A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:43Preparation of Cell Lysate
- 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
- 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
- 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
- 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
- 09:40Conclusion
Termoforesis microescala (MST) puede ser ampliamente utilizado para la determinación de la afinidad de unión sin la purificación de la proteína diana a partir de lisados celulares. El protocolo implica la sobreexpresión de la proteína GFP-fundido, lisis de las células en condiciones no desnaturalizantes, y la detección de la señal de MST en presencia de concentraciones variables del ligando.
