microtubule Polymerization, Kinesin Binding and Differential Sedimentation of Microtubules and Kinesin
- 06:49Representative Kinesin Purification Results
- 08:29Conclusion
Detta är ett protokoll för att isolera aktiva fulla längd kinesin från<em> Drosophila</em> Embryon för enda molekyl biofysiska studier. Vi visar hur man kan samla in embryon, gör embryot lysatet och polymerisera mikrotubuli (MT). Kinesin renas genom immobilisering den på MTS, spinning ner kinesin-MT komplex, och sedan släppa kinesin från MT via ATP tillägg.
Tags
IsolationPurificationKinesinDrosophila EmbryosMotor ProteinsMicrotubulesSub-cellular LocationsNeurodegenerative DiseasesTherapeutic ApproachesATP HydrolysisPurification ProtocolGeneticsSingle-molecule Biophysical StudiesLaying CupsFemales Per CupOvernight CollectionsBleach DechorionatedHomogenizedLow Speed SpinHigh Speed CentrifugationClarified SupernatantGTP And TaxolPolymerize MTsImmobilized On Polymerized MTsATP AnalogAdenylyl ImidodiphosphateRoom TemperatureMicrotubule Pellet
