Journal
/
Biology
/
Protein Purification-fri Metod för bindningsaffinitet Bestämning genom Microscale Thermophoresis
JoVE Journal
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Journal Biology
Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Protein Purification-fri Metod för bindningsaffinitet Bestämning genom Microscale Thermophoresis

DOI:
10.3791/50541-v

•

10:22 min

•

August 15, 2013

•

, , , , , ,
1Cancer and Inflammation Program,National Cancer Institute, 2Basic Science Program,SAIC-Frederick, Inc., 3Departments of Oncology and Radiation Medicine,Georgetown University Medical Center, 4Structural Biophysics Laboratory,National Cancer Institute

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:43Preparation of Cell Lysate
  • 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
  • 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
  • 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
  • 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
  • 09:40Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Microscale thermophoresis (MST) kan ofta används för bestämning av bindningsaffinitet utan rening av målproteinet från cellysat. Protokollet involverar överuttryck av GFP-fuserade proteinet, cellys i icke-denaturerande betingelser, och detektion av MST-signal i närvaro av varierande koncentrationer av liganden.

Tags

Protein PurificationMicroscale ThermophoresisBinding AffinityKD DeterminationGFP-fused ProteinSTAT3Cell LysateNon-denaturing ConditionsDrug DiscoveryProtein Interactions

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

Microvolume proteinkoncentration Fastställande med NanoDrop 2000C Spektrofotometer

Betydelsen av korrekt proteinkoncentration för kinetik och affinitet Bestämning i struktur och funktion Analys

Isolering av labil Multi-proteinkomplex av In vivo Kontrollerad Cellular tvärbindning och Immuno-magnetiska affinitetskromatografi

PAR-Clip - En metod för att identifiera transkriptom hela bindningar på RNA-proteiner

Lipid Blås-medierad affinitetskromatografi med magnetkamera Aktivt cellsortering (LIMACS): en ny metod för att analysera protein-lipid Interaktion

Ortogonal proteinrening underlättas av en liten Bispecific Affinity Tagg

Identifiering av Protein Samverkande Partners Använda Tandem Affinity Purification

Realtid Analyser av Retinol Transport från membranreceptor av plasma Retinol Binding Protein

En känslig och specifik Kvantifiering Metod för fastställande av Serum Cardiac Myosin Binding Protein-C av elektrokemiluminiscens Immunoassay

Identifiera protein-proteininteraktion i<em> Drosophila</em> Vuxen Heads av Tandem Affinity Purification (TAP)

Read Article