Journal
/
/
Protein Purification-libera Metodo di Binding Affinity Determinazione Thermophoresis microscala
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis
DOI:

10:22 min

August 15, 2013

, , , , , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:43Preparation of Cell Lysate
  • 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
  • 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
  • 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
  • 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
  • 09:40Conclusion

Summary

Automatic Translation

Thermophoresis microscala (MST) può essere ampiamente usato per la determinazione di affinità di legame senza purificazione della proteina bersaglio da lisati cellulari. Il protocollo prevede sovraespressione della proteina GFP-fusa, lisi cellulare in condizioni non denaturanti, e la rilevazione di segnale MST in presenza di concentrazioni variabili di ligando.

Related Videos

Read Article