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Reconstitution fonctionnelle et Activité du Chan mesures de type sauvage purifiée et Mutant protéine CFTR

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Functional Reconstitution and Channel Activity Measurements of Purified Wildtype and Mutant CFTR Protein

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Reconstitution fonctionnelle et Activité du Chan mesures de type sauvage purifiée et Mutant protéine CFTR

DOI:

10.3791/52427-v

•

09:59 min

•

March 09, 2015

•

Paul D. W. Eckford, Canhui Li, Christine E. Bear^2,3

¹Programme in Molecular Structure and Function,Hospital for Sick Children, ²Department of Biochemistry,University of Toronto, ³Department of Physiology,University of Toronto

Chapters

00:05Title
02:05Reconstitution of CFTR in Liposomes
04:22Measurement of the Iodide Efflux from Reconstituted CFTR in Liposomes
07:29Results: Modulation of CFTR Activity by Small Molecule Inhibitors and Potentiators
08:54Conclusion

Summary

Automatic Translation

Décrit ici est un procédé rapide et efficace pour la reconstitution fonctionnelle de type sauvage purifiée et une protéine de CFTR mutante qui conserve l'activité de ce canal de chlorure, qui est défectueux dans la fibrose kystique. Efflux d'iodure de protéoliposomes reconstituées médiées par CFTR permet des études de l'activité du canal et les effets de petites molécules.

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Coloration des protéines dans les gels de Coomassie G-250, sans solvant et l'acide acétique organique

Utiliser le système de fractionnement GELFREE 8100 pour les Poids Moléculaire à base de fractionnement avec récupération de la phase liquide

Reconstitution biochimique des récepteurs stéroïdiens • complexes de protéines Hsp90 et la réactivation de la liaison du ligand

Application de la MassSQUIRM pour des mesures quantitatives de l'activité Déméthylase Lysine

Précipitation par affinité des actifs des Rho GEF l'aide d'un TPS-étiqueté Mutant Rho protéines (TPS-RhoA (G17A)) à partir de lysats cellulaires épithéliales

Souris îlot de Langerhans isolement à l'aide d'une combinaison de la collagénase purifiée et protéase neutre

Reconstitution d'un canal Kv dans les membranes lipidiques des études structurales et fonctionnelles

Démonstration de protéolytique activation du canal sodique épithélial (ENaC) en combinant les mesures actuelles avec la détection de fragments de clivage

Reconstitution fonctionnelle et Activité du Chan mesures de type sauvage purifiée et Mutant protéine CFTR

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Utiliser le système de fractionnement GELFREE 8100 pour les Poids Moléculaire à base de fractionnement avec récupération de la phase liquide

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