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Protein Purification méthode sans la détermination de l'affinité de liaison par thermophorèse Microscale
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Biology
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JoVE Journal Biology
Protein Purification-free Method of Binding Affinity Determination by Microscale Thermophoresis
DOI:

10:22 min

August 15, 2013

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Chapters

  • 00:05Title
  • 01:43Preparation of Cell Lysate
  • 03:20Determination of Optimal Lysate Dilution
  • 04:02Microscale Thermophoresis Binding Studies
  • 07:05Microscale Thermophoresis Data Analysis
  • 08:25Results: Measuring the Affinity of Non-phosphorylated STAT3 Protein Binding to Oligonucleotides
  • 09:40Conclusion

Summary

Automatic Translation

Thermophorèse Microscale (MST) peut être largement utilisé pour la détermination de l'affinité de liaison sans purification de la protéine cible à partir de lysats cellulaires. Le protocole implique une surexpression de la protéine GFP-condensé, la lyse des cellules dans des conditions non dénaturantes, et la détection des signaux HNR en présence de concentrations variables du ligand.

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