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Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis
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Protein Purification méthode sans la détermination de l'affinité de liaison par thermophorèse Microscale

DOI:
10.3791/50541-v

•

10:22 min

•

August 15, 2013

•

, , , , , ,
1Cancer and Inflammation Program,National Cancer Institute, 2Basic Science Program,SAIC-Frederick, Inc., 3Departments of Oncology and Radiation Medicine,Georgetown University Medical Center, 4Structural Biophysics Laboratory,National Cancer Institute

Chapters

  • 00:05Title
  • 01:43Preparation of Cell Lysate
  • 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
  • 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
  • 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
  • 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
  • 09:40Conclusion

Summary

Automatic Translation

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Thermophorèse Microscale (MST) peut être largement utilisé pour la détermination de l'affinité de liaison sans purification de la protéine cible à partir de lysats cellulaires. Le protocole implique une surexpression de la protéine GFP-condensé, la lyse des cellules dans des conditions non dénaturantes, et la détection des signaux HNR en présence de concentrations variables du ligand.

Tags

Protein PurificationMicroscale ThermophoresisBinding AffinityKD DeterminationGFP-fused ProteinSTAT3Cell LysateNon-denaturing ConditionsDrug DiscoveryProtein Interactions

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